g*3
2 楼
最近在做蛋白纯化，用的zymogen his6 column，elution完后，用SDS-LB煮了5分分钟
，发现western有若干条带。
实验室的人说是imidazole会降解蛋白。在网上查也有不少人说imidazole会降解蛋白。
请问各位是否遇到这样的问题。
谢谢。
，发现western有若干条带。
实验室的人说是imidazole会降解蛋白。在网上查也有不少人说imidazole会降解蛋白。
请问各位是否遇到这样的问题。
谢谢。
F*N
3 楼
不是公司给你找哪家就哪家么？
不好你也不能怎样啊
不好你也不能怎样啊
s*9
4 楼
没见过imidazole降解蛋白。要排除在细胞内就降解了（或者修饰变大了），或者抗体
有问题。
有问题。
g*r
5 楼
FYI.
http://forums.immigration.com/showthread.php?56394-Immigration-
【在 w*******7 的大作中提到】
: any experience with this crew? Are they honest and good?
http://forums.immigration.com/showthread.php?56394-Immigration-
【在 w*******7 的大作中提到】
: any experience with this crew? Are they honest and good?
g*3
6 楼
谢谢。网上说的倒不是imidazole会降解蛋白，而是imidazole在高温和SDS-LB煮的时候
会降解蛋白。问了周围的人，他们一般都dialysis。不知道synbio79有没有啥好推荐的
dialysis kit。
谢谢。
【在 s******9 的大作中提到】
: 没见过imidazole降解蛋白。要排除在细胞内就降解了（或者修饰变大了），或者抗体
: 有问题。
会降解蛋白。问了周围的人，他们一般都dialysis。不知道synbio79有没有啥好推荐的
dialysis kit。
谢谢。
【在 s******9 的大作中提到】
: 没见过imidazole降解蛋白。要排除在细胞内就降解了（或者修饰变大了），或者抗体
: 有问题。
w*7
7 楼
Wow. Thanks greencar. This guy told my friend that after ur niw approval u
can be ur own petitioner for h1b
can be ur own petitioner for h1b
c*b
9 楼
一般都会有些污染吧，没可能是非常纯的。只要目标蛋白足够富集就好了
【在 g*********3 的大作中提到】
: 最近在做蛋白纯化，用的zymogen his6 column，elution完后，用SDS-LB煮了5分分钟
: ，发现western有若干条带。
: 实验室的人说是imidazole会降解蛋白。在网上查也有不少人说imidazole会降解蛋白。
: 请问各位是否遇到这样的问题。
: 谢谢。
【在 g*********3 的大作中提到】
: 最近在做蛋白纯化，用的zymogen his6 column，elution完后，用SDS-LB煮了5分分钟
: ，发现western有若干条带。
: 实验室的人说是imidazole会降解蛋白。在网上查也有不少人说imidazole会降解蛋白。
: 请问各位是否遇到这样的问题。
: 谢谢。
g*5
10 楼
do you use the miniprep one?
【在 g*********3 的大作中提到】
: 最近在做蛋白纯化，用的zymogen his6 column，elution完后，用SDS-LB煮了5分分钟
: ，发现western有若干条带。
: 实验室的人说是imidazole会降解蛋白。在网上查也有不少人说imidazole会降解蛋白。
: 请问各位是否遇到这样的问题。
: 谢谢。
【在 g*********3 的大作中提到】
: 最近在做蛋白纯化，用的zymogen his6 column，elution完后，用SDS-LB煮了5分分钟
: ，发现western有若干条带。
: 实验室的人说是imidazole会降解蛋白。在网上查也有不少人说imidazole会降解蛋白。
: 请问各位是否遇到这样的问题。
: 谢谢。
i*l
11 楼
in your case,
1. target protein is degraded before chromatography
or
2. 6his affinity chromatography can not purify it well
dialysis does not help in both
to determine if #1==TRUE, western blot using target specific antibody
to improve #2, add one more chromatography (ion exchange, size exclusion,
etc)
【在 g*********3 的大作中提到】
: 谢谢。网上说的倒不是imidazole会降解蛋白，而是imidazole在高温和SDS-LB煮的时候
: 会降解蛋白。问了周围的人，他们一般都dialysis。不知道synbio79有没有啥好推荐的
: dialysis kit。
: 谢谢。
1. target protein is degraded before chromatography
or
2. 6his affinity chromatography can not purify it well
dialysis does not help in both
to determine if #1==TRUE, western blot using target specific antibody
to improve #2, add one more chromatography (ion exchange, size exclusion,
etc)
【在 g*********3 的大作中提到】
: 谢谢。网上说的倒不是imidazole会降解蛋白，而是imidazole在高温和SDS-LB煮的时候
: 会降解蛋白。问了周围的人，他们一般都dialysis。不知道synbio79有没有啥好推荐的
: dialysis kit。
: 谢谢。
g*3
12 楼
yes. Any problem with this kit?
【在 g*********5 的大作中提到】
: do you use the miniprep one?
【在 g*********5 的大作中提到】
: do you use the miniprep one?
g*3
13 楼
Thanks a lot.The problem is we don't have antibody for the protein.I am
using the second tag to tandem purify it and will see.
【在 i***l 的大作中提到】
: in your case,
: 1. target protein is degraded before chromatography
: or
: 2. 6his affinity chromatography can not purify it well
: dialysis does not help in both
: to determine if #1==TRUE, western blot using target specific antibody
: to improve #2, add one more chromatography (ion exchange, size exclusion,
: etc)
using the second tag to tandem purify it and will see.
【在 i***l 的大作中提到】
: in your case,
: 1. target protein is degraded before chromatography
: or
: 2. 6his affinity chromatography can not purify it well
: dialysis does not help in both
: to determine if #1==TRUE, western blot using target specific antibody
: to improve #2, add one more chromatography (ion exchange, size exclusion,
: etc)
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