r*g
2 楼
现在的房子还没付清，半年前刚refinance过，手上有足够了钱付另一个房子20%的首付
，收入也够cover两个房子的mortgage。找现在的贷款的银行，被告知必须做成
contingency，理由是refinance后不足12个月，这是什么狗屁理由？实在是难以理解其
中的逻辑。如果我把现在的房子付清然后再搞个HELOC，再从HELOC里拿出钱付另一个房
子的首付，这么搞能行吗？
btw，我不打算keep俩房子，换了以后现在的肯定要卖，但不想搞contingency因为太麻
烦。
，收入也够cover两个房子的mortgage。找现在的贷款的银行，被告知必须做成
contingency，理由是refinance后不足12个月，这是什么狗屁理由？实在是难以理解其
中的逻辑。如果我把现在的房子付清然后再搞个HELOC，再从HELOC里拿出钱付另一个房
子的首付，这么搞能行吗？
btw，我不打算keep俩房子，换了以后现在的肯定要卖，但不想搞contingency因为太麻
烦。
d*i
3 楼
在ATCC找了一个杂交瘤细胞，能产生我们常用的一个抗体。看了一下培养基就是1640+
10%FBS，不明白这种细胞产生的抗体怎么处理。
1. 直接收集上清就可以用吗？比如western或者IF。上清还有FBS会不会影响使用特异
性。
2. 需要纯化后再用？
3. 从来没用过这类细胞，不知道还有什么需要注意的，请用过的指点一下。
谢谢！
10%FBS，不明白这种细胞产生的抗体怎么处理。
1. 直接收集上清就可以用吗？比如western或者IF。上清还有FBS会不会影响使用特异
性。
2. 需要纯化后再用？
3. 从来没用过这类细胞，不知道还有什么需要注意的，请用过的指点一下。
谢谢！
h*e
4 楼
eb1没有排期
eb2 NIW 有排期，现在好像是07/2006
eb2 NIW 有排期，现在好像是07/2006
t*u
5 楼
New rule。
12个月只能有一个primary residency。
您老第一个按primary做的refi，12月内新买的房子只能按investment property做贷款。
【在 r*****g 的大作中提到】
: 现在的房子还没付清，半年前刚refinance过，手上有足够了钱付另一个房子20%的首付
: ，收入也够cover两个房子的mortgage。找现在的贷款的银行，被告知必须做成
: contingency，理由是refinance后不足12个月，这是什么狗屁理由？实在是难以理解其
: 中的逻辑。如果我把现在的房子付清然后再搞个HELOC，再从HELOC里拿出钱付另一个房
: 子的首付，这么搞能行吗？
: btw，我不打算keep俩房子，换了以后现在的肯定要卖，但不想搞contingency因为太麻
: 烦。
12个月只能有一个primary residency。
您老第一个按primary做的refi，12月内新买的房子只能按investment property做贷款。
【在 r*****g 的大作中提到】
: 现在的房子还没付清，半年前刚refinance过，手上有足够了钱付另一个房子20%的首付
: ，收入也够cover两个房子的mortgage。找现在的贷款的银行，被告知必须做成
: contingency，理由是refinance后不足12个月，这是什么狗屁理由？实在是难以理解其
: 中的逻辑。如果我把现在的房子付清然后再搞个HELOC，再从HELOC里拿出钱付另一个房
: 子的首付，这么搞能行吗？
: btw，我不打算keep俩房子，换了以后现在的肯定要卖，但不想搞contingency因为太麻
: 烦。
r*e
6 楼
可以直接用上清，也可以纯化。
【在 d****i 的大作中提到】
: 在ATCC找了一个杂交瘤细胞，能产生我们常用的一个抗体。看了一下培养基就是1640+
: 10%FBS，不明白这种细胞产生的抗体怎么处理。
: 1. 直接收集上清就可以用吗？比如western或者IF。上清还有FBS会不会影响使用特异
: 性。
: 2. 需要纯化后再用？
: 3. 从来没用过这类细胞，不知道还有什么需要注意的，请用过的指点一下。
: 谢谢！
【在 d****i 的大作中提到】
: 在ATCC找了一个杂交瘤细胞，能产生我们常用的一个抗体。看了一下培养基就是1640+
: 10%FBS，不明白这种细胞产生的抗体怎么处理。
: 1. 直接收集上清就可以用吗？比如western或者IF。上清还有FBS会不会影响使用特异
: 性。
: 2. 需要纯化后再用？
: 3. 从来没用过这类细胞，不知道还有什么需要注意的，请用过的指点一下。
: 谢谢！
a*t
7 楼
楼上的可能没有明白我的问题，我的情况是ld是绿卡，打算让他给我申请绿卡，不知道
现在绿卡身份帮配偶申请绿卡要多久呢？
【在 h*********e 的大作中提到】
: eb1没有排期
: eb2 NIW 有排期，现在好像是07/2006
现在绿卡身份帮配偶申请绿卡要多久呢？
【在 h*********e 的大作中提到】
: eb1没有排期
: eb2 NIW 有排期，现在好像是07/2006
r*g
8 楼
原来如此，那有啥方法可以在不足12个月的情况下换房子？把现在的房子付清然后再贷
HELOC可以吗？
款。
【在 t****u 的大作中提到】
: New rule。
: 12个月只能有一个primary residency。
: 您老第一个按primary做的refi，12月内新买的房子只能按investment property做贷款。
HELOC可以吗？
款。
【在 t****u 的大作中提到】
: New rule。
: 12个月只能有一个primary residency。
: 您老第一个按primary做的refi，12月内新买的房子只能按investment property做贷款。
d*i
9 楼
非常感谢！直接用的话培养基会不会增加背景？
【在 r***e 的大作中提到】
: 可以直接用上清，也可以纯化。
【在 r***e 的大作中提到】
: 可以直接用上清，也可以纯化。
w*n
10 楼
可以咨询法佑网faayou.com，电话+1 650-4628866
t*u
11 楼
您老可以将新房子当investment property做。:) 这样就没有问题了。
Payoff没有用，您老的record已经在那里了，然后又申请新的HELOC，又增加新的
liability又要解释，这些东西credit report上一查就出来。mess things up more。
还有个办法，您老到retail bank去混混看，比如BofA retail，他们那边guideline松
，没准让您老混过去了。
【在 r*****g 的大作中提到】
: 原来如此，那有啥方法可以在不足12个月的情况下换房子？把现在的房子付清然后再贷
: HELOC可以吗？
:
: 款。
Payoff没有用，您老的record已经在那里了，然后又申请新的HELOC，又增加新的
liability又要解释，这些东西credit report上一查就出来。mess things up more。
还有个办法，您老到retail bank去混混看，比如BofA retail，他们那边guideline松
，没准让您老混过去了。
【在 r*****g 的大作中提到】
: 原来如此，那有啥方法可以在不足12个月的情况下换房子？把现在的房子付清然后再贷
: HELOC可以吗？
:
: 款。
c*i
12 楼
一般而言10％FBS上清可以直接用于western.其实Hybridoma培养可以用serum free
medium.比如Gibco的Hybridoma SFM.
【在 d****i 的大作中提到】
: 在ATCC找了一个杂交瘤细胞，能产生我们常用的一个抗体。看了一下培养基就是1640+
: 10%FBS，不明白这种细胞产生的抗体怎么处理。
: 1. 直接收集上清就可以用吗？比如western或者IF。上清还有FBS会不会影响使用特异
: 性。
: 2. 需要纯化后再用？
: 3. 从来没用过这类细胞，不知道还有什么需要注意的，请用过的指点一下。
: 谢谢！
medium.比如Gibco的Hybridoma SFM.
【在 d****i 的大作中提到】
: 在ATCC找了一个杂交瘤细胞，能产生我们常用的一个抗体。看了一下培养基就是1640+
: 10%FBS，不明白这种细胞产生的抗体怎么处理。
: 1. 直接收集上清就可以用吗？比如western或者IF。上清还有FBS会不会影响使用特异
: 性。
: 2. 需要纯化后再用？
: 3. 从来没用过这类细胞，不知道还有什么需要注意的，请用过的指点一下。
: 谢谢！
s*u
13 楼
Current PD 1/1/2007.
【在 a*******t 的大作中提到】
: 楼上的可能没有明白我的问题，我的情况是ld是绿卡，打算让他给我申请绿卡，不知道
: 现在绿卡身份帮配偶申请绿卡要多久呢？
【在 a*******t 的大作中提到】
: 楼上的可能没有明白我的问题，我的情况是ld是绿卡，打算让他给我申请绿卡，不知道
: 现在绿卡身份帮配偶申请绿卡要多久呢？
g*5
14 楼
how to purify the antibody from Hybridoma cells?
d*u
15 楼
why donot u find a citizen?
D*a
16 楼
过一下protein A或G的柱子，再洗脱。
【在 g*********5 的大作中提到】
: how to purify the antibody from Hybridoma cells?
【在 g*********5 的大作中提到】
: how to purify the antibody from Hybridoma cells?
f*r
17 楼
人家又不是去菜场买菜，想找啥就找啥，人找到的意中人正好是绿卡，那又咋啦？你咋
说话酸溜溜的？
LZ现在绿卡配偶排期又变成4年零3个月了，不知道今后如何变化。
请参见排期
http://travel.state.gov/visa/bulletin/bulletin_1360.html
【在 d****u 的大作中提到】
: why donot u find a citizen?
说话酸溜溜的？
LZ现在绿卡配偶排期又变成4年零3个月了，不知道今后如何变化。
请参见排期
http://travel.state.gov/visa/bulletin/bulletin_1360.html
【在 d****u 的大作中提到】
: why donot u find a citizen?
D*a
18 楼
刚好也要养，有一个问题问一下：hybridoma扩增用RPMI 10%FBS，产抗体用hybridoma
SFM，中间要不要让细胞适应几代，还是扩增到足够细胞，直接换SFM？谢谢。
【在 c*****i 的大作中提到】
: 一般而言10％FBS上清可以直接用于western.其实Hybridoma培养可以用serum free
: medium.比如Gibco的Hybridoma SFM.
SFM，中间要不要让细胞适应几代，还是扩增到足够细胞，直接换SFM？谢谢。
【在 c*****i 的大作中提到】
: 一般而言10％FBS上清可以直接用于western.其实Hybridoma培养可以用serum free
: medium.比如Gibco的Hybridoma SFM.
g*i
19 楼
我理解是她替lz着急， 绿卡配偶排期还得4年多，要是公民配偶就不用排了。
【在 f******r 的大作中提到】
: 人家又不是去菜场买菜，想找啥就找啥，人找到的意中人正好是绿卡，那又咋啦？你咋
: 说话酸溜溜的？
: LZ现在绿卡配偶排期又变成4年零3个月了，不知道今后如何变化。
: 请参见排期
: http://travel.state.gov/visa/bulletin/bulletin_1360.html
【在 f******r 的大作中提到】
: 人家又不是去菜场买菜，想找啥就找啥，人找到的意中人正好是绿卡，那又咋啦？你咋
: 说话酸溜溜的？
: LZ现在绿卡配偶排期又变成4年零3个月了，不知道今后如何变化。
: 请参见排期
: http://travel.state.gov/visa/bulletin/bulletin_1360.html
d*i
20 楼
这个我想细胞不管用什么养，抗体一直是分泌的吧？
理论上似乎是细胞数目够了以后可以直接换，抗体浓度会高一点。
hybridoma
【在 D***a 的大作中提到】
: 刚好也要养，有一个问题问一下：hybridoma扩增用RPMI 10%FBS，产抗体用hybridoma
: SFM，中间要不要让细胞适应几代，还是扩增到足够细胞，直接换SFM？谢谢。
理论上似乎是细胞数目够了以后可以直接换，抗体浓度会高一点。
hybridoma
【在 D***a 的大作中提到】
: 刚好也要养，有一个问题问一下：hybridoma扩增用RPMI 10%FBS，产抗体用hybridoma
: SFM，中间要不要让细胞适应几代，还是扩增到足够细胞，直接换SFM？谢谢。
a*t
21 楼
谢谢你的回复。
【在 f******r 的大作中提到】
: 人家又不是去菜场买菜，想找啥就找啥，人找到的意中人正好是绿卡，那又咋啦？你咋
: 说话酸溜溜的？
: LZ现在绿卡配偶排期又变成4年零3个月了，不知道今后如何变化。
: 请参见排期
: http://travel.state.gov/visa/bulletin/bulletin_1360.html
【在 f******r 的大作中提到】
: 人家又不是去菜场买菜，想找啥就找啥，人找到的意中人正好是绿卡，那又咋啦？你咋
: 说话酸溜溜的？
: LZ现在绿卡配偶排期又变成4年零3个月了，不知道今后如何变化。
: 请参见排期
: http://travel.state.gov/visa/bulletin/bulletin_1360.html
a*t
22 楼
我觉得这个排期好volatile呀，去年还说大概只要一年左右了，现在又变回４年了。。
。
。
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