Redian新闻
>
包子求3xFlag CHIP-Seq protocol
avatar
h*3
2
今年二月份我和我一个实验室的朋友约好开始找工作。到今天这位老兄已经14投8中
4offers。而我10投5中0offer。 真的是嫉妒羡慕加无比郁闷阿。
avatar
l*n
3
还没动静?
avatar
C*W
4
我今年5月到7月接别人的lease住在这个公寓三个月,没有deposit,我是4月30号签的
lease,把家具搬进去,第二天就回
国了,前任房客5月8号左右搬走的。我6月20号才进去住。进去的时候房间很脏,还有
蜘蛛网虫子什么的,很大的味道(因
为前房客养狗),也没有填check in list。
7月底搬出去的时候,我和bf两人花了一整天打扫过房间,搬走之后跟office说一起去
check out,office的人说不用了我们自
己check out完了给你寄账单,我跟他们要最后一个月的电费账单,他们也说到时候一
起寄过来,我就走了。过了大概有一个
多月,收到信,除了电费90以外还有一大堆有的没的一共520.(包括utilities
revenue 100, replaced drip pans 10, no
attempt made to clean 100, carpet clean 40, unit paint 100, ozone treatment
85.)而且把我的lease日期写成一年
的,完全cover了前任房客的。我只把电费付了,其他的写了一封certified mail
letter回去argue,后来就没声了。
直到今晚又接到电话说要我周一前付钱,不然交collection agency。还说给我寄了两
封信,我对天发誓我没再收到过任何他
们的信。现在真的不知道怎么办了。我才刚来美国一年半不到,不想因此影响自己的
credit,以后还指望贷款买车呢呜呜。。

请版上的xdjms帮忙指点一下我该怎么和office argue。我连那个utilities revenue和
ozone treatment是什么都不知道。那
个unit paint不应该算normal wear吗?还有地毯我都已经吸过了的。炉灶我也都擦过
的。我搬走的时候比搬进去的时候干净
多了。真的很害怕,求大家帮帮忙……
avatar
l*i
5
请问有人用过3xFlag做CHIP-Seq么?可以给个Protocol么(未经许可,不会传阅)?
多谢
avatar
i*r
6
这个焦糖做的好,一看就不苦
上次我不小心过了点,变成苦糖布丁了T_T
avatar
s*n
7
什么专业

【在 h******3 的大作中提到】
: 今年二月份我和我一个实验室的朋友约好开始找工作。到今天这位老兄已经14投8中
: 4offers。而我10投5中0offer。 真的是嫉妒羡慕加无比郁闷阿。

avatar
g*z
8
我也着急的等着呢。也是这个月current
avatar
a*o
9
你签了lease,在签的时候没有让前房客写各种东西, 其实就相当于把前房客所有的
liability take了. 莫法,租房纠纷是没个来美的人必修课.你可以有几个做法
1. 找学校的free law consultant,让他们给你看下你签的lease有没有漏洞可钻
2. 看下这个charge 可以讨价还价的地方
3. 即使collection来了, 也没什么, 在跟collection公司打交道,讨价还价,伏一点,然
后把collection 消掉.只要clear 了,信用很快就回涨回去的.

【在 C*****W 的大作中提到】
: 我今年5月到7月接别人的lease住在这个公寓三个月,没有deposit,我是4月30号签的
: lease,把家具搬进去,第二天就回
: 国了,前任房客5月8号左右搬走的。我6月20号才进去住。进去的时候房间很脏,还有
: 蜘蛛网虫子什么的,很大的味道(因
: 为前房客养狗),也没有填check in list。
: 7月底搬出去的时候,我和bf两人花了一整天打扫过房间,搬走之后跟office说一起去
: check out,office的人说不用了我们自
: 己check out完了给你寄账单,我跟他们要最后一个月的电费账单,他们也说到时候一
: 起寄过来,我就走了。过了大概有一个
: 多月,收到信,除了电费90以外还有一大堆有的没的一共520.(包括utilities

avatar
M*r
10
pls refer http://www.nature.com/ncb/journal/v15/n4/full/ncb2702.html?WT.ec_id=NCB-201304
most important is ab.
Yi Zhang used F7452 sigma. nobody won't trust yi zhang ..
ChIP-seq sample preparation.
For Kdm2b ChIP, Kdm2b Flag-tag knock-in mESCs were fixed with 2 mM
ethylene glycol bis(succinimidylsuccinate) (Thermo Scientific) for 1 h
, followed by 10 min in 1% formaldehyde and 5 min in 0.125 
;M glycine to sequence the reaction. Cells were lysed in 1% SDS, 10 mM
EDTA and 50 mM Tris–HCl (pH 8.0) and the DNA was fragmented to
approximately 200–400 bp by sonification (Branson Sonifier 450).
Immunoprecipitation was performed with 5 μg rabbit polyclonal anti-
Flag (F7425, Sigma), 5 μl rabbit polyclonal Ring1b antibody (5694,
Cell Signaling Technology) and 5 μl rabbit polyclonal Ezh2 antibody (
5246, Cell Signaling Technology) overnight at 4 °C. Antibody-bound
protein was isolated by protein G plus/protein A agarose beads (EMD
Millipore), washed, eluted and reverse cross-linked. DNA was extracted by
phenol/chloroform and precipitated.

【在 l*****i 的大作中提到】
: 请问有人用过3xFlag做CHIP-Seq么?可以给个Protocol么(未经许可,不会传阅)?
: 多谢

avatar
m*0
11

我觉得做焦糖火候最重要
呵呵

【在 i***r 的大作中提到】
: 这个焦糖做的好,一看就不苦
: 上次我不小心过了点,变成苦糖布丁了T_T

avatar
h*3
12
EE

【在 s****n 的大作中提到】
: 什么专业
avatar
j*g
13
Same here.

【在 g*****z 的大作中提到】
: 我也着急的等着呢。也是这个月current
avatar
C*W
14
谢谢你的回复,我还有几个不明白的地方。我签lease是单独跟apartment签的,如果前
房客写,应该写些什么呢?
还有我的lease搬家后被我扔了,呜呜悔。。。当时没想到会这样的。。。
其实比较了下版上的贴,我这个charge不算多的,但是好几项不知道是什么,不知道大
家停过没,我问老美他们也说没听
说。是不是可以让取销这几个?
collection公司打交道好像很专业,不小心说错话就惨了啊?需要找律师吗?
非常感谢你的回复啊!!

【在 a******o 的大作中提到】
: 你签了lease,在签的时候没有让前房客写各种东西, 其实就相当于把前房客所有的
: liability take了. 莫法,租房纠纷是没个来美的人必修课.你可以有几个做法
: 1. 找学校的free law consultant,让他们给你看下你签的lease有没有漏洞可钻
: 2. 看下这个charge 可以讨价还价的地方
: 3. 即使collection来了, 也没什么, 在跟collection公司打交道,讨价还价,伏一点,然
: 后把collection 消掉.只要clear 了,信用很快就回涨回去的.

avatar
l*i
15
Many thanks. Baozi Sent.
Does anyone know whether the M2 antibody works for Flag CHIP?

;h
8201;
mM
to

【在 M********r 的大作中提到】
: pls refer http://www.nature.com/ncb/journal/v15/n4/full/ncb2702.html?WT.ec_id=NCB-201304
: most important is ab.
: Yi Zhang used F7452 sigma. nobody won't trust yi zhang ..
: ChIP-seq sample preparation.
: For Kdm2b ChIP, Kdm2b Flag-tag knock-in mESCs were fixed with 2 mM
: ethylene glycol bis(succinimidylsuccinate) (Thermo Scientific) for 1 h
: , followed by 10 min in 1% formaldehyde and 5 min in 0.125 
: ;M glycine to sequence the reaction. Cells were lysed in 1% SDS, 10 mM
: EDTA and 50 mM Tris–HCl (pH 8.0) and the DNA was fragmented to
: approximately 200–400 bp by sonification (Branson Sonifier 450).

avatar
d*3
16
嗯,看得我这个孕妇都想吃。。。。。
avatar
v*i
17
让他把不要的offer推荐你。。

【在 h******3 的大作中提到】
: 今年二月份我和我一个实验室的朋友约好开始找工作。到今天这位老兄已经14投8中
: 4offers。而我10投5中0offer。 真的是嫉妒羡慕加无比郁闷阿。

avatar
c*o
18
五百多就付了吧,这个事搞起来又费神又费钱,对将来的影响更加无法估计
avatar
M*r
19
no no no never M2 beads.
I compared and it never works.
2 reasons
1. ChIP buffer contains SDS and SDS kills M2 beads (refer to M2 beads
handbook)
2. you never know how much antibody you used. 10 ul of M2 beads perhaps
contain hundreds ug of ab. and saturate your chromatin. you need titration,
but impossible.
you may want to try M2 antibody which is a monoclonal antibody and the same
as the one conjugated with M2 beads.
You could buy M2 antibody and F ... polyclonal antibody and use both. you
could do ChIP-qPCR and compare.
but I suggest you use the one Yi Zhang published.
need more baozi.

【在 l*****i 的大作中提到】
: Many thanks. Baozi Sent.
: Does anyone know whether the M2 antibody works for Flag CHIP?
:
: ;h
: 8201;
: mM
: to

avatar
c*e
20
能不能在鸡蛋羹上面铺一层焦糖?有谁做过吗?

【在 m*********0 的大作中提到】
: 昨天做的: http://www.mitbbs.com/article_t0/Food/31852667.html
: 改良版:
: 过筛网以后 更加细腻
: 冷藏以后更加酷!

avatar
f*d
21
what area in ee? master or phd?
avatar
y*n
22
很多是前任房客要付的。你竟然不让clean,不让检查就住进去?
你刚来不懂,怎么也该问问如何做啊。受了委屈还被罚款,只能当上课了。很难argue
的。
下次租房时,一定要进去前要检查,如何微小的问题,都要提出,最好有照片为证据。
avatar
l*i
23
Very helpful. 2 more baozi sent

titration,
same

【在 M********r 的大作中提到】
: no no no never M2 beads.
: I compared and it never works.
: 2 reasons
: 1. ChIP buffer contains SDS and SDS kills M2 beads (refer to M2 beads
: handbook)
: 2. you never know how much antibody you used. 10 ul of M2 beads perhaps
: contain hundreds ug of ab. and saturate your chromatin. you need titration,
: but impossible.
: you may want to try M2 antibody which is a monoclonal antibody and the same
: as the one conjugated with M2 beads.

avatar
o*p
24
用torch,楼主这种方法你是做不成鸡蛋羹的。

【在 c*********e 的大作中提到】
: 能不能在鸡蛋羹上面铺一层焦糖?有谁做过吗?
avatar
C*W
25
谢谢你的建议,这次吸取教训了。上次也是搬得急,我4月30把家具搬进去,第二天的
飞机回国,前房客5月8号才搬走的,
等我6月中旬回来进去住时才发现脏乱不堪,他们根本没有check out清理, 但是理论上
我的lease是从5月1号开始的,所以
也没办法让他们清扫了,真的很后悔当初的决定……

argue

【在 y******n 的大作中提到】
: 很多是前任房客要付的。你竟然不让clean,不让检查就住进去?
: 你刚来不懂,怎么也该问问如何做啊。受了委屈还被罚款,只能当上课了。很难argue
: 的。
: 下次租房时,一定要进去前要检查,如何微小的问题,都要提出,最好有照片为证据。

avatar
m*0
26

你可以尝试下,反正焦糖是先铺在底部然后再蒸的,我觉得应该可以

【在 c*********e 的大作中提到】
: 能不能在鸡蛋羹上面铺一层焦糖?有谁做过吗?
avatar
m*y
27
看惯你老总是一副倒地吐血的无赖样 没想到关键时刻这么犀利
To LZ,认栽其实不吃大亏。以后贷款时记录好 利率低点就都回来。我也不反对
你打官司 只是打官司有风险。只要想想为什么那么多大公司都花大钱庭外和解 就知
道了 你再有理 再有资源 都没有绝对的胜算。

【在 c****o 的大作中提到】
: 五百多就付了吧,这个事搞起来又费神又费钱,对将来的影响更加无法估计
avatar
o*p
28
鸡蛋羹扣不出来。

【在 m*********0 的大作中提到】
:
: 你可以尝试下,反正焦糖是先铺在底部然后再蒸的,我觉得应该可以

avatar
k*t
29
做人似乎不要太狡猾哦

【在 m***y 的大作中提到】
: 看惯你老总是一副倒地吐血的无赖样 没想到关键时刻这么犀利
: To LZ,认栽其实不吃大亏。以后贷款时记录好 利率低点就都回来。我也不反对
: 你打官司 只是打官司有风险。只要想想为什么那么多大公司都花大钱庭外和解 就知
: 道了 你再有理 再有资源 都没有绝对的胜算。

avatar
g*A
30
滑嫩······
avatar
m*y
31
忘了说了 千万别付给collection 这样还是会影响记录
可以付给房东 叫他们通知collection
avatar
H*H
32
好搀我这个吃货啊 :)
收藏了。
比我平时做的方子容易多了。

【在 m*********0 的大作中提到】
: 昨天做的: http://www.mitbbs.com/article_t0/Food/31852667.html
: 改良版:
: 过筛网以后 更加细腻
: 冷藏以后更加酷!

avatar
C*W
33
嗯,谢谢你,我打算周一去他们那,尽量减少bill,实在不行就给钱吧

【在 m***y 的大作中提到】
: 忘了说了 千万别付给collection 这样还是会影响记录
: 可以付给房东 叫他们通知collection

avatar
c*e
34
今天忍不住买了个2块5的cheese cake,真好吃。

【在 m*********0 的大作中提到】
: 昨天做的: http://www.mitbbs.com/article_t0/Food/31852667.html
: 改良版:
: 过筛网以后 更加细腻
: 冷藏以后更加酷!

avatar
c*o
35
分特,啥时候俺给大家留下无赖的影响了?

【在 m***y 的大作中提到】
: 看惯你老总是一副倒地吐血的无赖样 没想到关键时刻这么犀利
: To LZ,认栽其实不吃大亏。以后贷款时记录好 利率低点就都回来。我也不反对
: 你打官司 只是打官司有风险。只要想想为什么那么多大公司都花大钱庭外和解 就知
: 道了 你再有理 再有资源 都没有绝对的胜算。

avatar
n*i
36
lz能给个做法吗,看上去真好吃
avatar
n*i
38
请问lz或是其他高手,我今天试着熬焦糖,完全失败。水熬干后,开始冒大泡,但是渐
渐地,糖完全凝固成白霜花那样的形态,颜色只是稍微变黄一点点。根本不能成为那种
咖啡色的液体。是怎么回事呢?
avatar
m*0
39

听着像是还不够火候啊 如果糖还是白色的就是还没到火候 我是用微波炉熬的 感觉比
用炉子的快多了 但是要频繁的检查

【在 n*****i 的大作中提到】
: 请问lz或是其他高手,我今天试着熬焦糖,完全失败。水熬干后,开始冒大泡,但是渐
: 渐地,糖完全凝固成白霜花那样的形态,颜色只是稍微变黄一点点。根本不能成为那种
: 咖啡色的液体。是怎么回事呢?

相关阅读
logo
联系我们隐私协议©2024 redian.news
Redian新闻
Redian.news刊载任何文章,不代表同意其说法或描述,仅为提供更多信息,也不构成任何建议。文章信息的合法性及真实性由其作者负责,与Redian.news及其运营公司无关。欢迎投稿,如发现稿件侵权,或作者不愿在本网发表文章,请版权拥有者通知本网处理。