z*n
2 楼
【 以下文字转载自 GunsAndGears 讨论区 】
发信人: jawcn (HKholic), 信区: GunsAndGears
标 题: Re: 参加national guard咋样？
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Aug 10 16:49:33 2011, 美东)
就像我公司里的老头，越战的时候参加了coast guard，以为就在加州guard guard。但
是还是被派去越南。他反驳上司:"i join the coast guard, why you send me to Nam
?!"上司说:"we forgot to tell you which coast you will guard, sorry~~~"
发信人: jawcn (HKholic), 信区: GunsAndGears
标 题: Re: 参加national guard咋样？
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Aug 10 16:49:33 2011, 美东)
就像我公司里的老头，越战的时候参加了coast guard，以为就在加州guard guard。但
是还是被派去越南。他反驳上司:"i join the coast guard, why you send me to Nam
?!"上司说:"we forgot to tell you which coast you will guard, sorry~~~"
s*1
3 楼
计划验证几条human sgRNA，请问用293T 细胞系可以吗？
还是要用正常的细胞
谢谢
还是要用正常的细胞
谢谢
e*a
4 楼
yes, walmart and big5 sell it
and it looks like the regular one is good enough
【在 s**c 的大作中提到】
: Walmart，Big 5这些有卖吗？
: 是不是一般的就行了，有没有特殊要求？
: 3x
and it looks like the regular one is good enough
【在 s**c 的大作中提到】
: Walmart，Big 5这些有卖吗？
: 是不是一般的就行了，有没有特殊要求？
: 3x
R*a
5 楼
到了越南不去内陆也成啊
Nam
【在 z**n 的大作中提到】
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: 标 题: Re: 参加national guard咋样？
: 发信站: BBS 未名空间站 (Wed Aug 10 16:49:33 2011, 美东)
: 就像我公司里的老头，越战的时候参加了coast guard，以为就在加州guard guard。但
: 是还是被派去越南。他反驳上司:"i join the coast guard, why you send me to Nam
: ?!"上司说:"we forgot to tell you which coast you will guard, sorry~~~"
Nam
【在 z**n 的大作中提到】
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: 就像我公司里的老头，越战的时候参加了coast guard，以为就在加州guard guard。但
: 是还是被派去越南。他反驳上司:"i join the coast guard, why you send me to Nam
: ?!"上司说:"we forgot to tell you which coast you will guard, sorry~~~"
s*1
6 楼
ding
t*i
7 楼
what ? are you seriously going on that run ?
r*e
8 楼
This is a good one!!
Nam
【在 z**n 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 GunsAndGears 讨论区 】
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: 标 题: Re: 参加national guard咋样？
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: 就像我公司里的老头，越战的时候参加了coast guard，以为就在加州guard guard。但
: 是还是被派去越南。他反驳上司:"i join the coast guard, why you send me to Nam
: ?!"上司说:"we forgot to tell you which coast you will guard, sorry~~~"
Nam
【在 z**n 的大作中提到】
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: 标 题: Re: 参加national guard咋样？
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: 就像我公司里的老头，越战的时候参加了coast guard，以为就在加州guard guard。但
: 是还是被派去越南。他反驳上司:"i join the coast guard, why you send me to Nam
: ?!"上司说:"we forgot to tell you which coast you will guard, sorry~~~"
m*D
9 楼
我设计的时候没验证，主要是赶时间。
验证么，就是找一个transfection效率比较高的细胞，这个293显然合适。如果你的细
胞有很高的transfection efficiency,应该更好。理由是不同的细胞系之间会有SNP，
如果运气不好，正好在你的guide sequence之内，那在293验证的结果可能就不完全反
应你的细胞系的效率。
上面是我的理解。这里CRISPR expert多，清指正。我一般设计好guide sequence后，
会PCR一小段我准备用的细胞的genomic cDNA，测序保证没有SNP.上次测了一个2。5KB
片断，有三个SNP,但都不在我的guide sequences之内。
【在 s*******1 的大作中提到】
: 计划验证几条human sgRNA，请问用293T 细胞系可以吗？
: 还是要用正常的细胞
: 谢谢
验证么，就是找一个transfection效率比较高的细胞，这个293显然合适。如果你的细
胞有很高的transfection efficiency,应该更好。理由是不同的细胞系之间会有SNP，
如果运气不好，正好在你的guide sequence之内，那在293验证的结果可能就不完全反
应你的细胞系的效率。
上面是我的理解。这里CRISPR expert多，清指正。我一般设计好guide sequence后，
会PCR一小段我准备用的细胞的genomic cDNA，测序保证没有SNP.上次测了一个2。5KB
片断，有三个SNP,但都不在我的guide sequences之内。
【在 s*******1 的大作中提到】
: 计划验证几条human sgRNA，请问用293T 细胞系可以吗？
: 还是要用正常的细胞
: 谢谢
s*c
10 楼
why not?
【在 t****i 的大作中提到】
: what ? are you seriously going on that run ?
【在 t****i 的大作中提到】
: what ? are you seriously going on that run ?
Z*l
11 楼
军方认为越南整个都是coast。
【在 R***a 的大作中提到】
: 到了越南不去内陆也成啊
:
: Nam
【在 R***a 的大作中提到】
: 到了越南不去内陆也成啊
:
: Nam
s*r
12 楼
可以。平时用的熟的好养活的细胞系都行。
【在 s*******1 的大作中提到】
: ding
【在 s*******1 的大作中提到】
: ding
c*m
13 楼
should be able to buy online now. get those one-day pass will be good. $13.
40. I am not sure if the annual one needs the ocean enhance stamp, I guess
it's required.
40. I am not sure if the annual one needs the ocean enhance stamp, I guess
it's required.
s*1
14 楼
在大规模实验前，sgRNA能否抑制target Gene应该要确认下吧。
5KB
【在 m*********D 的大作中提到】
: 我设计的时候没验证，主要是赶时间。
: 验证么，就是找一个transfection效率比较高的细胞，这个293显然合适。如果你的细
: 胞有很高的transfection efficiency,应该更好。理由是不同的细胞系之间会有SNP，
: 如果运气不好，正好在你的guide sequence之内，那在293验证的结果可能就不完全反
: 应你的细胞系的效率。
: 上面是我的理解。这里CRISPR expert多，清指正。我一般设计好guide sequence后，
: 会PCR一小段我准备用的细胞的genomic cDNA，测序保证没有SNP.上次测了一个2。5KB
: 片断，有三个SNP,但都不在我的guide sequences之内。
5KB
【在 m*********D 的大作中提到】
: 我设计的时候没验证，主要是赶时间。
: 验证么，就是找一个transfection效率比较高的细胞，这个293显然合适。如果你的细
: 胞有很高的transfection efficiency,应该更好。理由是不同的细胞系之间会有SNP，
: 如果运气不好，正好在你的guide sequence之内，那在293验证的结果可能就不完全反
: 应你的细胞系的效率。
: 上面是我的理解。这里CRISPR expert多，清指正。我一般设计好guide sequence后，
: 会PCR一小段我准备用的细胞的genomic cDNA，测序保证没有SNP.上次测了一个2。5KB
: 片断，有三个SNP,但都不在我的guide sequences之内。
t*i
15 楼
Cleaning those little fish's a real pain, I spent a whole afternoon doing
that..
Quite tasty though.
【在 s**c 的大作中提到】
: why not?
that..
Quite tasty though.
【在 s**c 的大作中提到】
: why not?
m*D
16 楼
I used 2 guide sequences for co-transfection in case one of them did not
work. From my sequencing result, both of them worked.
【在 s*******1 的大作中提到】
: 在大规模实验前，sgRNA能否抑制target Gene应该要确认下吧。
:
: 5KB
work. From my sequencing result, both of them worked.
【在 s*******1 的大作中提到】
: 在大规模实验前，sgRNA能否抑制target Gene应该要确认下吧。
:
: 5KB
s*c
17 楼
good
then u can do that for me
thanx for your offering help
【在 t****i 的大作中提到】
: Cleaning those little fish's a real pain, I spent a whole afternoon doing
: that..
: Quite tasty though.
then u can do that for me
thanx for your offering help
【在 t****i 的大作中提到】
: Cleaning those little fish's a real pain, I spent a whole afternoon doing
: that..
: Quite tasty though.
r*t
18 楼
有个高人给我一个 link:
https://www.calicensetofish.com/
【在 s**c 的大作中提到】
: Walmart，Big 5这些有卖吗？
: 是不是一般的就行了，有没有特殊要求？
: 3x
https://www.calicensetofish.com/
【在 s**c 的大作中提到】
: Walmart，Big 5这些有卖吗？
: 是不是一般的就行了，有没有特殊要求？
: 3x
x*i
19 楼
回來路上路過我家不？
【在 s**c 的大作中提到】
: Walmart，Big 5这些有卖吗？
: 是不是一般的就行了，有没有特殊要求？
: 3x
T*T
20 楼
I offer my appetite and nothing else.
【在 s**c 的大作中提到】
: good
: then u can do that for me
: thanx for your offering help
【在 s**c 的大作中提到】
: good
: then u can do that for me
: thanx for your offering help
m*n
21 楼
问一下哪里有抓银鱼？
D*n
22 楼
都没人管的，不用证了。我之前去就是小猫两三只
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