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有关Recovery of bisulfite genomic DNA的问题

有关Recovery of bisulfite genomic DNA的问题# Biology - 生物学

t*t2014-10-03 07:10

1 楼

还是一人寄一份？

r*g2014-10-03 07:10

2 楼

【以下文字转载自 WaterWorld 讨论区】
发信人: highcup (高脚杯), 信区: WaterWorld
标题: Re: 你们做过最令自己良心不安的事情是什么？
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Apr 23 00:14:09 2011, 美东)
诚心对待朋友, 却被他利用成满足他家高潮的工具

s*s2014-10-03 07:10

3 楼

实验碰到难题了。最近从原代细胞里提取了genomic DNA，在agarose（ETBR）胶上可以
看到很清楚的band。然后用新购买的Qiagen的Epitech Bilsulte kit作bisulite
treatment。gDNA的input量是2 ug。一切按照protocol做和DNA clean和column收集。
260／280 ratio 是2左右。但是到最后跑胶（200ng），什么都没有见到。做了几次，
都是这样。犹豫是否继续下一步的PCR。请有经验的大侠帮trouble shooting一下。不
胜感激。

g*e2014-10-03 07:10

4 楼

一人寄一份

g*62014-10-03 07:10

5 楼

直接pcr吧，一般conversion完了不用电泳看的。bisulfite conversion后大部分DNA降
解掉是正常的，尤其是qiagen kit.如果pcr做不出来可以试试zymo的kit,对DNA损伤小
一些。

b*M2014-10-03 07:10

6 楼

一人一份，加起来是两份。

k*o2014-10-03 07:10

7 楼

正常，继续。Bisulfite convert完了的DNA是单链DNA，用可以染单链DNA的dye才能看
到。

【在 s****s 的大作中提到】

: 实验碰到难题了。最近从原代细胞里提取了genomic DNA，在agarose（ETBR）胶上可以
: 看到很清楚的band。然后用新购买的Qiagen的Epitech Bilsulte kit作bisulite
: treatment。gDNA的input量是2 ug。一切按照protocol做和DNA clean和column收集。
: 260／280 ratio 是2左右。但是到最后跑胶（200ng），什么都没有见到。做了几次，
: 都是这样。犹豫是否继续下一步的PCR。请有经验的大侠帮trouble shooting一下。不
: 胜感激。