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CRISPR工具初学者问个简单的问题

CRISPR工具初学者问个简单的问题# Biology - 生物学

H*n2015-08-12 07:08

1 楼

生信博后第三年，真是累了。天天看文章，想idea，偶尔帮老板写写grant。最近特别
想找一个份Core数据分析的工作，钱少点就少点吧，至少生活轻松点，思想负担少点。
唯一担心的是晋升空间太有限。绿卡还遥遥无期。不知道版上点大牛都是如何自我鼓励
坚持到走tenure-track faculty到道路的？

s*12015-08-12 07:08

2 楼

addgene上买了zhang feng实验室的lentiCRISPR V2质粒，然后老板从文献上找了两个
sgRNA，克隆进去，做病毒，转染细胞，这些都是常规实验，没有任何问题。
然后老板让我测序看看是否对目的基因的编码序列产生影响。
由于是新手，看的文献也不多，请问大侠们，怎么能够测序分析出sRNA对目的基因的编
码序列的改变呢？
谢谢

b*r2015-08-12 07:08

3 楼

你要是美国比较好的学校计算机或者统计phd, 做三年博后，应该能找到TT faculty.
坚持

【在 H****n 的大作中提到】

: 生信博后第三年，真是累了。天天看文章，想idea，偶尔帮老板写写grant。最近特别
: 想找一个份Core数据分析的工作，钱少点就少点吧，至少生活轻松点，思想负担少点。
: 唯一担心的是晋升空间太有限。绿卡还遥遥无期。不知道版上点大牛都是如何自我鼓励
: 坚持到走tenure-track faculty到道路的？

j*n2015-08-12 07:08

4 楼

不是太明白？不就是看看有没deletion？

【在 s*******1 的大作中提到】

: addgene上买了zhang feng实验室的lentiCRISPR V2质粒，然后老板从文献上找了两个
: sgRNA，克隆进去，做病毒，转染细胞，这些都是常规实验，没有任何问题。
: 然后老板让我测序看看是否对目的基因的编码序列产生影响。
: 由于是新手，看的文献也不多，请问大侠们，怎么能够测序分析出sRNA对目的基因的编
: 码序列的改变呢？
: 谢谢

gr2015-08-12 07:08

5 楼

找不到为什么还找？找到tenure-track比你数据分析工作工资高很多？
来做tenure-track faculty的都是找一圈好几个offer的最后选了选。

【在 H****n 的大作中提到】

d*u2015-08-12 07:08

6 楼

第一种方法是你在你目的基因的target位置上下游个几百个bp的地方设计个引物拉PCR
，然后测序这个PCR产物就可以知道你的突变率了。
第二种方法是如果你挑单克隆了的话，直接把上述PCR产物做T载体然后测序

m*a2015-08-12 07:08

7 楼

会处理data的话，去一些金融公司，中部地区，2，3年就10几万了，朝九晚五

s*12015-08-12 07:08

8 楼

thank you

PCR

【在 d****u 的大作中提到】

: 第一种方法是你在你目的基因的target位置上下游个几百个bp的地方设计个引物拉PCR
: ，然后测序这个PCR产物就可以知道你的突变率了。
: 第二种方法是如果你挑单克隆了的话，直接把上述PCR产物做T载体然后测序

e*r2015-08-12 07:08

9 楼

这个要好好做一下功课，首先找教职这件事，只要沉下心来海量刷学校，总能找到，只
是好坏的区别，也就是说考量的基础不是能不能找到，而是要不要找，这取决于你是否
打算留在美国，如果是，那仔细研究一下最近的移民法案，如果通过了，之后的若干年
里大陆来美的就只能走EB1A, EB1B这条路了，工业界只能用完OPT回国，也就是很有可
能教职会变成留美最现实的一条路，无论你是否喜欢，都要试着申一下，竞争会变得很
惨烈。

【在 H****n 的大作中提到】

w*72015-08-12 07:08

10 楼

别误导别人了！工业界不会没有绿卡的。

: 这个要好好做一下功课，首先找教职这件事，只要沉下心来海量刷学校，总能找
到，只

: 是好坏的区别，也就是说考量的基础不是能不能找到，而是要不要找，这取决于
你是否

: 打算留在美国，如果是，那仔细研究一下最近的移民法案，如果通过了，之后的
若干年

: 里大陆来美的就只能走EB1A, EB1B这条路了，工业界只能用完OPT回国，也就是
很有可

: 能教职会变成留美最现实的一条路，无论你是否喜欢，都要试着申一下，竞争会
变得很

: 惨烈。

【在 e********r 的大作中提到】

: 这个要好好做一下功课，首先找教职这件事，只要沉下心来海量刷学校，总能找到，只
: 是好坏的区别，也就是说考量的基础不是能不能找到，而是要不要找，这取决于你是否
: 打算留在美国，如果是，那仔细研究一下最近的移民法案，如果通过了，之后的若干年
: 里大陆来美的就只能走EB1A, EB1B这条路了，工业界只能用完OPT回国，也就是很有可
: 能教职会变成留美最现实的一条路，无论你是否喜欢，都要试着申一下，竞争会变得很
: 惨烈。

g*t2015-08-12 07:08

11 楼

三年薄厚什么签证？
如果是funding充足的专业，老板给H1B，刚好薄厚办绿卡，找tt正合适
（但僧多粥少）
如果是政策不好，只给J1，很多学校指明了TT不收J1申请人
如果是funding不多的专业，每期postdoc只有1-2年，要做好用完OPT打包回国的准备
所以MIT Harvard那些人拖着9年10年不毕业，文章刷完还要教一年书
不是没有道理的

.

【在 b*******r 的大作中提到】

: 你要是美国比较好的学校计算机或者统计phd, 做三年博后，应该能找到TT faculty.
: 坚持

c*72015-08-12 07:08

12 楼

工业界，学术界同时准备，如果有文章和citation,可以跟老板商量走EB1b，只需换个
title 即可，毕竟有了绿卡找工作会容易一些。

【在 H****n 的大作中提到】

e*r2015-08-12 07:08

13 楼

有何高见说啊，别什么都说不出来蹦出来就比比，请问看过最近的很有可能通过的移民
法案吗，请问你出力帮着宣传了吗，键盘侠也需要敬业精神，什么都不懂扯什么啊。

【在 w*****7 的大作中提到】

: 别误导别人了！工业界不会没有绿卡的。
:
:
: 这个要好好做一下功课，首先找教职这件事，只要沉下心来海量刷学校，总能找
: 到，只
:
: 是好坏的区别，也就是说考量的基础不是能不能找到，而是要不要找，这取决于
: 你是否
:
: 打算留在美国，如果是，那仔细研究一下最近的移民法案，如果通过了，之后的
: 若干年
:
: 里大陆来美的就只能走EB1A, EB1B这条路了，工业界只能用完OPT回国，也就是
: 很有可

H*n2015-08-12 07:08

14 楼

谢各位。
本人现在H1B， OPT用了一年就转了H1B。组里funding比较足，老板也比较nice，虽然
push，但是也reasonable。如果继续待下去还能混个instructor什么的，但是收入也
很少。
PhD是学实验生物出生，也做些高通量数据分析，博后转成全生物信息数据分析。有一
篇CNS，然而参与的都是生物信息分析，没有独立的算法文章，成不了气候。正在申卡。
随着年纪增长，越来越多的要考虑家庭收入和未来规划。一熬夜精神就特别不好，也要
考虑高强度高压力的PI位置适不适合自己。最近几个月特别迷茫。
再谢各位建议。

【在 g******t 的大作中提到】

: 三年薄厚什么签证？
: 如果是funding充足的专业，老板给H1B，刚好薄厚办绿卡，找tt正合适
: （但僧多粥少）
: 如果是政策不好，只给J1，很多学校指明了TT不收J1申请人
: 如果是funding不多的专业，每期postdoc只有1-2年，要做好用完OPT打包回国的准备
: 所以MIT Harvard那些人拖着9年10年不毕业，文章刷完还要教一年书
: 不是没有道理的
:
: .

g*t2015-08-12 07:08

15 楼

没有算法文章找不了ttap的
不过工作稳定先顾好家庭生活也行

【在 H****n 的大作中提到】

:
: 谢各位。
: 本人现在H1B， OPT用了一年就转了H1B。组里funding比较足，老板也比较nice，虽然
: push，但是也reasonable。如果继续待下去还能混个instructor什么的，但是收入也
: 很少。
: PhD是学实验生物出生，也做些高通量数据分析，博后转成全生物信息数据分析。有一
: 篇CNS，然而参与的都是生物信息分析，没有独立的算法文章，成不了气候。正在申卡。
: 随着年纪增长，越来越多的要考虑家庭收入和未来规划。一熬夜精神就特别不好，也要
: 考虑高强度高压力的PI位置适不适合自己。最近几个月特别迷茫。
: 再谢各位建议。

H*n2015-08-12 07:08

16 楼

还没开始找，主要不知道自己的强项和定位在哪里

【在 gr 的大作中提到】

: 找不到为什么还找？找到tenure-track比你数据分析工作工资高很多？
: 来做tenure-track faculty的都是找一圈好几个offer的最后选了选。

l*s2015-08-12 07:08

17 楼

你的条件还是不错的。主要看postdoc期间是否能继续有好文章。再出一片CNS的话，找
教职应该问题不大。另外，应尽量申请K grant。周围有不少人没CNS，但仗着K grant
拿到教职的。

卡。

【在 H****n 的大作中提到】

: 还没开始找，主要不知道自己的强项和定位在哪里

w*72015-08-12 07:08

18 楼

小朋友，这种法案几年来一次，你还小，经历的看的不够多
自己脑经拧巴，不是错，出来误导别人就不对了

【在 e********r 的大作中提到】

: 有何高见说啊，别什么都说不出来蹦出来就比比，请问看过最近的很有可能通过的移民
: 法案吗，请问你出力帮着宣传了吗，键盘侠也需要敬业精神，什么都不懂扯什么啊。

m*m2015-08-12 07:08

19 楼

即使通过了，变数仍然很多，排期会被堵住多久，有没有显著影响，并不一定。。。尤
其是如果eb1真成了唯一途径，那竞争必然更惨烈，现在nsc已经这个样子了，到时候
tsc难度也要大增了吧。。。
而如有通过的140 h1b无限延，niw无论如何是能拿下来的，另外还有O1，那身份就不是
问题。最重要的是职业前景，职业但凡稳定，尚且能耗耗日子；如果做博后找不到教职
，两头不搭，钱也没有，回国也吃不开，要是不能马上拿到绿卡那日子就真艰险了。
要不要接着找教职，其实主要看这个过程和后果会不会太痛苦，个人以为，当这个问题
在心里产生的时候，可能就说明要想下是不是要放弃了。。。

【在 e********r 的大作中提到】