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ChIP 中的sonication 导致蛋白降解
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ChIP 中的sonication 导致蛋白降解# Biology - 生物学
j*i
1
【 以下文字转载自 Family 讨论区 】
发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
标 题: 小声问下这里的jmm,老公一般隔几天洗澡
发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
我家老公总是不喜欢洗澡,一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
一次,那每天晚上都要洗屁屁,洗脸和洗脚;在我看来每天换内裤和袜子是必须的,特
受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种,每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
老公也是一肚子的气,我喜欢床上要干干净净的,每月至少洗床单被罩一次,他就开始
数落我。大家都是怎样处理这些事情的,还有我们结婚到现在一周年了,这些事情还是
没有协调过来。
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H*n
2
最近做一个Transcription Factor(120KD)的ChIP, 很奇怪的事情,--
前面标准的1% formaldyhe RT 10min,0.125M Glycine RT 5 min, PBS wash,
裂解完细胞后,温和的sonication完后,input用western看发现原来条带的位置没有(
或者变的很淡),在下面有两条小的蛋白带。 做了一下RNA pol-II的WB (>150kD <
200kD)也是类似的情况,原来条带的位置淡了很多,在底下出现了两三条size小的条带。
先后试了RIPA (0.1%SDS)和nuclear lysate(1%SDS)裂解,效果一样。只要有
sonication,即使是很温和的5个cycle 30s/30s (该条件下DNA shear都不完全200-
3000bp), 原来蛋白条带就会消失,取而代之的是底下出现的size小的条带。
请问这是sonication 导致大分子量的蛋白容易降解吗?要如何解决?
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B*e
3
俺这一辈子只洗过三次澡的说。。。
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j*x
4
降解之后,你的抗体还能认识片段的话,对ChIP似乎也没有大影响。
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s*s
5
哦原来你是法国国王啊
中文说的不错啊

【在 B********e 的大作中提到】
: 俺这一辈子只洗过三次澡的说。。。
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m*5
6
protocol应该有问题,protein怎么处理western的?

【在 H****n 的大作中提到】
: 最近做一个Transcription Factor(120KD)的ChIP, 很奇怪的事情,--
: 前面标准的1% formaldyhe RT 10min,0.125M Glycine RT 5 min, PBS wash,
: 裂解完细胞后,温和的sonication完后,input用western看发现原来条带的位置没有(
: 或者变的很淡),在下面有两条小的蛋白带。 做了一下RNA pol-II的WB (>150kD <
: 200kD)也是类似的情况,原来条带的位置淡了很多,在底下出现了两三条size小的条带。
: 先后试了RIPA (0.1%SDS)和nuclear lysate(1%SDS)裂解,效果一样。只要有
: sonication,即使是很温和的5个cycle 30s/30s (该条件下DNA shear都不完全200-
: 3000bp), 原来蛋白条带就会消失,取而代之的是底下出现的size小的条带。
: 请问这是sonication 导致大分子量的蛋白容易降解吗?要如何解决?

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x*a
7
分床睡呗!

烦。

【在 j****i 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Family 讨论区 】
: 发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
: 标 题: 小声问下这里的jmm,老公一般隔几天洗澡
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
: 我家老公总是不喜欢洗澡,一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
: 一次,那每天晚上都要洗屁屁,洗脸和洗脚;在我看来每天换内裤和袜子是必须的,特
: 受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种,每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
: 老公也是一肚子的气,我喜欢床上要干干净净的,每月至少洗床单被罩一次,他就开始
: 数落我。大家都是怎样处理这些事情的,还有我们结婚到现在一周年了,这些事情还是
: 没有协调过来。

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k*e
8
推搞笑了。我原来一天洗两次,早晚。床单一周一换。现在不行了。所以理解和人平均
卫生水平的痛苦。

烦。

【在 j****i 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Family 讨论区 】
: 发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
: 标 题: 小声问下这里的jmm,老公一般隔几天洗澡
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
: 我家老公总是不喜欢洗澡,一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
: 一次,那每天晚上都要洗屁屁,洗脸和洗脚;在我看来每天换内裤和袜子是必须的,特
: 受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种,每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
: 老公也是一肚子的气,我喜欢床上要干干净净的,每月至少洗床单被罩一次,他就开始
: 数落我。大家都是怎样处理这些事情的,还有我们结婚到现在一周年了,这些事情还是
: 没有协调过来。

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d*f
9
md,我一天洗三次,洗得都快秃顶了

烦。

【在 j****i 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Family 讨论区 】
: 发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
: 标 题: 小声问下这里的jmm,老公一般隔几天洗澡
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
: 我家老公总是不喜欢洗澡,一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
: 一次,那每天晚上都要洗屁屁,洗脸和洗脚;在我看来每天换内裤和袜子是必须的,特
: 受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种,每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
: 老公也是一肚子的气,我喜欢床上要干干净净的,每月至少洗床单被罩一次,他就开始
: 数落我。大家都是怎样处理这些事情的,还有我们结婚到现在一周年了,这些事情还是
: 没有协调过来。

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t*g
10
男人洗一次澡性欲就降低一次的。

烦。

【在 j****i 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Family 讨论区 】
: 发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
: 标 题: 小声问下这里的jmm,老公一般隔几天洗澡
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
: 我家老公总是不喜欢洗澡,一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
: 一次,那每天晚上都要洗屁屁,洗脸和洗脚;在我看来每天换内裤和袜子是必须的,特
: 受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种,每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
: 老公也是一肚子的气,我喜欢床上要干干净净的,每月至少洗床单被罩一次,他就开始
: 数落我。大家都是怎样处理这些事情的,还有我们结婚到现在一周年了,这些事情还是
: 没有协调过来。

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c*e
11
反了吧

【在 t******g 的大作中提到】
: 男人洗一次澡性欲就降低一次的。
:
: 烦。

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c*7
12
降一次,洗一次?

【在 c********e 的大作中提到】
: 反了吧
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x*a
13
这思维能力,牛!

【在 c*******7 的大作中提到】
: 降一次,洗一次?
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x*a
14
你多久没洗了?

【在 c********e 的大作中提到】
: 反了吧
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c*e
15
恩,洗洗就恢复了

【在 c*******7 的大作中提到】
: 降一次,洗一次?
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q*p
16
你是闺蜜,你不知道?

【在 x*****a 的大作中提到】
: 你多久没洗了?
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c*e
17
闺蜜知道这个就成小蜜了。

【在 q***p 的大作中提到】
: 你是闺蜜,你不知道?
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q*p
18
你果然聪明伶俐啊

【在 c********e 的大作中提到】
: 闺蜜知道这个就成小蜜了。
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d*8
19
很不错啦,我连牙都懒得刷

烦。

【在 j****i 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Family 讨论区 】
: 发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
: 标 题: 小声问下这里的jmm,老公一般隔几天洗澡
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
: 我家老公总是不喜欢洗澡,一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
: 一次,那每天晚上都要洗屁屁,洗脸和洗脚;在我看来每天换内裤和袜子是必须的,特
: 受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种,每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
: 老公也是一肚子的气,我喜欢床上要干干净净的,每月至少洗床单被罩一次,他就开始
: 数落我。大家都是怎样处理这些事情的,还有我们结婚到现在一周年了,这些事情还是
: 没有协调过来。

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r*3
20
xxoo也不洗洗?
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Z*l
21
不给XO,就不洗澡。

【在 r*******3 的大作中提到】
: xxoo也不洗洗?
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O*s
22
kao,一周一次,那大部分时间都是馊的
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v*3
23
搞积分制,洗一次澡10分,积到100分就xxoo一次。
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y*n
24
如果是冷的地方也凑合。热的地方,一周洗一次那味道估计跟homeless有的一拼了。
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P*k
25

好是好,不过这样太费水了

【在 v*******3 的大作中提到】
: 搞积分制,洗一次澡10分,积到100分就xxoo一次。
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b*e
26
按中国人习惯,那要10天才能ooxx一次

【在 v*******3 的大作中提到】
: 搞积分制,洗一次澡10分,积到100分就xxoo一次。
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l*k
27


烦。

【在 j****i 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Family 讨论区 】
: 发信人: yesonse (totoro), 信区: Family
: 标 题: 小声问下这里的jmm,老公一般隔几天洗澡
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
: 我家老公总是不喜欢洗澡,一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
: 一次,那每天晚上都要洗屁屁,洗脸和洗脚;在我看来每天换内裤和袜子是必须的,特
: 受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种,每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
: 老公也是一肚子的气,我喜欢床上要干干净净的,每月至少洗床单被罩一次,他就开始
: 数落我。大家都是怎样处理这些事情的,还有我们结婚到现在一周年了,这些事情还是
: 没有协调过来。

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g*d
28
这么脏也有人要
最少也得每两天洗一次啊

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发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
我家老公总是不喜欢洗澡,一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
一次,那每天晚上都要洗屁屁,洗脸和洗脚;在我看来每天换内裤和袜子是必须的,特
受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种,每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
老公也是一肚子的气,我喜欢床上要干干净净的,每月至少洗床单被罩一次,他就开始
数落我。大家都是怎样处理这些事情的,还有我们结婚到现在一周年了,这些事情还是
没有协调过来。

【在 j****i 的大作中提到】
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: 标 题: 小声问下这里的jmm,老公一般隔几天洗澡
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Mar 28 23:33:41 2011, 美东)
: 我家老公总是不喜欢洗澡,一周洗澡一回就和扒皮一样痛苦。我的要求是既然一周洗澡
: 一次,那每天晚上都要洗屁屁,洗脸和洗脚;在我看来每天换内裤和袜子是必须的,特
: 受不了老公有时连洗脸洗脚都免了的那种,每次都要为这种事而交涉真不是一般的麻烦。
: 老公也是一肚子的气,我喜欢床上要干干净净的,每月至少洗床单被罩一次,他就开始
: 数落我。大家都是怎样处理这些事情的,还有我们结婚到现在一周年了,这些事情还是
: 没有协调过来。

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f*l
29
按照中医理论/中国传说,洗澡伤身?

【在 c********e 的大作中提到】
: 反了吧
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s*l
30
不算什么。人家苏麻喇姑一年就一盆水洗洗,洗完了还把水喝了,照样活到90多岁。
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