f*n
2 楼
研究noncoding序列，因为各种原因无法使用dual luciferase；所以想直接用single
luciferase（比如Renilla）
问题是，对于single luciferase应该如何对照才有说服力呢？翻了半天过去的文献都
没找到
我能想到的一个是细胞使用量，这个用GAPDH就可以control
还有一个就是转染的plasmid的量，这个我转染的时候保证同样molar的就是同样数量的
plasmid进入细胞；具体做法就是nanodrop测得plasmid的质量，然后除以分子量。请问
这样的做法大家买账吗？
谢谢
luciferase（比如Renilla）
问题是，对于single luciferase应该如何对照才有说服力呢？翻了半天过去的文献都
没找到
我能想到的一个是细胞使用量，这个用GAPDH就可以control
还有一个就是转染的plasmid的量，这个我转染的时候保证同样molar的就是同样数量的
plasmid进入细胞；具体做法就是nanodrop测得plasmid的质量，然后除以分子量。请问
这样的做法大家买账吗？
谢谢
H*7
3 楼
485和打指纹的一起，一个人一张支票。
“官网上说We suggest that you use a separate check or money order for each
application in the package and biometric fees. ”
这个我认为是对不同申请的，很多申请都需要打指纹。485申请是一项申请，移民局还
有别的申请。
“官网上说We suggest that you use a separate check or money order for each
application in the package and biometric fees. ”
这个我认为是对不同申请的，很多申请都需要打指纹。485申请是一项申请，移民局还
有别的申请。
S*e
4 楼
为什么不能双荧光？洗耳恭听
【在 f*****n 的大作中提到】
: 研究noncoding序列，因为各种原因无法使用dual luciferase；所以想直接用single
: luciferase（比如Renilla）
: 问题是，对于single luciferase应该如何对照才有说服力呢？翻了半天过去的文献都
: 没找到
: 我能想到的一个是细胞使用量，这个用GAPDH就可以control
: 还有一个就是转染的plasmid的量，这个我转染的时候保证同样molar的就是同样数量的
: plasmid进入细胞；具体做法就是nanodrop测得plasmid的质量，然后除以分子量。请问
: 这样的做法大家买账吗？
: 谢谢
【在 f*****n 的大作中提到】
: 研究noncoding序列，因为各种原因无法使用dual luciferase；所以想直接用single
: luciferase（比如Renilla）
: 问题是，对于single luciferase应该如何对照才有说服力呢？翻了半天过去的文献都
: 没找到
: 我能想到的一个是细胞使用量，这个用GAPDH就可以control
: 还有一个就是转染的plasmid的量，这个我转染的时候保证同样molar的就是同样数量的
: plasmid进入细胞；具体做法就是nanodrop测得plasmid的质量，然后除以分子量。请问
: 这样的做法大家买账吗？
: 谢谢
m*D
5 楼
几个值得考虑的方式：
1。transfect a pool，然后再split，每个treatment分开作。
2。Stable cell lines--可以是一个pool（排除integration site问题），或几个不同
的克隆。
3。除了Dual-luc，还有其它co-transfect的reporter,如laz,或者一个不相关的
protein，用western来定量。
1。transfect a pool，然后再split，每个treatment分开作。
2。Stable cell lines--可以是一个pool（排除integration site问题），或几个不同
的克隆。
3。除了Dual-luc，还有其它co-transfect的reporter,如laz,或者一个不相关的
protein，用western来定量。
f*n
6 楼
我用的是psicheck-2的质粒，就是Renilla和Firefly在同一个plasmid上。Renilla是
control
我研究的这段noncoding序列有复杂的secondary structure，而且大概2kb，所以很可
能这样的序列会影响整个psicheck-2的空间结构和表达，包括作为internal control的
Renilla。
psicheck-2-noncoding-SNP-A和psicheck-2-noncoding-SNP-B，每次我用相同量的质粒
，相同数量的细胞转染，这个internal control的Renilla总是有明显差别；所以觉得
这里的control是没用的，但同时也说明在转录水平SNP-A和B有差别。
所以我的问题是：
1. 还是用这套系统，但我做RNA level的qPCR，我用GAPDH来控制细胞数量，同时我保
证转染加入的plasmid是相
同的量，那么我做出来的表达差别是否可信？可否发表？
2. 当然我可以重新找一个single Renilla vector，把noncoding插到这个vector上，
然后co-transfect一个独立的另外Firefly control。关于这个single vector，有经验
的前辈们是否有啥推荐？
谢谢
【在 S**********e 的大作中提到】
: 为什么不能双荧光？洗耳恭听
control
我研究的这段noncoding序列有复杂的secondary structure，而且大概2kb，所以很可
能这样的序列会影响整个psicheck-2的空间结构和表达，包括作为internal control的
Renilla。
psicheck-2-noncoding-SNP-A和psicheck-2-noncoding-SNP-B，每次我用相同量的质粒
，相同数量的细胞转染，这个internal control的Renilla总是有明显差别；所以觉得
这里的control是没用的，但同时也说明在转录水平SNP-A和B有差别。
所以我的问题是：
1. 还是用这套系统，但我做RNA level的qPCR，我用GAPDH来控制细胞数量，同时我保
证转染加入的plasmid是相
同的量，那么我做出来的表达差别是否可信？可否发表？
2. 当然我可以重新找一个single Renilla vector，把noncoding插到这个vector上，
然后co-transfect一个独立的另外Firefly control。关于这个single vector，有经验
的前辈们是否有啥推荐？
谢谢
【在 S**********e 的大作中提到】
: 为什么不能双荧光？洗耳恭听
f*n
7 楼
transfect a pool，然后再split？
请教这是啥意思？我每次6-well plate都转染2ug，然后收细胞的时候都分成三份，进
行实验。是这个意思吗？
【在 m*********D 的大作中提到】
: 几个值得考虑的方式：
: 1。transfect a pool，然后再split，每个treatment分开作。
: 2。Stable cell lines--可以是一个pool（排除integration site问题），或几个不同
: 的克隆。
: 3。除了Dual-luc，还有其它co-transfect的reporter,如laz,或者一个不相关的
: protein，用western来定量。
请教这是啥意思？我每次6-well plate都转染2ug，然后收细胞的时候都分成三份，进
行实验。是这个意思吗？
【在 m*********D 的大作中提到】
: 几个值得考虑的方式：
: 1。transfect a pool，然后再split，每个treatment分开作。
: 2。Stable cell lines--可以是一个pool（排除integration site问题），或几个不同
: 的克隆。
: 3。除了Dual-luc，还有其它co-transfect的reporter,如laz,或者一个不相关的
: protein，用western来定量。
相关阅读
写review这样算抄袭吗？申请HHMI postdoc气死我了菜鸟求教stranded RNA-seqpaper help需要三个journal审稿人（keywords:AFM, DNA molecules, Nicks）2015 M&M Portland会议 求宾馆合住为了出名上位，这位美女无所不用其极(18+) (转载)能说一下科大的薛天如果从一个千年博后转身成为科大生科院院长的码？安钧璨乙肝病毒携带者，大侠们，治疗乙肝有什么最新突破吗？跟风说亚美尼亚人我这种情况能找到博后吗发包子为自己找工作和家里LD考试求祝福！生物PhD回国去当公务员是否可行求助：查一个基因表达和某种疾病生存曲线的数据库“间谍案”的集体失语说明千人计划就是几千头猪bing ren 算是大牛么白血病学子邵翼泽病逝 (转载)征审稿人，肿瘤方面 (gone)review "review article"