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蛋白lysis buffer 含有8M urea电泳前需要加热吗?
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蛋白lysis buffer 含有8M urea电泳前需要加热吗?# Biology - 生物学
y*i
1
刚刚在petco买了一dozen的cricket用来养spider的
买好以后放在车里 逛mall
逛了三个小时出来时发现下雪了~~~~雪很大
我有点担心小小的cricket在车里 姓名攸关
看看他们。。不动了!!!!郁闷诶!
明儿过节了 商店都关门了 spider会饿的呃= =
把cricket很绝望的拿回家里
看电视
看到一半 听到 蛐蛐 蛐蛐 的 叫声
哇!原来cricket都复活了!!!
哈哈哈
spider不用饿了!
大家以后买cricket的时候 如果发现他们不动了 也许是冻僵了 别急着扔掉他们哦 不
然在野外就真的冷死 而不是冻僵而已了!
bless!
圣诞快乐!
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d*i
2
身边不同人意见不同。。。。。。。谢谢!
目的是裂解细胞抽取蛋白做western。buffer里还有SDS, GLYCEROL.
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i*a
3
加热也不多。

【在 d****i 的大作中提到】
: 身边不同人意见不同。。。。。。。谢谢!
: 目的是裂解细胞抽取蛋白做western。buffer里还有SDS, GLYCEROL.

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d*i
4

不多是什么意思?

【在 i**********a 的大作中提到】
: 加热也不多。
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m*y
5
意思就是加热不加热关系都不大

【在 d****i 的大作中提到】
:
: 不多是什么意思?

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j*9
6
不需要加热Z
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d*i
7
好吧,谢谢大家。看了都倾向于不加热。
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s*y
8
需要加热,不然的话细胞里释放出来的DNA 会把溶液搞得非常的粘

【在 d****i 的大作中提到】
: 身边不同人意见不同。。。。。。。谢谢!
: 目的是裂解细胞抽取蛋白做western。buffer里还有SDS, GLYCEROL.

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d*i
9

DNA我想用sonicate打碎。据说尿素加热分解会影响蛋白修饰。周围人说法不一。

【在 s******y 的大作中提到】
: 需要加热,不然的话细胞里释放出来的DNA 会把溶液搞得非常的粘
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s*y
10

是的,尿素加热会影响蛋白修饰。主要是有些修饰会产生化学反应。

【在 d****i 的大作中提到】
:
: DNA我想用sonicate打碎。据说尿素加热分解会影响蛋白修饰。周围人说法不一。

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K*S
11
don't do 95 degree or boiling, control the temperature under 60 and you will
be fine.

【在 d****i 的大作中提到】
:
: DNA我想用sonicate打碎。据说尿素加热分解会影响蛋白修饰。周围人说法不一。

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f*d
12
哦?那么heating之后DNA就沉淀了还是断了呢?

【在 s******y 的大作中提到】
: 需要加热,不然的话细胞里释放出来的DNA 会把溶液搞得非常的粘
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d*i
13
配尿素溶液时候说是不能超过37度,你这里说60是怎么回事?
[在 KingofMS (你太有才了) 的大作中提到:]
:don't do 95 degree or boiling, control the temperature under 60 and
you will be fine.

:...........
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r*8
14
有SDS必须加热到95C,或者沸水浴5分钟。
目的是把蛋白质变为单链。
跟尿素没关系。
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d*i
15
尿素不是可以变性吗?
[在 rabbit8 (兔子) 的大作中提到:]

:有SDS必须加热到95C,或者沸水浴5分钟。
:...........
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K*S
16
Urea will cause carbamylation of protein/peptides which is usually related
to temperature and freshness of Urea. Rule of thumb is below 60 degree the
reaction is pretty slow. 37 is definitely too conservative.

【在 d****i 的大作中提到】
: 配尿素溶液时候说是不能超过37度,你这里说60是怎么回事?
: [在 KingofMS (你太有才了) 的大作中提到:]
: :don't do 95 degree or boiling, control the temperature under 60 and
: you will be fine.
: :
: :...........

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v*m
17
顶。做蛋白修饰质谱分析的同修说得靠谱。

【在 K******S 的大作中提到】
: Urea will cause carbamylation of protein/peptides which is usually related
: to temperature and freshness of Urea. Rule of thumb is below 60 degree the
: reaction is pretty slow. 37 is definitely too conservative.

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d*i
18
western做出来了,发现在我手里8M urea不能迅速灭活蛋白修饰酶,我需要的PTM都没
有,阳性对照也没有。正在找原因。
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K*5
19
还用这么传统办法提蛋白?有spin column based kit。一两分钟搞定,几乎不会有大
genomic DNA,上胶前要加热的。

【在 d****i 的大作中提到】
: western做出来了,发现在我手里8M urea不能迅速灭活蛋白修饰酶,我需要的PTM都没
: 有,阳性对照也没有。正在找原因。

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d*i
20

目的不是去除genomic DNA,是让蛋白迅速变性。

【在 K******5 的大作中提到】
: 还用这么传统办法提蛋白?有spin column based kit。一两分钟搞定,几乎不会有大
: genomic DNA,上胶前要加热的。

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i*1
21
这帖子还没沉?
这问题不清楚。到底要跑胶看啥?8M urea 不足以denature所有的protein,特别是好
多酶类,所以很多的modification你都看不到了, 比如phosphorylation,
ubiquitination等. 可以75C左右加热5~10分钟,有carbamylation 和其他
modification产生,但总量不到~5%,大部分protein还在。总之,具体问题具体分析。
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