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问一个　ＩＦ　的问题
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问一个　ＩＦ　的问题# Biology - 生物学
a*n
1 楼
我想探测一个protein 是不是colocalize with gamma-tubulin at centrosome.
发现如果用methanol fixation可以检测到protein在centrosome上，但是用PFA
fixation 就检测不到centrosome上的信号。
不知道应该相信哪一个结果？
谢谢1
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c*a
2 楼
甲醇fix的应该是真的信号。但是你应该要用其他方法验证一下，比如说生化纯化
centrosome。因为centrosome的信号集中在一点，往往g-tubulin的信号太强的话，各
个channel都会有假象信号。PFA好像一般的centrosome staining protocol都不用。
good luck.
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s*r
3 楼
染microtubule用methanol fix，PFA会破坏结构，染不到不奇怪

【在 a*********n 的大作中提到】
: 我想探测一个protein 是不是colocalize with gamma-tubulin at centrosome.
: 发现如果用methanol fixation可以检测到protein在centrosome上，但是用PFA
: fixation 就检测不到centrosome上的信号。
: 不知道应该相信哪一个结果？
: 谢谢1
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f*f
4 楼
两者不一致最好尽量多的途径验证：pfa时加大permeabilization如何？knockdown后中
心体信号消失？与一些已知中心体蛋白生化结合？live cell的定位以及live cell固定
后的定位？等等。

【在 a*********n 的大作中提到】
: 我想探测一个protein 是不是colocalize with gamma-tubulin at centrosome.
: 发现如果用methanol fixation可以检测到protein在centrosome上，但是用PFA
: fixation 就检测不到centrosome上的信号。
: 不知道应该相信哪一个结果？
: 谢谢1
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