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MG 132 和cycloheximide 到底有啥用？ 哪位大神解释一下？
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MG 132 和cycloheximide 到底有啥用？ 哪位大神解释一下？# Biology - 生物学
s*e
1 楼
其实macy's使劲淘还是能淘出来好衣服的。昨天去mall里逛了一下。在macy's逛了一下
，发现那衣服好多打折的，很好看的一件半袖t恤打折下来才9。99，要不是我穿t恤一
般都偏好A&F，我就买了。还有有些女孩子很爱穿的那种很宽松的，但是穿上又很显瘦
的那种半袖t恤，打折下来也就十几美金。不过我觉得macy's的女装suit设计还是太大
妈，而且ck的女装suit都没有0号的，中国女生一般都在那买不到自己要的号。年轻女
生买suit我建议去nordstrom的individual department，有个牌子叫theory，挺不错，
有0号或00号的，设计还有点stylish，反正起码不象macy's的suit那么大妈，就是有点
贵，三件套下来大概要花800多美金，而且据说他家从来不打折。不过和theory在一起
的，和他基本一个档次的一款女装suit，也很不错，和theory风格有点象，有0号的，
而且有时打折，三件套下来500多美金。
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r*k
2 楼
MG132 可以inhibit proteasome degradation， cycloheximide是inhibit denovo
protein synthesis。
看了一些paper都是用这俩药，但是具体意义是什么呢？研究一个protein的half life
有啥意义？
MG132 还可以induce 一些蛋白的nuclear translocation，why？
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G*i
3 楼
发错版了？

【在 s****e 的大作中提到】
: 其实macy's使劲淘还是能淘出来好衣服的。昨天去mall里逛了一下。在macy's逛了一下
: ，发现那衣服好多打折的，很好看的一件半袖t恤打折下来才9。99，要不是我穿t恤一
: 般都偏好A&F，我就买了。还有有些女孩子很爱穿的那种很宽松的，但是穿上又很显瘦
: 的那种半袖t恤，打折下来也就十几美金。不过我觉得macy's的女装suit设计还是太大
: 妈，而且ck的女装suit都没有0号的，中国女生一般都在那买不到自己要的号。年轻女
: 生买suit我建议去nordstrom的individual department，有个牌子叫theory，挺不错，
: 有0号或00号的，设计还有点stylish，反正起码不象macy's的suit那么大妈，就是有点
: 贵，三件套下来大概要花800多美金，而且据说他家从来不打折。不过和theory在一起
: 的，和他基本一个档次的一款女装suit，也很不错，和theory风格有点象，有0号的，
: 而且有时打折，三件套下来500多美金。
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s*y
4 楼

life
意思非常大。
举一个例子，很多调节细胞周期的信号蛋白都是短寿命的蛋白，这样可以保证他们在做
完他们的工作之后即使降解被清除掉。如果这个过程受到干扰，弄不好会致癌。
很多种不同的原因，比方说因为一些该降解的废品蛋白没有被降解，导致细胞内出现
misfolding stress.
还有一种原因是Ubiquitylated 的蛋白会改变他们的细胞内定位。

【在 r******k 的大作中提到】
: MG132 可以inhibit proteasome degradation， cycloheximide是inhibit denovo
: protein synthesis。
: 看了一些paper都是用这俩药，但是具体意义是什么呢？研究一个protein的half life
: 有啥意义？
: MG132 还可以induce 一些蛋白的nuclear translocation，why？
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s*e
5 楼
没发错版。我在向面试的女生介绍stylish的，合身的suit，就是nordstrom的
individual department的theory，还有和他类似的比他稍便宜点的牌子。

【在 G******i 的大作中提到】
: 发错版了？
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T*e
6 楼
cycloheximide是inhibit denovo protein synthesis。
举个例子吧，比如你发现一个细胞事件很有趣、很重要。你想知道它是怎么被调控的。
那么有很多种可能，比如转录，转录后调控，翻译，翻译后调控。翻译后调控又分为很
多种，比如磷酸化修饰，translocation等等。那么怎么把目标范围缩小呢？早期的实
验方法，比如加转录抑制剂看看该细胞事件是否还发生，或者你说的这个加翻译抑制剂
，看看是否需要新的蛋白合成。比如学习记忆的机制里面，短期记忆有的需要蛋白合成
，你可以通过加蛋白合成抑制剂阻断动物的短期记忆来证明这点。而长期记忆还需要转
录的过程，那么你可以通过加转录抑制剂抑制长期记忆来证明。
研究一个protein的half life有啥意义？
我举第二个例子来说明这个。比如说现在很流行的用GFP这样的reporter来研究转录。
具体就是用一个增强子/启动子来驱动GFP表达。那比如说我有一个转录抑制子，我推测
它可以抑制上面提到的GFP的转录。那我把抑制子加到细胞里面去，等了24小时也没看
到什么变化，这能说明这个转录抑制子无效吗？未必。因为GFP的寿命超过24小时。那
么你设计这个实验的时候就应该考虑用一个half life更短的reporter来研究。
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G*i
7 楼
嗯
那就再把主题/内容好好润色一下
俺也好mark发包子
呵呵

【在 s****e 的大作中提到】
: 没发错版。我在向面试的女生介绍stylish的，合身的suit，就是nordstrom的
: individual department的theory，还有和他类似的比他稍便宜点的牌子。
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r*k
8 楼
非常感谢。 我想研究一个蛋白的WT和mutant之间是否有behave differently。
加MG132 或者CHX， 亦或者两个都加 又能有什么意义呢？

【在 T*****e 的大作中提到】
: cycloheximide是inhibit denovo protein synthesis。
: 举个例子吧，比如你发现一个细胞事件很有趣、很重要。你想知道它是怎么被调控的。
: 那么有很多种可能，比如转录，转录后调控，翻译，翻译后调控。翻译后调控又分为很
: 多种，比如磷酸化修饰，translocation等等。那么怎么把目标范围缩小呢？早期的实
: 验方法，比如加转录抑制剂看看该细胞事件是否还发生，或者你说的这个加翻译抑制剂
: ，看看是否需要新的蛋白合成。比如学习记忆的机制里面，短期记忆有的需要蛋白合成
: ，你可以通过加蛋白合成抑制剂阻断动物的短期记忆来证明这点。而长期记忆还需要转
: 录的过程，那么你可以通过加转录抑制剂抑制长期记忆来证明。
: 研究一个protein的half life有啥意义？
: 我举第二个例子来说明这个。比如说现在很流行的用GFP这样的reporter来研究转录。
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e*n
9 楼
theory...............
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r*k
10 楼
请问这两种药一起加， 有什么意义呢？

【在 s******y 的大作中提到】
:
: life
: 意思非常大。
: 举一个例子，很多调节细胞周期的信号蛋白都是短寿命的蛋白，这样可以保证他们在做
: 完他们的工作之后即使降解被清除掉。如果这个过程受到干扰，弄不好会致癌。
: 很多种不同的原因，比方说因为一些该降解的废品蛋白没有被降解，导致细胞内出现
: misfolding stress.
: 还有一种原因是Ubiquitylated 的蛋白会改变他们的细胞内定位。
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q*n
11 楼
如果去outlets也能买到theory的suits，三件套下来500多也能搞定。只是theory
outlets店根据他们店员说用的是broadway material，和retail店里用的retail
material有点区别。但是我个人比较了一下，基本看不出区别，很不错。之所以谈到
retail store，是因为有时候在saks off fifth能找到打折的，我最便宜买的是60块钱
左右一件blazer，很划算。
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c*i
12 楼
那就是可以分析某个时刻的蛋白量，既不能合成，也不能降解。
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d*a
13 楼
好贵
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c*g
14 楼
CHX是用于研究蛋白HALF LIFE的，因为只有抑制了新蛋白的合成，才能准确知道一个蛋
白的寿命，这个一般是要做TIME COURSE. 对于你的试验，你可以用这个方法检测一下
你的WT 和MUT是不是有不同的HALF LIFE。
MG132只适应于能被PROTEASOME降解的蛋白，如果你的蛋白是，加了之后，你会发现蛋
白量增加。这个药有细胞毒性，一般不能超过6小时。如果你的蛋白的HALF LIFE 很长
，那就看不到steady state level 的区别了。这个时候，需要同时加CHX，做TIME
COURSE，观察蛋白的half life是否被延长。
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w*o
15 楼
mm好瘦……衣服好贵……
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r*k
16 楼
非常感谢呀！ ！！ 但是加MG132 是不是必须是endoegous promoter 才有意义？ 如果
是transient expression我的两个蛋白的话 是不能用MG132研究他们的degradation的
对吧？
再次感谢！！

【在 c******g 的大作中提到】
: CHX是用于研究蛋白HALF LIFE的，因为只有抑制了新蛋白的合成，才能准确知道一个蛋
: 白的寿命，这个一般是要做TIME COURSE. 对于你的试验，你可以用这个方法检测一下
: 你的WT 和MUT是不是有不同的HALF LIFE。
: MG132只适应于能被PROTEASOME降解的蛋白，如果你的蛋白是，加了之后，你会发现蛋
: 白量增加。这个药有细胞毒性，一般不能超过6小时。如果你的蛋白的HALF LIFE 很长
: ，那就看不到steady state level 的区别了。这个时候，需要同时加CHX，做TIME
: COURSE，观察蛋白的half life是否被延长。
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d*y
17 楼
theory is sooo expensive...
You must be rich...
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c*g
18 楼
transient的话，蛋白表达量太大，基本是看不到区别的，如果实在不能做endogenouse
的，做成 stable cell line 也凑合

【在 r******k 的大作中提到】
: 非常感谢呀！ ！！ 但是加MG132 是不是必须是endoegous promoter 才有意义？ 如果
: 是transient expression我的两个蛋白的话 是不能用MG132研究他们的degradation的
: 对吧？
: 再次感谢！！
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d*y
19 楼
theory is sooo expensive...
You must be rich...
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r*k
20 楼
请问可不可以对overexpress的蛋白可不可以又加MG132和CHX 一起treat？ 这样会不会
好些 因为myna的synthesis 也被block了。

endogenouse

【在 c******g 的大作中提到】
: transient的话，蛋白表达量太大，基本是看不到区别的，如果实在不能做endogenouse
: 的，做成 stable cell line 也凑合
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v*i
21 楼
太贵了
我觉得刚毕业的学生为了面试的衣服就花个500+没必要
两三百买一套质量剪裁都过得去就行了
说实话真没有多少人关心你穿的衣服

生一般都在那买不到自己要的号。年轻女生买suit我建议去nordstrom的individual
department，有个牌子叫theory，挺不错，有0号或00号的，设计还有点stylish，反正
起码不象macy's的suit那么

【在 s****e 的大作中提到】
: 没发错版。我在向面试的女生介绍stylish的，合身的suit，就是nordstrom的
: individual department的theory，还有和他类似的比他稍便宜点的牌子。
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r*k
22 楼
我现在想问下，如果必须做overexpression的 蛋白的half life。 是不是在
transfect 24hr或者48hr后加CHX比较好？？ 我看了一些paper，加了CHX后的time
course 时间很不一样，像我这种case，您觉得应该多久比较好呢？

endogenouse

【在 c******g 的大作中提到】
: transient的话，蛋白表达量太大，基本是看不到区别的，如果实在不能做endogenouse
: 的，做成 stable cell line 也凑合
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p*x
23 楼
搭车问一下，大妈应该上哪里买suit？刚生完孩子，发现以前的suit塞不进去了，这周
就要面了，抓狂啊。不想买太贵的，过得去就行，因为不是刚毕业的学生，不经常面试
。除了suit，有其他的选择吗？这大热天的，穿suit还挺热的。
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c*g
24 楼
这要看你蛋白的half life.处理时间要接近half life 才行，要不看不出来变化。你要
自己慢慢摸条件。第一次，建议transfect 36hr后，加CHX 处理2/4/6/8/12个小时

【在 r******k 的大作中提到】
: 我现在想问下，如果必须做overexpression的 蛋白的half life。 是不是在
: transfect 24hr或者48hr后加CHX比较好？？ 我看了一些paper，加了CHX后的time
: course 时间很不一样，像我这种case，您觉得应该多久比较好呢？
:
: endogenouse
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v*i
25 楼
好像只能穿suit了 路上确实比较热 室内有空调

【在 p********x 的大作中提到】
: 搭车问一下，大妈应该上哪里买suit？刚生完孩子，发现以前的suit塞不进去了，这周
: 就要面了，抓狂啊。不想买太贵的，过得去就行，因为不是刚毕业的学生，不经常面试
: 。除了suit，有其他的选择吗？这大热天的，穿suit还挺热的。
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r*k
26 楼
HI thymine, 你好！ 你所说的translocation和 加CHX有联系吗？ 就是说如果加了CHX
， inhibit denovo protein synthesis的话，发觉 WT A 比 mutant A的half life要
短，这个跟他们的translocation能有什么关系呢？ 谢谢

【在 T*****e 的大作中提到】
: cycloheximide是inhibit denovo protein synthesis。
: 举个例子吧，比如你发现一个细胞事件很有趣、很重要。你想知道它是怎么被调控的。
: 那么有很多种可能，比如转录，转录后调控，翻译，翻译后调控。翻译后调控又分为很
: 多种，比如磷酸化修饰，translocation等等。那么怎么把目标范围缩小呢？早期的实
: 验方法，比如加转录抑制剂看看该细胞事件是否还发生，或者你说的这个加翻译抑制剂
: ，看看是否需要新的蛋白合成。比如学习记忆的机制里面，短期记忆有的需要蛋白合成
: ，你可以通过加蛋白合成抑制剂阻断动物的短期记忆来证明这点。而长期记忆还需要转
: 录的过程，那么你可以通过加转录抑制剂抑制长期记忆来证明。
: 研究一个protein的half life有啥意义？
: 我举第二个例子来说明这个。比如说现在很流行的用GFP这样的reporter来研究转录。
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p*x
27 楼
中午要吃饭，是不是要把西装脱了，穿衬衫？

【在 v******i 的大作中提到】
: 好像只能穿suit了 路上确实比较热 室内有空调
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T*e
28 楼
你好！你这个问题还是有点太开放了。我说到translocation的时候只是举个例子。
我最初的意思大概是这样：
1.有一个细胞外信号进来
2. 它引起了新的基因alpha转录，你检测到这个事件是在信号发生后三小时，那么这就
有两种可能：
A.新的转录因子（比如c-Fos）被转录，翻译后，然后这导致了alpha的转录
B.转录因子在信号刺激下入核，导致了alpha的转录
那么通过加cycloheximide，你抑制了c-Fos的翻译，那么你可以通过alpha转录与否判
断这跟c-Fos有没有关系。到底需要新翻译的转录因子还是只要translocation就够了。
但是关于你的例子，我不记得你是否还发了别的帖子说这个，但是你给的模糊的信息实
在只能让我瞎猜。
我就瞎猜猜看吧。
WT蛋白寿命比mutant短，这至少有两个层次的原因：
1.WT蛋白受降解调控的部分在mutant中被破坏了；
2.WT蛋白本身参与蛋白降解的机制
这里本来可以分开讨论，但你应该比我更清楚情况，所以欢迎你澄清哪一种更接近事实。
这可能跟translocation有什么关系呢？我不觉得在这里有什么直接的关系。
硬要扯的话，可能影响mutant的translocation的部分被破坏了。
这不是直接的关系，我觉得这个问题凭空而谈太复杂了。抱歉。

CHX

【在 r******k 的大作中提到】
: HI thymine, 你好！ 你所说的translocation和 加CHX有联系吗？ 就是说如果加了CHX
: ， inhibit denovo protein synthesis的话，发觉 WT A 比 mutant A的half life要
: 短，这个跟他们的translocation能有什么关系呢？ 谢谢
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R*9
29 楼
mark
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r*k
30 楼
..

life

【在 r******k 的大作中提到】
: MG132 可以inhibit proteasome degradation， cycloheximide是inhibit denovo
: protein synthesis。
: 看了一些paper都是用这俩药，但是具体意义是什么呢？研究一个protein的half life
: 有啥意义？
: MG132 还可以induce 一些蛋白的nuclear translocation，why？
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H*T
31 楼
有一个研究的蛋白用MG132处理2、4、6、8h，可以看到蛋白水平显著的下调，这个如何
解释呢？

【在 T*****e 的大作中提到】
: cycloheximide是inhibit denovo protein synthesis。
: 举个例子吧，比如你发现一个细胞事件很有趣、很重要。你想知道它是怎么被调控的。
: 那么有很多种可能，比如转录，转录后调控，翻译，翻译后调控。翻译后调控又分为很
: 多种，比如磷酸化修饰，translocation等等。那么怎么把目标范围缩小呢？早期的实
: 验方法，比如加转录抑制剂看看该细胞事件是否还发生，或者你说的这个加翻译抑制剂
: ，看看是否需要新的蛋白合成。比如学习记忆的机制里面，短期记忆有的需要蛋白合成
: ，你可以通过加蛋白合成抑制剂阻断动物的短期记忆来证明这点。而长期记忆还需要转
: 录的过程，那么你可以通过加转录抑制剂抑制长期记忆来证明。
: 研究一个protein的half life有啥意义？
: 我举第二个例子来说明这个。比如说现在很流行的用GFP这样的reporter来研究转录。
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x*e
32 楼
不一定是细胞周期蛋白。很多时候转录和蛋白合成都有周期节率

【在 s******y 的大作中提到】
:
: life
: 意思非常大。
: 举一个例子，很多调节细胞周期的信号蛋白都是短寿命的蛋白，这样可以保证他们在做
: 完他们的工作之后即使降解被清除掉。如果这个过程受到干扰，弄不好会致癌。
: 很多种不同的原因，比方说因为一些该降解的废品蛋白没有被降解，导致细胞内出现
: misfolding stress.
: 还有一种原因是Ubiquitylated 的蛋白会改变他们的细胞内定位。
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