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请教蛋白磷酸化的检测

请教蛋白磷酸化的检测# Biology - 生物学

x*n2014-03-24 07:03

1 楼

苦逼做植物的，想看看一个蛋白在某种处理后有没有磷酸化修饰。现在已经有挂了标签
的我的蛋白的转基因植株。初步是想用标签IP下来用磷酸化的抗体来做WB，可是听说常
用的4G10抗体对植物蛋白不怎么好用？有没有谁能推荐一个针对植物蛋白好用的呀？
其实更像用磷酸化的beads把总蛋白里磷酸化了的蛋白拉下来，然后用我的蛋白上的特
异性的标签来做WB，感觉更有说服力。可是没找到这种beads。。。谁有信息的话能否
提供一下呢
谢谢啊

x*n2014-03-24 07:03

2 楼

顶

x*n2014-03-24 07:03

3 楼

没人回答。。。

w*a2014-03-24 07:03

4 楼

你检测什么蛋白？

x*n2014-03-24 07:03

5 楼

终于有人理我了。我检测的是植物的内源蛋白啊，拟南芥的

【在 w******a 的大作中提到】

: 你检测什么蛋白？

m*u2014-03-24 07:03

6 楼

IP 下来直接打质谱就行了吧，在哪个氨基酸磷酸化的都能看出来。

T*u2014-03-24 07:03

7 楼

IP 打质谱不是那么容易的。
IP 下来用p-S, p-T or P-Y抗体做western
or
用phosphotag配gel，直接收cell lysate, western with 标签抗体。
建议你有其他supportive data,再去做这类的实验。
就是，为什么你觉得这个蛋白会有磷酸化？or just have a try?
Good luck

【在 x*********n 的大作中提到】

: 苦逼做植物的，想看看一个蛋白在某种处理后有没有磷酸化修饰。现在已经有挂了标签
: 的我的蛋白的转基因植株。初步是想用标签IP下来用磷酸化的抗体来做WB，可是听说常
: 用的4G10抗体对植物蛋白不怎么好用？有没有谁能推荐一个针对植物蛋白好用的呀？
: 其实更像用磷酸化的beads把总蛋白里磷酸化了的蛋白拉下来，然后用我的蛋白上的特
: 异性的标签来做WB，感觉更有说服力。可是没找到这种beads。。。谁有信息的话能否
: 提供一下呢
: 谢谢啊