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对于捡单克隆细胞，现在人们怎么做？

对于捡单克隆细胞，现在人们怎么做？# Biology - 生物学

s*g2015-04-07 07:04

1 楼

以前都是稀世后放平皿里养。待出单细胞克隆的细胞群后，用小的圆柱体和凡士林固定
后，trypsin下来，再养。
现在也这样吗？哪种小小的圆柱体和凡士林大家哪里购买呢？
好久不做附着细胞的单克隆了。。。
谢谢各位能给与指导。

s*r2015-04-07 07:04

2 楼

在dish里铺很少细胞，长起来后在显微镜下面挑单克隆到96well里养

【在 s*****g 的大作中提到】

: 以前都是稀世后放平皿里养。待出单细胞克隆的细胞群后，用小的圆柱体和凡士林固定
: 后，trypsin下来，再养。
: 现在也这样吗？哪种小小的圆柱体和凡士林大家哪里购买呢？
: 好久不做附着细胞的单克隆了。。。
: 谢谢各位能给与指导。

v*a2015-04-07 07:04

3 楼

稀释后直接养在96孔板，每孔0.5-1个细胞，过一周左右显微镜下标记长单克隆的孔，
然后扩增就好

p*t2015-04-07 07:04

4 楼

FACS可以直接分单细胞到96孔板

s*s2015-04-07 07:04

5 楼

哈哈，发现楼上这些方法我都用过。
那种小环其实自己拿塑料移液管切几个也不麻烦。

【在 p****t 的大作中提到】

: FACS可以直接分单细胞到96孔板

B*r2015-04-07 07:04

6 楼

C1059 SIGMA sterile cloning cylinders with grease

s*g2015-04-07 07:04

7 楼

怎么切，用什么刀？怎么消毒？怎样保证切口平整？
牛人啊！
自打来了美国就没有当年在中国的“有条件要上，没有条件创造条件也要上”的劲头了。

【在 s******s 的大作中提到】

: 哈哈，发现楼上这些方法我都用过。
: 那种小环其实自己拿塑料移液管切几个也不麻烦。

s*g2015-04-07 07:04

8 楼

多谢！这个应该是我曾经用过的。

【在 B**********r 的大作中提到】

: C1059 SIGMA sterile cloning cylinders with grease

j*i2015-04-07 07:04

9 楼

等克隆长大一点，用带大概20ul培养液的枪头搓几下，然后吸上来不就行了吗？

s*g2015-04-07 07:04

10 楼

问题是一个平皿里有很多克隆。如果这样就只能采一个克隆。否则细胞扩散，不就把其
他克隆的细胞高混了么？

【在 j******i 的大作中提到】

: 等克隆长大一点，用带大概20ul培养液的枪头搓几下，然后吸上来不就行了吗？

s*g2015-04-07 07:04

11 楼

1。在dish里铺很少细胞，长起来后在显微镜下面挑单克隆到96well里养
这得克隆长多大啊，还得肉眼厉害。。。。
2。稀释分散到96孔板
好主意，悬浮细胞我就这么做来着
3。FACS SORT 到96孔板
这得带标记啊。有时GFP啥的未必是好东东。
4。等克隆长大一点，用带大概20ul培养液的枪头搓几下，然后吸上来不就行了吗？
问题是一个平皿里有很多单克隆。如果这样就只能采一个克隆。否则细胞扩散，不就把其
他克隆的细胞搞混了么？
5。C1059 SIGMA sterile cloning cylinders with grease
这是我以前传统用的手法。
现显微镜小标记，然后用cylinders with grease（trypsin)选出来，再放在小dish里
扩增。。。
谢谢各位亲们的宝贵建议！！！