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Random Mutagenesis mutant library 求助

Random Mutagenesis mutant library 求助# Biology - 生物学

c*k2014-04-20 07:04

1 楼

各位美食家，
家有挑食小儿，要不停换花样，
现在只吃菜不吃白米饭，白馒头，白面条，
想方设法，炒米饭，炒面，加糖的馒头，以及烙饼蒸糕包子饺子什么的，
中式各种主食替代品换着样吃还是接不上头。
现在又没啥可吃的了，
现在在饭店里，还吃墨西哥饭店那种一粒一粒的又干又软的米饭，
还有寿司卷上的米饭，
还有越南饭店的碎米饭套餐里配的葱配着米饭一起吃，
在家里实验了很多次，他吃几次就吃腻了，但饭店里的正宗的还吃，
各位大厨有没有人知道其中诀窍？
墨西哥米饭和越南葱我确实做得跟饭店不一样，
寿司我却吃不出区别，但人家就是只吃饭店里的

a*a2014-04-20 07:04

2 楼

又回到90年代末，IT人员泛滥的时代。
最好快点转到BUSINESS去。

f*c2014-04-20 07:04

3 楼

不知道有没有要送的，在NJ。
站内联系吧。

z*92014-04-20 07:04

4 楼

有两个问题，想请教作Random Mutagenesis 的同仁，
1. 建完mutant library后，一般需要把bacteria涂板后，然后再把平板上所有的菌落
刮下，抽提DNA,
（这一步，我能不能偷懒，直接就把transformed的bacteria接种到液体培养基里，然
后直接抽最终的bacteria DNA。)
这个问题其实就是，为何建突变文库的最后为何一定要涂板培养？
2. 还有就是，这里的细胞scraper的头太硬了，每次刮菌落时都要把培养基刮下几块，
想问大家有没有推荐一个头较软的scraper，或者对刮菌落有什么建议，谢谢，

l*a2014-04-20 07:04

5 楼

寿司米饭要拌寿司醋在里面，试试
再说小孩挑食都是大人惯的，饿一天包你什么都吃

【在 c*****k 的大作中提到】

: 各位美食家，
: 家有挑食小儿，要不停换花样，
: 现在只吃菜不吃白米饭，白馒头，白面条，
: 想方设法，炒米饭，炒面，加糖的馒头，以及烙饼蒸糕包子饺子什么的，
: 中式各种主食替代品换着样吃还是接不上头。
: 现在又没啥可吃的了，
: 现在在饭店里，还吃墨西哥饭店那种一粒一粒的又干又软的米饭，
: 还有寿司卷上的米饭，
: 还有越南饭店的碎米饭套餐里配的葱配着米饭一起吃，
: 在家里实验了很多次，他吃几次就吃腻了，但饭店里的正宗的还吃，

l*52014-04-20 07:04

6 楼

现在很多美国人都念CS，到时候人家就只要US CITIZENS了，码工工作就相对饱和了。
都是这样的。

【在 a*******a 的大作中提到】

: 又回到90年代末，IT人员泛滥的时代。
: 最好快点转到BUSINESS去。

f*r2014-04-20 07:04

7 楼

我正在直播抓猫呢，抓到给你养，小家伙长的很可爱，估计才一个月大，我在费城

Y*n2014-04-20 07:04

8 楼

不能偷懒，转了Library的细菌克隆生长速度不一。如果在液体中培养，你就相当于
在选择生长的快的某些克隆，这样的结果是你最终Library的Complexity/Completeness
会大打折扣，直接影响你接下来的Genetic Screen.
在平板上长出的每一个单菌落就是一个含有Tn Inserted Genomic Fragment的克隆，单
菌落越多，你的Tn Insertion就越全面，筛到东西的几率就越大。

b*t2014-04-20 07:04

9 楼

大人们千方百计戒白米精粮小朋友是要补碳水？

【在 c*****k 的大作中提到】

z*y2014-04-20 07:04

10 楼

股市不也是一样的吗
房市
人生...
什么都是这个样子物极必反
能做的就是抓住机会就好了，别的你控制不了

z*92014-04-20 07:04

11 楼

谢谢，
不知在刮菌落时，您有么有什么tricks，我刮的实在是慢，我是先加一点Buffer1，然
后再刮，有人也告诉我，先把菌落刮到集中，所谓的先干刮，然后再用buffer1冲下来
，我总是担心干刮会漏掉一些菌落，
（Buffer1就是Maxi抽提的Buffer1）

Completeness

【在 Y*******n 的大作中提到】

: 不能偷懒，转了Library的细菌克隆生长速度不一。如果在液体中培养，你就相当于
: 在选择生长的快的某些克隆，这样的结果是你最终Library的Complexity/Completeness
: 会大打折扣，直接影响你接下来的Genetic Screen.
: 在平板上长出的每一个单菌落就是一个含有Tn Inserted Genomic Fragment的克隆，单
: 菌落越多，你的Tn Insertion就越全面，筛到东西的几率就越大。

c*42014-04-20 07:04

12 楼

现在也满大街码工啊。曼哈顿工程算什么。那有现在一个公司的码工多、经费足、厂房
大。那些后起之秀象FB什么的工资高一截也招不到人。码工也是人，干个十年八年的都
去享受人生去了，谁还给你卖命。正好下一批接棒。

【在 a*******a 的大作中提到】

: 又回到90年代末，IT人员泛滥的时代。
: 最好快点转到BUSINESS去。

z*h2014-04-20 07:04

13 楼

Why do you need combine colony plasmids again as a library? Is it due to low
transformation efficiency? What strain do you use? For E. coli, B. subtilis
and yeast, your step is not necessary.

l*y2014-04-20 07:04

14 楼

平板上加点buffer或者medium泡一下，用个软软的小刷子刷，然后吸出来去离心就是
pellet

谢谢，
不知在刮菌落时，您有么有什么tricks，我刮的实在是慢，我是先加一点Buffer1，然
后再刮，有人也告诉我，先把菌落刮到集中，所谓的先干刮，然后再用buffer1冲下来
，我总是担心干刮会漏掉一些菌落，
（Buffer1就是Maxi抽提的Buffer1）
Completeness

【在 z*******9 的大作中提到】

: 谢谢，
: 不知在刮菌落时，您有么有什么tricks，我刮的实在是慢，我是先加一点Buffer1，然
: 后再刮，有人也告诉我，先把菌落刮到集中，所谓的先干刮，然后再用buffer1冲下来
: ，我总是担心干刮会漏掉一些菌落，
: （Buffer1就是Maxi抽提的Buffer1）
:
: Completeness

s*n2014-04-20 07:04

15 楼

主要是cloning和expression不是同一个菌株

low
subtilis

【在 z*h 的大作中提到】

: Why do you need combine colony plasmids again as a library? Is it due to low
: transformation efficiency? What strain do you use? For E. coli, B. subtilis
: and yeast, your step is not necessary.

s*n2014-04-20 07:04

16 楼

我自己是这样做的：如果要得到比较大的库，Spread在24x24cm的plate上，形成lawn，
加10 mL media or buffer，用转化涂板用的spreader轻轻洗下即可，如果洗不干净可
以再重复一次，然后离心形成pellet，提取质粒转化表达菌株。

j*n2014-04-20 07:04

17 楼

试过在表达菌株直接建库 library size不会比刮板子的低
刮板子方法虽然用的多，看着library size很大，其实重复的很多，biase很严重。当
然，没有方法是完美的

★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.6

【在 s********n 的大作中提到】

: 主要是cloning和expression不是同一个菌株
:
: low
: subtilis