w*a
2 楼
刚接触Lentivirus,啥都不懂,求大拿指点。
是这样,老板想看一个基因A在Smooth muscle cell differentiation里面的作用。手
上有个神经干细胞的cell line,加Tgfb后5-6天会变成SMC。
然后有前人留下来的overexpression A的lentivirus,和knockdown A的ShRNA
lentivirus,冻在-80,都大概有10多管15ml的virus。
老板想用virus overexpress 或 knockdown 基因A, 然后看differentiation pattern
有啥变化。可能用qPCR,RNA-seq啥的做readout。
本来想随便测个titer,把现有的virus加1ml到正differentiate的细胞里面(24 well)
,然后提个RNA就得了。后来一想,问题来了:
1)这神经干细胞特金贵,要特殊的medium养才成,我这virus supernatant加进去搞个
几天,还能活吗?更不提按正常程序differentiate了。那做出来的东西,不是非常的
artificial么?
2)要细胞长得好是不是得做inducible 的stable line,只需用doxycycline加在medium
里就行了。但做这个估计得1-2个月吧。
啰啰嗦嗦,其实就是怎么加virus会比较不影响细胞正常生长分化,又保证
transduction效率。。
谢谢~
是这样,老板想看一个基因A在Smooth muscle cell differentiation里面的作用。手
上有个神经干细胞的cell line,加Tgfb后5-6天会变成SMC。
然后有前人留下来的overexpression A的lentivirus,和knockdown A的ShRNA
lentivirus,冻在-80,都大概有10多管15ml的virus。
老板想用virus overexpress 或 knockdown 基因A, 然后看differentiation pattern
有啥变化。可能用qPCR,RNA-seq啥的做readout。
本来想随便测个titer,把现有的virus加1ml到正differentiate的细胞里面(24 well)
,然后提个RNA就得了。后来一想,问题来了:
1)这神经干细胞特金贵,要特殊的medium养才成,我这virus supernatant加进去搞个
几天,还能活吗?更不提按正常程序differentiate了。那做出来的东西,不是非常的
artificial么?
2)要细胞长得好是不是得做inducible 的stable line,只需用doxycycline加在medium
里就行了。但做这个估计得1-2个月吧。
啰啰嗦嗦,其实就是怎么加virus会比较不影响细胞正常生长分化,又保证
transduction效率。。
谢谢~
c*7
3 楼
sync amex in fb.spend $50 in target using that amex card in one transaction
m*e
4 楼
lenti -80放多久了,超过两三个月,建议你重做一批。
你担心virus体积太大, 下次自己做的时候用超速离心机离下来,一个T75做的virus用
100ul MEM重悬,一个24 well加10ul virus足矣。
你担心virus体积太大, 下次自己做的时候用超速离心机离下来,一个T75做的virus用
100ul MEM重悬,一个24 well加10ul virus足矣。
a*a
7 楼
可能需要浓缩然后换被感染细胞的培养基重悬
不然stem cell可能会分化
pattern
well)
【在 w*****a 的大作中提到】![](/moin_static193/solenoid/img/up.png)
: 刚接触Lentivirus,啥都不懂,求大拿指点。
: 是这样,老板想看一个基因A在Smooth muscle cell differentiation里面的作用。手
: 上有个神经干细胞的cell line,加Tgfb后5-6天会变成SMC。
: 然后有前人留下来的overexpression A的lentivirus,和knockdown A的ShRNA
: lentivirus,冻在-80,都大概有10多管15ml的virus。
: 老板想用virus overexpress 或 knockdown 基因A, 然后看differentiation pattern
: 有啥变化。可能用qPCR,RNA-seq啥的做readout。
: 本来想随便测个titer,把现有的virus加1ml到正differentiate的细胞里面(24 well)
: ,然后提个RNA就得了。后来一想,问题来了:
: 1)这神经干细胞特金贵,要特殊的medium养才成,我这virus supernatant加进去搞个
不然stem cell可能会分化
pattern
well)
【在 w*****a 的大作中提到】
![](/moin_static193/solenoid/img/up.png)
: 刚接触Lentivirus,啥都不懂,求大拿指点。
: 是这样,老板想看一个基因A在Smooth muscle cell differentiation里面的作用。手
: 上有个神经干细胞的cell line,加Tgfb后5-6天会变成SMC。
: 然后有前人留下来的overexpression A的lentivirus,和knockdown A的ShRNA
: lentivirus,冻在-80,都大概有10多管15ml的virus。
: 老板想用virus overexpress 或 knockdown 基因A, 然后看differentiation pattern
: 有啥变化。可能用qPCR,RNA-seq啥的做readout。
: 本来想随便测个titer,把现有的virus加1ml到正differentiate的细胞里面(24 well)
: ,然后提个RNA就得了。后来一想,问题来了:
: 1)这神经干细胞特金贵,要特殊的medium养才成,我这virus supernatant加进去搞个
w*a
10 楼
谢谢楼上各位的回复!每人一个小笼包鼓励:-)
看来大家都觉得要重新做virus,那是不是要买lentiviral packaging kit来包装?哪
家的比较好用啊~
-80的virus,是不是可以浓缩以后试试,clontech有个浓缩病毒的kit不知好用不?
看来大家都觉得要重新做virus,那是不是要买lentiviral packaging kit来包装?哪
家的比较好用啊~
-80的virus,是不是可以浓缩以后试试,clontech有个浓缩病毒的kit不知好用不?
相关阅读
一个海归如是说我就奇怪,为啥博士后的老婆怀孕都要被PI作为解雇或者不爽的理由负带paper helpNIAID分子病毒实验室主任蒋观德去世,仅54岁(ZZ)关于大脑对抽象事物的神经运算我有一计可以解决老板和学生的矛盾国内biotech情况怎么样?Amex SPG卡送25K points 免费送500刀现金 最佳酒店卡过年了,给大家送上一个生物wsn最诚挚的祝福 (转载)这种算winner吧求教:Deep sequencing的data convertAmex Blue Cash preferred 6%现金回扣+$150bonus超市专用信用卡CELL:三万年前中国汉族人的进化 EDAR V370A无语的FASEB J,这文章怎么发出来的?HIF FIH乱飞!45岁生物博士想转行是不是太晚?(转)有熟悉protein or DNA stabilizer的吗一个博士的悲惨生活(代友转发,主人公被困国内,没翻墙) (转载)Opportunities in an international pharmarceutical company, B国际顶尖期刊CELL的子刊 Cell Reports