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CRISPR技术问题请教

CRISPR技术问题请教# Biology - 生物学

l*n2014-06-10 07:06

1 楼

我目前J1第三年，但是已经waiver掉了，H1b正在办。想办加急的I-140
大家帮看看，还缺啥。顺序需要怎么弄？
多谢！
Cover letter
A check list
I-140 form
I-907 form
Petition letter
Passport
I94
Social Security Card (need?)
I-797 announcement (approved J1 waiver) (need?)
C.V
PhD certificate
Exhibit I (publication)
Exhibit II (Citation of my publication)
Exhibit III (judge others work)
Exhibit IV (Media report)
Exhibit V (Other evidence)

T*s2014-06-10 07:06

2 楼

刚买的HP台式机，每晚让hybernation后，一早起来就自己打开了，估计是半夜自己开
的。在网上找了各种方法。把Power Management的“allow this device to wake the
computer"都Disabled了。电脑还是一样每天半夜自己开了。
另看Windows 10都自动设置Update，好像没办法disable，只能把Windows10 卸掉？能
回到windows 8吗？
求大牛解法！多谢

b*y2014-06-10 07:06

3 楼

刚进了一个，置顶里面没有找到怎么样root sprint的，那位知道麻烦贴一下链接，我
是新手。官方的stock rom就可以。谢谢了。

p*r2014-06-10 07:06

4 楼

想用 CRISPR knockout human cell line的基因, 有必要用 knicking cas9吗?
Cutting cas9 的off-target 可能性大吗？
293T细胞如果有９０％的transfection efficiency for plasmids, 如果不筛选的话有
多少细胞的基因最后会被knockout呢? 能不能不做drug selection or GFP FACS, 就做
一下预实验看看基因作用？像siRNA一样用?
有必要用Lentivirus吗? Lentivirus是不是主要在做难转化的细胞的时候用的？
Thanks!

I*I2014-06-10 07:06

5 楼

SSN is not necessary

【在 l******n 的大作中提到】

: 我目前J1第三年，但是已经waiver掉了，H1b正在办。想办加急的I-140
: 大家帮看看，还缺啥。顺序需要怎么弄？
: 多谢！
: Cover letter
: A check list
: I-140 form
: I-907 form
: Petition letter
: Passport
: I94

k*h2014-06-10 07:06

6 楼

win10 pro可以选择不自动更新。
半夜自动打开不是你设置的问题，是主板bios不完全支持win10，有bug。你这个电脑多
半是老型号，主板还是针对win 7/8设计的，bios还没升级。

j*z2014-06-10 07:06

7 楼

去xda Sprint S 3 Android development 专区，那里的置顶一定有，而且有更好的答
疑服务。

【在 b***y 的大作中提到】

: 刚进了一个，置顶里面没有找到怎么样root sprint的，那位知道麻烦贴一下链接，我
: 是新手。官方的stock rom就可以。谢谢了。

t*l2014-06-10 07:06

8 楼

看你的实验目的了，如果你的实验结果是在293T上做，phenotype可以快速的看到，可
以不做筛选。但是这样的phenotype并不是KO.我觉得如果想快速的看看是否有作用，可
以。但是早晚还是要pick single cell clone. 来验证。要不是CRISPR这个技术就浪费
了。除非你是做screen.

x*02014-06-10 07:06

9 楼

"I-797 announcement (approved J1 waiver) (need?)"
Co-asking! Does anyone know if this is necessary?
I am also planning for the I140, however, I have not yet started the waiver
procedure.

【在 l******n 的大作中提到】

g*t2014-06-10 07:06

10 楼

需要把service都disable，

s*s2014-06-10 07:06

11 楼

我道听途说，只要能转进去，据说knockout接近100%
我不负责是否正确

【在 p*******r 的大作中提到】

: 想用 CRISPR knockout human cell line的基因, 有必要用 knicking cas9吗?
: Cutting cas9 的off-target 可能性大吗？
: 293T细胞如果有９０％的transfection efficiency for plasmids, 如果不筛选的话有
: 多少细胞的基因最后会被knockout呢? 能不能不做drug selection or GFP FACS, 就做
: 一下预实验看看基因作用？像siRNA一样用?
: 有必要用Lentivirus吗? Lentivirus是不是主要在做难转化的细胞的时候用的？
: Thanks!

J*L2014-06-10 07:06

12 楼

应该是不用的

waiver

【在 x*****0 的大作中提到】

: "I-797 announcement (approved J1 waiver) (need?)"
: Co-asking! Does anyone know if this is necessary?
: I am also planning for the I140, however, I have not yet started the waiver
: procedure.

c*n2014-06-10 07:06

13 楼

powercfg -lastwake
看看是啥唤醒的
有可能是usb
可能是网络
可能是某个软件
或者计划任务

a*y2014-06-10 07:06

14 楼

感觉不错，可以考虑设计使用crispr或talen的实验…

★ 发自iPhone App: ChineseWeb 8.7

【在 s******s 的大作中提到】

: 我道听途说，只要能转进去，据说knockout接近100%
: 我不负责是否正确

T*s2014-06-10 07:06

15 楼

多谢各位答复！
好像Service都 Disabled了。
用 powercfg -devicequery wake_armed 得出的结果是 NONE
刚用 powercfg -lastwake看，出来的给果是
Wake History Count - 1
Wake History [0]
Wake Source Count - 0

D*a2014-06-10 07:06

16 楼

是不是现在有了CRISPR，还在用shRNA就已经过时了？比如我想干扰掉wild type，再
过表达mutant。没有CRISPR以前，这样做的文章还不少。

F*r2014-06-10 07:06

17 楼

鼠标键盘wake up都disable了么？

多谢个位答复！好像Service都 Disabled了。用 powercfg -devicequery wake_armed
得出的结果是 NONE刚用 powercfg -l........

【在 T*****s 的大作中提到】

: 多谢各位答复！
: 好像Service都 Disabled了。
: 用 powercfg -devicequery wake_armed 得出的结果是 NONE
: 刚用 powercfg -lastwake看，出来的给果是
: Wake History Count - 1
: Wake History [0]
: Wake Source Count - 0

a*n2014-06-10 07:06

18 楼

CRISPR很有用，但是感觉还没有能够取代RNAi

【在 D***a 的大作中提到】

: 是不是现在有了CRISPR，还在用shRNA就已经过时了？比如我想干扰掉wild type，再
: 过表达mutant。没有CRISPR以前，这样做的文章还不少。

d*a2014-06-10 07:06

19 楼

试试看这个做法，欺骗Windows，让它以为在用手机网络。
http://www.howtogeek.com/224471/how-to-prevent-windows-10-from-

the

【在 T*****s 的大作中提到】

: 刚买的HP台式机，每晚让hybernation后，一早起来就自己打开了，估计是半夜自己开
: 的。在网上找了各种方法。把Power Management的“allow this device to wake the
: computer"都Disabled了。电脑还是一样每天半夜自己开了。
: 另看Windows 10都自动设置Update，好像没办法disable，只能把Windows10 卸掉？能
: 回到windows 8吗？
: 求大牛解法！多谢

s*s2014-06-10 07:06

20 楼

两回事。crisper可以做homozygous mutant，也就是knockout；
RNAi这玩意儿更像hetreozygous mutation，knockdown

【在 a*****n 的大作中提到】

: CRISPR很有用，但是感觉还没有能够取代RNAi

T*s2014-06-10 07:06

21 楼

鼠标键盘显卡等wake up全都disable了。
修改网络成metered connection的方法也行不通，按照它的方法去做，按 Advanced
option出来的页面没有选项，即没有metered connection这个选项。
准备明天打电话给HP看看。

j*x2014-06-10 07:06

22 楼

尽管是两回事，但假如crisper做knockout能和RNAi做knockdown一样容易，那么的确可
以预计前者将会取代后者吧

【在 s******s 的大作中提到】

: 两回事。crisper可以做homozygous mutant，也就是knockout；
: RNAi这玩意儿更像hetreozygous mutation，knockdown

w*r2014-06-10 07:06

23 楼

问你家的猫

s*s2014-06-10 07:06

24 楼

非也非也。要看实际情况是啥，你这个是基础科研思路，只要knockout就
最好。实际上，很多疾病并不是knockout的，而是dosage造成的问题，有
可能更加接近RNAi。
应该可以1:1混合正常crisper：不切crisper造成hetero解决部分问题，
不过RNAi也可以装到inducible上做更加精细的表达调控，所以我觉得
很多情况下RNAi还是有特有的优势的

【在 j****x 的大作中提到】

: 尽管是两回事，但假如crisper做knockout能和RNAi做knockdown一样容易，那么的确可
: 以预计前者将会取代后者吧

p*y2014-06-10 07:06

25 楼

冬眠后拔电源插头即可

the

【在 T*****s 的大作中提到】

Z*g2014-06-10 07:06

26 楼

RNAi也有优点：可以inducible/reversible.

【在 j****x 的大作中提到】

: 尽管是两回事，但假如crisper做knockout能和RNAi做knockdown一样容易，那么的确可
: 以预计前者将会取代后者吧

p*y2014-06-10 07:06

27 楼

只要不拔电源插头，电脑就没有真正关掉，有时电网的波动之类都能触发电源启动。

【在 p***y 的大作中提到】

: 冬眠后拔电源插头即可
:
: the

z*82014-06-10 07:06

28 楼

有没有文献支持这个？

【在 s******s 的大作中提到】

: 我道听途说，只要能转进去，据说knockout接近100%
: 我不负责是否正确

t*z2014-06-10 07:06

29 楼

没用的，还要把主板电池抠掉。如果没电池可抠那是因为*他们*有意不让你抠。

【在 p***y 的大作中提到】

: 只要不拔电源插头，电脑就没有真正关掉，有时电网的波动之类都能触发电源启动。

j*x2014-06-10 07:06

30 楼

除非你要在你的模型上完全mimic不同dosage所造成的不同表型，否则我确实不认为
knockdown在这里相比knockout有什么更多的好处，何况你说的这个情况，也可以用
knockout+knockin来更好的实现。当然，我所说的前提目前不存在，所以也就无所谓取
代RNAi了

【在 s******s 的大作中提到】

: 非也非也。要看实际情况是啥，你这个是基础科研思路，只要knockout就
: 最好。实际上，很多疾病并不是knockout的，而是dosage造成的问题，有
: 可能更加接近RNAi。
: 应该可以1:1混合正常crisper：不切crisper造成hetero解决部分问题，
: 不过RNAi也可以装到inducible上做更加精细的表达调控，所以我觉得
: 很多情况下RNAi还是有特有的优势的

p*y2014-06-10 07:06

31 楼

主板电池? 笔记本电脑电池? 楼主的好像是台式机吧, 拔掉电源就不会意外开机了，不
需要reset设置或配置软件的。

【在 t*****z 的大作中提到】

: 没用的，还要把主板电池抠掉。如果没电池可抠那是因为*他们*有意不让你抠。

p*r2014-06-10 07:06

32 楼

谢谢大家的热情讨论，从Addgene订了Feng Zhang lab的 pSpCas9(BB)-2A-GFP (PX458)
和 pSpCas9(BB)-2A-Puro (PX459)plasmids. 打算先用最简单的 transfection 和
cutting cas9 看看结果怎么样. 不行得话再用nicking cas9 and lentivirus.
Welcome more discussions in the future.

T*s2014-06-10 07:06

33 楼

阿三妹妹帮我调好了。是在security maintenance里面. 把 Allow scheduled
maintenance to wake up my computer at the scheduled time Disabled。
另不让Windows10 自动Update更新也好像设置好了。看她是在HP Support Assistant里
面弄的。把Install important updates automatically 改成check for updates, but
let me choose which updates to download and install.
但不知这是HP的Software还是Windows 10就不知道了。我怀疑这不是Windows而是HP的
，因为上面是说“How would you like to receive software updates and messages
from HP? 难道Windows是从HP更新？
在Update & Security 没有得选，即使在Advanced Options 里也只能选Automatic或
Notify to schedule restart.是Restart而不是Update。
谢谢各位回复！

a*y2014-06-10 07:06

34 楼

本不需要做类似的东西
不过最近考虑下游实验可能需要做overexpression 的knock-in
这个技术也是适用的，对吧？

PX458)

【在 p*******r 的大作中提到】

: 谢谢大家的热情讨论，从Addgene订了Feng Zhang lab的 pSpCas9(BB)-2A-GFP (PX458)
: 和 pSpCas9(BB)-2A-Puro (PX459)plasmids. 打算先用最简单的 transfection 和
: cutting cas9 看看结果怎么样. 不行得话再用nicking cas9 and lentivirus.
: Welcome more discussions in the future.

z*t2014-06-10 07:06

35 楼

我们用32D细胞做indel，电转，addgene上的P458/459都试过。
电转效率比较低，2-3% GFP+,筛出single cell colony,里面8~9/10都有indel，不过
indel是相当heterogenous,几乎没有一样的。
puro因为电转效率太低，没有长起来。

【在 p*******r 的大作中提到】