请教：相似抗体的分离纯化# Biology - 生物学
c*a
1 楼
请问对于不在电话服务商网站更新的手机和计划，能要求服务商给employee discount
么?比如在戴尔买了note ii,开通后再要求Verizon 给加每个月15%的月费折扣，
verizon会给么?多谢!
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verizon会给么?多谢!
c*9
2 楼
目前在做一个课题， 想把重组表达的抗体（两条重链不同， 标为A，B）， 中的目标
抗体1（包含一条重链A， 另一条重链B， pI=8.5）和抗体2 （包含两条重链A， pI=8.
7）及抗体3（包含两条重链B， pI=8.1）中分离纯化出来。
在用Protein A做完第一步纯化后，我用阴离子交换柱纯化，试验了pH值和盐离子洗脱
， 都很难把抗体1和2分离开来。
请教一下，如何才能很好地把1从2和3（尤其是2）中分离纯化出来？
谢谢！ （提供解决方法， 派发包子致谢）
抗体1（包含一条重链A， 另一条重链B， pI=8.5）和抗体2 （包含两条重链A， pI=8.
7）及抗体3（包含两条重链B， pI=8.1）中分离纯化出来。
在用Protein A做完第一步纯化后，我用阴离子交换柱纯化，试验了pH值和盐离子洗脱
， 都很难把抗体1和2分离开来。
请教一下，如何才能很好地把1从2和3（尤其是2）中分离纯化出来？
谢谢！ （提供解决方法， 派发包子致谢）
x*g
3 楼
会
[发表自未名空间手机版 - m.mitbbs.com]
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t*a
4 楼
把1，2，3分别克隆到表达载体，分开表达。
8.
【在 c******9 的大作中提到】
: 目前在做一个课题， 想把重组表达的抗体（两条重链不同， 标为A，B）， 中的目标
: 抗体1（包含一条重链A， 另一条重链B， pI=8.5）和抗体2 （包含两条重链A， pI=8.
: 7）及抗体3（包含两条重链B， pI=8.1）中分离纯化出来。
: 在用Protein A做完第一步纯化后，我用阴离子交换柱纯化，试验了pH值和盐离子洗脱
: ， 都很难把抗体1和2分离开来。
: 请教一下，如何才能很好地把1从2和3（尤其是2）中分离纯化出来？
: 谢谢！ （提供解决方法， 派发包子致谢）
8.
【在 c******9 的大作中提到】
: 目前在做一个课题， 想把重组表达的抗体（两条重链不同， 标为A，B）， 中的目标
: 抗体1（包含一条重链A， 另一条重链B， pI=8.5）和抗体2 （包含两条重链A， pI=8.
: 7）及抗体3（包含两条重链B， pI=8.1）中分离纯化出来。
: 在用Protein A做完第一步纯化后，我用阴离子交换柱纯化，试验了pH值和盐离子洗脱
: ， 都很难把抗体1和2分离开来。
: 请教一下，如何才能很好地把1从2和3（尤其是2）中分离纯化出来？
: 谢谢！ （提供解决方法， 派发包子致谢）
b*g
5 楼
加tag， tandem purify.再切掉tag?
c*9
6 楼
抗体有两条重链， 所以将想获得的抗体的两条重链同时表达（还包括轻链），才能获
得目标抗体1。结果就出现副产物2 以及3. 现在想把目标抗体，与副产物2和3分离开。
【在 t*****a 的大作中提到】
: 把1，2，3分别克隆到表达载体，分开表达。
:
: 8.
得目标抗体1。结果就出现副产物2 以及3. 现在想把目标抗体，与副产物2和3分离开。
【在 t*****a 的大作中提到】
: 把1，2，3分别克隆到表达载体，分开表达。
:
: 8.
c*9
7 楼
能否详细说说？ 谢谢！
【在 b*******g 的大作中提到】
: 加tag， tandem purify.再切掉tag?
【在 b*******g 的大作中提到】
: 加tag， tandem purify.再切掉tag?
t*m
8 楼
做双抗，去除AA，BB是基本操作
比较成熟的经验最好去请教做过双抗cmc的
实验室水平小量制备的话，有很多发表的文献可以参考
8.
【在 c******9 的大作中提到】
: 目前在做一个课题， 想把重组表达的抗体（两条重链不同， 标为A，B）， 中的目标
: 抗体1（包含一条重链A， 另一条重链B， pI=8.5）和抗体2 （包含两条重链A， pI=8.
: 7）及抗体3（包含两条重链B， pI=8.1）中分离纯化出来。
: 在用Protein A做完第一步纯化后，我用阴离子交换柱纯化，试验了pH值和盐离子洗脱
: ， 都很难把抗体1和2分离开来。
: 请教一下，如何才能很好地把1从2和3（尤其是2）中分离纯化出来？
: 谢谢！ （提供解决方法， 派发包子致谢）
比较成熟的经验最好去请教做过双抗cmc的
实验室水平小量制备的话，有很多发表的文献可以参考
8.
【在 c******9 的大作中提到】
: 目前在做一个课题， 想把重组表达的抗体（两条重链不同， 标为A，B）， 中的目标
: 抗体1（包含一条重链A， 另一条重链B， pI=8.5）和抗体2 （包含两条重链A， pI=8.
: 7）及抗体3（包含两条重链B， pI=8.1）中分离纯化出来。
: 在用Protein A做完第一步纯化后，我用阴离子交换柱纯化，试验了pH值和盐离子洗脱
: ， 都很难把抗体1和2分离开来。
: 请教一下，如何才能很好地把1从2和3（尤其是2）中分离纯化出来？
: 谢谢！ （提供解决方法， 派发包子致谢）
g*1
9 楼
可以把两条HC做成knob and hole或者charge pair. 这都是很成熟的技术。搜索一下
bispecific antibody就能知道怎么做。
bispecific antibody就能知道怎么做。
I*y
10 楼
兄弟啊，柱子也用错了吧。应该用阳离子交换柱，然后buffer环境应该是6或者6.5。梯
度拉的慢一点，虽然可能也没啥用，PI相差太小了。实在不行，就如同楼上说的，用发
表过的charge pair表达就行了。
度拉的慢一点，虽然可能也没啥用，PI相差太小了。实在不行，就如同楼上说的，用发
表过的charge pair表达就行了。
g*5
11 楼
两条重链是IgG1和IgG4吧。一般要突变一下，让这好像是突变IgG4的fc，让它不和
protein A 结合，然后pH 梯度洗脱。摸条件让峰分开。
Knobs-into-holes 也是常用的。
你用common Light chain?
protein A 结合，然后pH 梯度洗脱。摸条件让峰分开。
Knobs-into-holes 也是常用的。
你用common Light chain?
c*9
12 楼
非常感谢楼上各位的专建议和解答！非常有用的信息。
大岛， 你好， 我是用的common light chain， 也使用的kno-into-hole。现在是pH和
盐洗脱的条件都初步试过， 两个峰都是非不太开（重叠部分比较多）。
【在 g*********5 的大作中提到】
: 两条重链是IgG1和IgG4吧。一般要突变一下，让这好像是突变IgG4的fc，让它不和
: protein A 结合，然后pH 梯度洗脱。摸条件让峰分开。
: Knobs-into-holes 也是常用的。
: 你用common Light chain?
大岛， 你好， 我是用的common light chain， 也使用的kno-into-hole。现在是pH和
盐洗脱的条件都初步试过， 两个峰都是非不太开（重叠部分比较多）。
【在 g*********5 的大作中提到】
: 两条重链是IgG1和IgG4吧。一般要突变一下，让这好像是突变IgG4的fc，让它不和
: protein A 结合，然后pH 梯度洗脱。摸条件让峰分开。
: Knobs-into-holes 也是常用的。
: 你用common Light chain?
c*9
13 楼
谢谢！
现在用knob and hole。 再去考虑一下charge pair。
【在 g*****1 的大作中提到】
: 可以把两条HC做成knob and hole或者charge pair. 这都是很成熟的技术。搜索一下
: bispecific antibody就能知道怎么做。
现在用knob and hole。 再去考虑一下charge pair。
【在 g*****1 的大作中提到】
: 可以把两条HC做成knob and hole或者charge pair. 这都是很成熟的技术。搜索一下
: bispecific antibody就能知道怎么做。
c*9
14 楼
兄弟好！ 阴阳离子都用过， 感觉还是阴离子的效果稍好。 这可能是这个抗体蛋白的
特性决定的？还是其他？ 对， 现在想再把梯度拉慢一些看看。
【在 I********y 的大作中提到】
: 兄弟啊，柱子也用错了吧。应该用阳离子交换柱，然后buffer环境应该是6或者6.5。梯
: 度拉的慢一点，虽然可能也没啥用，PI相差太小了。实在不行，就如同楼上说的，用发
: 表过的charge pair表达就行了。
特性决定的？还是其他？ 对， 现在想再把梯度拉慢一些看看。
【在 I********y 的大作中提到】
: 兄弟啊，柱子也用错了吧。应该用阳离子交换柱，然后buffer环境应该是6或者6.5。梯
: 度拉的慢一点，虽然可能也没啥用，PI相差太小了。实在不行，就如同楼上说的，用发
: 表过的charge pair表达就行了。
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