d*i
2 楼
他平时爪子中间会有些小肿块,但是没有这次这么严重.以前用双氧水就消下去了
但是这次没用,肿的特别厉害,还破了,他一直舔爪子.
请问有什么药可以上吗?斗牛是不是爪子都有这种毛病?
但是这次没用,肿的特别厉害,还破了,他一直舔爪子.
请问有什么药可以上吗?斗牛是不是爪子都有这种毛病?
i*0
3 楼
最近有发现一个现象。mESCs，用一个gene 的shRNA 处理以后，通过RNA-seq， 发现整
个X 染色体上的gene 都被silence了 （程度不一，但是都在shRNA treated ESCs
samples，都有2-8倍数的reduction）。 这种现象说明了什么？
有没有做X染色体transcription牛牛来说说看？
个X 染色体上的gene 都被silence了 （程度不一，但是都在shRNA treated ESCs
samples，都有2-8倍数的reduction）。 这种现象说明了什么？
有没有做X染色体transcription牛牛来说说看？
h*k
4 楼
想起了英国的苏珊大妈
t*g
5 楼
哎呀，不知道
看着好痛
bless bless！
看着好痛
bless bless！
t*k
6 楼
X chromesome silence？
T*U
7 楼
大叔这是在唱歌还是口技？
m*h
8 楼
看医生吧
【在 d*****i 的大作中提到】
: 他平时爪子中间会有些小肿块,但是没有这次这么严重.以前用双氧水就消下去了
: 但是这次没用,肿的特别厉害,还破了,他一直舔爪子.
: 请问有什么药可以上吗?斗牛是不是爪子都有这种毛病?
【在 d*****i 的大作中提到】
: 他平时爪子中间会有些小肿块,但是没有这次这么严重.以前用双氧水就消下去了
: 但是这次没用,肿的特别厉害,还破了,他一直舔爪子.
: 请问有什么药可以上吗?斗牛是不是爪子都有这种毛病?
l*i
9 楼
有意思。
是female mESC吗？是的话，先做两个实验：
1）H3K27me3 immunostaing：可能发现small dot in nucleus.
2)qRT-PCR测Xist的表达，或者用FISH。
证实的话，就说明出现X chormosome inactivation了。
几个问题：
3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
大新意取决于你的这个gene
2）看一下这个基因的功能，是否已有先关报道，与X chromosome reactivation有关。
是histone modifier, TF还是在X chromsome上的新lncRNA?
是female mESC吗？是的话，先做两个实验：
1）H3K27me3 immunostaing：可能发现small dot in nucleus.
2)qRT-PCR测Xist的表达，或者用FISH。
证实的话，就说明出现X chormosome inactivation了。
几个问题：
3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
大新意取决于你的这个gene
2）看一下这个基因的功能，是否已有先关报道，与X chromosome reactivation有关。
是histone modifier, TF还是在X chromsome上的新lncRNA?
s*h
10 楼
主持人有毛病……申犯人呢？
s*M
11 楼
以我的心理承受能力，都可以加慎入二字在标题里了
我觉得赶紧看vet，避免恶化感染
我觉得赶紧看vet，避免恶化感染
i*0
12 楼
我明天确认一下是不是female 的ESCs。
对于其他的问题：
几个问题：
3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
serum + LIF的培养条件
1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
大新意取决于你的这个gene
如果要看Oct4等gene的表达的话，RNA 水平上看到降低，Protein水平上有20%左右的降
低。但是这些pluripotency的gene在蛋白水平还维持在一个高的状态。
2）看一下这个基因的功能，是否已有先关报道，与X chromosome reactivation有关。
是histone modifier, TF还是在X chromsome上的新lncRNA?
该gene目前的功能还不清楚。另外，我看到Xist gene在shRNA处理想样品中，在RNA水
平上有3倍数的降低。
【在 l*******i 的大作中提到】
: 有意思。
: 是female mESC吗？是的话，先做两个实验：
: 1）H3K27me3 immunostaing：可能发现small dot in nucleus.
: 2)qRT-PCR测Xist的表达，或者用FISH。
: 证实的话，就说明出现X chormosome inactivation了。
: 几个问题：
: 3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
: 1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
: 可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
: cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
对于其他的问题：
几个问题：
3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
serum + LIF的培养条件
1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
大新意取决于你的这个gene
如果要看Oct4等gene的表达的话，RNA 水平上看到降低，Protein水平上有20%左右的降
低。但是这些pluripotency的gene在蛋白水平还维持在一个高的状态。
2）看一下这个基因的功能，是否已有先关报道，与X chromosome reactivation有关。
是histone modifier, TF还是在X chromsome上的新lncRNA?
该gene目前的功能还不清楚。另外，我看到Xist gene在shRNA处理想样品中，在RNA水
平上有3倍数的降低。
【在 l*******i 的大作中提到】
: 有意思。
: 是female mESC吗？是的话，先做两个实验：
: 1）H3K27me3 immunostaing：可能发现small dot in nucleus.
: 2)qRT-PCR测Xist的表达，或者用FISH。
: 证实的话，就说明出现X chormosome inactivation了。
: 几个问题：
: 3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
: 1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
: 可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
: cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
i*i
13 楼
那个胖子评委一口官腔，额滴神
【在 s*********h 的大作中提到】
: 主持人有毛病……申犯人呢？
【在 s*********h 的大作中提到】
: 主持人有毛病……申犯人呢？
s*i
14 楼
yaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa, one of my favorite dogs!!!!!!!!!! so so so
cute. big bless to him/her~~~~
cute. big bless to him/her~~~~
l*i
15 楼
Xist下调是RNA-seq的结果，还是qPCR结果？这一点比较奇怪，与X chromosome
inactivation不一致。
按理说，在mESC中，X chromosome是active的，即XaXa，Xist应该不表达才对。Xist表
达时，会把其中一条X chromosome“包裹”起来，这条chromosome进而失活。X
inactivation一般指发生在female mEpiSC与分化的细胞中.
你这个结果与理论相反，X chromosome基因下调时，Xist竟然也降低。Xist在对照和
knockdown细胞中的表达分别是多少(RPKM or CT value)？
另一个问题，由于你用的培养条件是serum+LIF,这会导致heterogeneity.建议你用2i/
LIF.
knockdown mESC分化明显吗？ colony morphology改变如何，还是依旧维持与WT一样的
形态？
如果你确定用的是female mESCs的话，建议先做H3K27me3 staining,看看X chromosome
是不是失活的。
【在 i*********0 的大作中提到】
: 我明天确认一下是不是female 的ESCs。
: 对于其他的问题：
: 几个问题：
: 3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
: serum + LIF的培养条件
: 1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
: 可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
: cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
: 大新意取决于你的这个gene
: 如果要看Oct4等gene的表达的话，RNA 水平上看到降低，Protein水平上有20%左右的降
inactivation不一致。
按理说，在mESC中，X chromosome是active的，即XaXa，Xist应该不表达才对。Xist表
达时，会把其中一条X chromosome“包裹”起来，这条chromosome进而失活。X
inactivation一般指发生在female mEpiSC与分化的细胞中.
你这个结果与理论相反，X chromosome基因下调时，Xist竟然也降低。Xist在对照和
knockdown细胞中的表达分别是多少(RPKM or CT value)？
另一个问题，由于你用的培养条件是serum+LIF,这会导致heterogeneity.建议你用2i/
LIF.
knockdown mESC分化明显吗？ colony morphology改变如何，还是依旧维持与WT一样的
形态？
如果你确定用的是female mESCs的话，建议先做H3K27me3 staining,看看X chromosome
是不是失活的。
【在 i*********0 的大作中提到】
: 我明天确认一下是不是female 的ESCs。
: 对于其他的问题：
: 几个问题：
: 3) mESC的培养条件？serum,还是2i/LIF?
: serum + LIF的培养条件
: 1）knockdown的mESC是否仍保持未分化状态，还是开始分化了？如果未分化，那么很有
: 可能你发现了一个新的调节X reactivation/inactivation的因子，做深了，至少是
: cell stem cell.如果细胞分化了，那么X chromosome上的genes表达下调不奇怪，有多
: 大新意取决于你的这个gene
: 如果要看Oct4等gene的表达的话，RNA 水平上看到降低，Protein水平上有20%左右的降
s*h
16 楼
不过总觉得唱歌的哥们儿口型对不上
【在 i*i 的大作中提到】
: 那个胖子评委一口官腔，额滴神
【在 i*i 的大作中提到】
: 那个胖子评委一口官腔，额滴神
A*R
17 楼
looks pretty bad...better see vet asap.
i*0
18 楼
是RNA-seq的结果。我也觉得很奇怪，
这一点比较奇怪，与X chromosome
Xist在对照和
这个我要去问一下我们的搞生物信息学的。
ok！
分化不明显。
colony morphology改变如何，还是依旧维持与WT一样的
colony looks like the control shRNA clone。 shiny and clear boundary
【在 l*******i 的大作中提到】
: Xist下调是RNA-seq的结果，还是qPCR结果？这一点比较奇怪，与X chromosome
: inactivation不一致。
: 按理说，在mESC中，X chromosome是active的，即XaXa，Xist应该不表达才对。Xist表
: 达时，会把其中一条X chromosome“包裹”起来，这条chromosome进而失活。X
: inactivation一般指发生在female mEpiSC与分化的细胞中.
: 你这个结果与理论相反，X chromosome基因下调时，Xist竟然也降低。Xist在对照和
: knockdown细胞中的表达分别是多少(RPKM or CT value)？
: 另一个问题，由于你用的培养条件是serum+LIF,这会导致heterogeneity.建议你用2i/
: LIF.
: knockdown mESC分化明显吗？ colony morphology改变如何，还是依旧维持与WT一样的
s*y
19 楼
主持人sb啊
【在 l****f 的大作中提到】
【在 l****f 的大作中提到】
y*o
20 楼
小家伙看着好可怜啊，希望早日康复！！！！
【在 d*****i 的大作中提到】
: 他平时爪子中间会有些小肿块,但是没有这次这么严重.以前用双氧水就消下去了
: 但是这次没用,肿的特别厉害,还破了,他一直舔爪子.
: 请问有什么药可以上吗?斗牛是不是爪子都有这种毛病?
【在 d*****i 的大作中提到】
: 他平时爪子中间会有些小肿块,但是没有这次这么严重.以前用双氧水就消下去了
: 但是这次没用,肿的特别厉害,还破了,他一直舔爪子.
: 请问有什么药可以上吗?斗牛是不是爪子都有这种毛病?
o*i
21 楼
5 楼说得对.mESC XaXa的
我记得naive的mESC是 XaXa的到了primed阶段就变成了XaXi,自然X上的gene有差别.我
忘记这两者之间有哪个gene的变化了.但colony形态上会有差别.
我猜可能你哪个基因跟维持mESC 的naive状态相关.
我记得naive的mESC是 XaXa的到了primed阶段就变成了XaXi,自然X上的gene有差别.我
忘记这两者之间有哪个gene的变化了.但colony形态上会有差别.
我猜可能你哪个基因跟维持mESC 的naive状态相关.
l*f
22 楼
人后来有清唱
【在 s*********h 的大作中提到】
: 不过总觉得唱歌的哥们儿口型对不上
【在 s*********h 的大作中提到】
: 不过总觉得唱歌的哥们儿口型对不上
w*y
23 楼
看医生吧， 可能是什么东西扎进去了
o*i
24 楼
我觉得肯定是female的啊,不用看了.
如果是male的细胞.人家本来就一个x 您还给knockdown了 还让不让细胞活了.细胞没Y
活的好好的,没X死翘翘啊.
如果是male的细胞.人家本来就一个x 您还给knockdown了 还让不让细胞活了.细胞没Y
活的好好的,没X死翘翘啊.
q*x
25 楼
niuren
j*6
26 楼
看着好可怜啊，尤其结合第一张的脸，快去看医生吧.
big bless!
big bless!
s*r
27 楼
你的RNAseq是strand specific的？
不是的话应该没法区分xist和tsix因为它俩有一部分互为antisense，需要做specific
region的qPCR来验证是哪个的变化，可能降低的是tsix那是会激活xi的
【在 i*********0 的大作中提到】
:
: 是RNA-seq的结果。我也觉得很奇怪，
: 这一点比较奇怪，与X chromosome
: Xist在对照和
: 这个我要去问一下我们的搞生物信息学的。
: ok！
: 分化不明显。
: colony morphology改变如何，还是依旧维持与WT一样的
: colony looks like the control shRNA clone。 shiny and clear boundary
不是的话应该没法区分xist和tsix因为它俩有一部分互为antisense，需要做specific
region的qPCR来验证是哪个的变化，可能降低的是tsix那是会激活xi的
【在 i*********0 的大作中提到】
:
: 是RNA-seq的结果。我也觉得很奇怪，
: 这一点比较奇怪，与X chromosome
: Xist在对照和
: 这个我要去问一下我们的搞生物信息学的。
: ok！
: 分化不明显。
: colony morphology改变如何，还是依旧维持与WT一样的
: colony looks like the control shRNA clone。 shiny and clear boundary
s*a
28 楼
同意
主持人表现的很弱智
评委表现更弱智
攻击性的态度对待大叔
一份高高在上的口气
【在 s****y 的大作中提到】
: 主持人sb啊
主持人表现的很弱智
评委表现更弱智
攻击性的态度对待大叔
一份高高在上的口气
【在 s****y 的大作中提到】
: 主持人sb啊
i*0
29 楼
谢谢大家的comment。我再读一下paper，好好的消化一下，再和大家讨论。
i*a
30 楼
这个是真牛
【在 l****f 的大作中提到】
: 人后来有清唱
【在 l****f 的大作中提到】
: 人后来有清唱
a*h
31 楼
这主持人忒SB了
A*r
32 楼
赞！
【在 l****f 的大作中提到】
: 人后来有清唱
【在 l****f 的大作中提到】
: 人后来有清唱
e*3
33 楼
这唱的太牛逼了！唱的驼铃简直和原唱一样，而且最牛的就是讲话一口山东口音，但是
唱歌特标准的普通话。
【在 l****f 的大作中提到】
: 人后来有清唱
唱歌特标准的普通话。
【在 l****f 的大作中提到】
: 人后来有清唱
i*o
34 楼
主持人和评委全市sb，鉴定完毕
b*a
35 楼
樵字仿佛念的是焦
【在 e********3 的大作中提到】
: 这唱的太牛逼了！唱的驼铃简直和原唱一样，而且最牛的就是讲话一口山东口音，但是
: 唱歌特标准的普通话。
【在 e********3 的大作中提到】
: 这唱的太牛逼了！唱的驼铃简直和原唱一样，而且最牛的就是讲话一口山东口音，但是
: 唱歌特标准的普通话。
s*e
36 楼
主持人大SB
L*L
37 楼
出口不凡，真的是秒杀
w*n
38 楼
为毛评委都介么二逼呢。
p*t
39 楼
评委那就是配角，配角的2B衬托主角的NB
h*y
40 楼
没觉得评委有啥太不好的,只不过想含蓄的说他唱的专业吧,口气也是开玩笑的吧
f*l
41 楼
嗯。故意装做吃惊不相信的样子。
【在 h*********y 的大作中提到】
: 没觉得评委有啥太不好的,只不过想含蓄的说他唱的专业吧,口气也是开玩笑的吧
【在 h*********y 的大作中提到】
: 没觉得评委有啥太不好的,只不过想含蓄的说他唱的专业吧,口气也是开玩笑的吧
m*n
42 楼
很赞！
主持人评委都该来出去喂野狗！
【在 l****f 的大作中提到】
: 人后来有清唱
h*y
43 楼
怎么都这么没有幽默感,这还是joke版吗
D*a
44 楼
评委还能再2点么
S*r
45 楼
恩，我也觉得是
【在 f*******l 的大作中提到】
: 嗯。故意装做吃惊不相信的样子。
【在 f*******l 的大作中提到】
: 嗯。故意装做吃惊不相信的样子。
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