g*h
2 楼
rt 两个蛋白，分子量差不多，动力学kon大概10e4，koff很小
m*b
3 楼
spr
g*h
4 楼
有没有真的懂的？
U*t
5 楼
不知你用何种方法测定的 “kon大概10e4，koff很小”。 如果 kon真的是～10e4，感
觉最终 KD 应在 low to sub-nanomolar.
准确测定 pM KD的方法有
KinExA,
MSD
BLI-ELISA
Gyros
等
SPR 大多时已经无法准确测定 sub-nanomolar affinity
参见
http://www.fortebio.com/interactions/Winter_2014/index6.html?LL
觉最终 KD 应在 low to sub-nanomolar.
准确测定 pM KD的方法有
KinExA,
MSD
BLI-ELISA
Gyros
等
SPR 大多时已经无法准确测定 sub-nanomolar affinity
参见
http://www.fortebio.com/interactions/Winter_2014/index6.html?LL
g*h
6 楼
非常感谢
【在 U*****t 的大作中提到】
: 不知你用何种方法测定的 “kon大概10e4，koff很小”。 如果 kon真的是～10e4，感
: 觉最终 KD 应在 low to sub-nanomolar.
: 准确测定 pM KD的方法有
: KinExA,
: MSD
: BLI-ELISA
: Gyros
: 等
: SPR 大多时已经无法准确测定 sub-nanomolar affinity
: 参见
【在 U*****t 的大作中提到】
: 不知你用何种方法测定的 “kon大概10e4，koff很小”。 如果 kon真的是～10e4，感
: 觉最终 KD 应在 low to sub-nanomolar.
: 准确测定 pM KD的方法有
: KinExA,
: MSD
: BLI-ELISA
: Gyros
: 等
: SPR 大多时已经无法准确测定 sub-nanomolar affinity
: 参见
e*y
7 楼
我用BLI/OctetRED最低测过小分子到700pM，kon大概5x10e5，koff大概10e-4.如果是蛋
白-蛋白作用，BLI应该最低能到10-20pM。但是同意楼上说的，如果你确定你的kon大概
10e4的话，不太可能会有pM的啊，也就sub nano级别。要不koff就要10e-6，-7的样子
。太慢了，BLI，SPR什么的也搞不定的。一般至少要10%的dissociation才能fit koff
，10e-6的koff， 10% off就要一天多。
【在 g*****h 的大作中提到】
: 非常感谢
白-蛋白作用，BLI应该最低能到10-20pM。但是同意楼上说的，如果你确定你的kon大概
10e4的话，不太可能会有pM的啊，也就sub nano级别。要不koff就要10e-6，-7的样子
。太慢了，BLI，SPR什么的也搞不定的。一般至少要10%的dissociation才能fit koff
，10e-6的koff， 10% off就要一天多。
【在 g*****h 的大作中提到】
: 非常感谢
g*h
8 楼
kon 是10e5， koff 用biacore dissociate了1个小时也看不到明显的解离，可能是10e
-7甚至10e-8级别的
BLI 或者spr只有在极端条件下才能测10pm的kd
koff
【在 e****y 的大作中提到】
: 我用BLI/OctetRED最低测过小分子到700pM，kon大概5x10e5，koff大概10e-4.如果是蛋
: 白-蛋白作用，BLI应该最低能到10-20pM。但是同意楼上说的，如果你确定你的kon大概
: 10e4的话，不太可能会有pM的啊，也就sub nano级别。要不koff就要10e-6，-7的样子
: 。太慢了，BLI，SPR什么的也搞不定的。一般至少要10%的dissociation才能fit koff
: ，10e-6的koff， 10% off就要一天多。
-7甚至10e-8级别的
BLI 或者spr只有在极端条件下才能测10pm的kd
koff
【在 e****y 的大作中提到】
: 我用BLI/OctetRED最低测过小分子到700pM，kon大概5x10e5，koff大概10e-4.如果是蛋
: 白-蛋白作用，BLI应该最低能到10-20pM。但是同意楼上说的，如果你确定你的kon大概
: 10e4的话，不太可能会有pM的啊，也就sub nano级别。要不koff就要10e-6，-7的样子
: 。太慢了，BLI，SPR什么的也搞不定的。一般至少要10%的dissociation才能fit koff
: ，10e-6的koff， 10% off就要一天多。
e*y
9 楼
对，10pM是理想状况了，实际上几乎没啥可能。照你描述的，所有kinetic based的
assay都没戏，koff太慢了。10e-7的话，10% dissociation是265小时。试试radio
labeled assay。或者看这一篇paper有没有帮助。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15711537
10e
【在 g*****h 的大作中提到】
: kon 是10e5， koff 用biacore dissociate了1个小时也看不到明显的解离，可能是10e
: -7甚至10e-8级别的
: BLI 或者spr只有在极端条件下才能测10pm的kd
:
: koff
assay都没戏，koff太慢了。10e-7的话，10% dissociation是265小时。试试radio
labeled assay。或者看这一篇paper有没有帮助。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15711537
10e
【在 g*****h 的大作中提到】
: kon 是10e5， koff 用biacore dissociate了1个小时也看不到明显的解离，可能是10e
: -7甚至10e-8级别的
: BLI 或者spr只有在极端条件下才能测10pm的kd
:
: koff
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