现在工作形势咋样了？# Chemistry - 化学
m*g
1 楼
LD在国内，我们想弄一个可以发短信的软件。我看飞信的review里有人说在美国用的很
好。结果下载了，注册了账号了，登陆的时候被告知此版本不支持非中国移动用户登陆。
来这里确定一下。
同时问一下有什么办法和国内的手机发短信？谢谢。
好。结果下载了，注册了账号了，登陆的时候被告知此版本不支持非中国移动用户登陆。
来这里确定一下。
同时问一下有什么办法和国内的手机发短信？谢谢。
s*x
2 楼
我现在做一个MUTATION。那到菌落后， 提DNA。可是我的DNA SEQUENCE 结果非常糟糕
。测出来的也不知道是什么。根本不对。 SIGNAL／NOISE 比例特低。 DNA QUALITY是
，没有问题的。我测过OD。而且是溶在水里的。用的是T７的PRIMER。 SELECTIVE
ANTIBIOTICS 是 CHLORAMPHENICOL。 我想知道： 大家如遇到这中情况是解决的？
CHLORAMPHENICOL 大家是如何使用的？ 我的是溶在酒精。多谢多谢。 已经纠缠１个月
了。 有点伤自尊啦 。
。测出来的也不知道是什么。根本不对。 SIGNAL／NOISE 比例特低。 DNA QUALITY是
，没有问题的。我测过OD。而且是溶在水里的。用的是T７的PRIMER。 SELECTIVE
ANTIBIOTICS 是 CHLORAMPHENICOL。 我想知道： 大家如遇到这中情况是解决的？
CHLORAMPHENICOL 大家是如何使用的？ 我的是溶在酒精。多谢多谢。 已经纠缠１个月
了。 有点伤自尊啦 。
p*3
3 楼
好找点了没？。
L*y
4 楼
弄个移动的号?
LD在国内，我们想弄一个可以发短信的软件。我看飞信的review里有人说在美国用的很
好。结果下载了，注册了账号了，登陆的时候被告知此版本不支持非中国移动用户登陆。
来这里确定一下。
同时问一下有什么办法和国内的手机发短信？谢谢。
【在 m**********g 的大作中提到】
: LD在国内，我们想弄一个可以发短信的软件。我看飞信的review里有人说在美国用的很
: 好。结果下载了，注册了账号了，登陆的时候被告知此版本不支持非中国移动用户登陆。
: 来这里确定一下。
: 同时问一下有什么办法和国内的手机发短信？谢谢。
LD在国内，我们想弄一个可以发短信的软件。我看飞信的review里有人说在美国用的很
好。结果下载了，注册了账号了，登陆的时候被告知此版本不支持非中国移动用户登陆。
来这里确定一下。
同时问一下有什么办法和国内的手机发短信？谢谢。
【在 m**********g 的大作中提到】
: LD在国内，我们想弄一个可以发短信的软件。我看飞信的review里有人说在美国用的很
: 好。结果下载了，注册了账号了，登陆的时候被告知此版本不支持非中国移动用户登陆。
: 来这里确定一下。
: 同时问一下有什么办法和国内的手机发短信？谢谢。
T*t
5 楼
DNA quality和你用的antibiotics没什么必然联系吧。Chloramphenicol用酒精溶没什
么错。
你的质粒是怎么提的？DNA quality不是光看OD就行了啊。你做过限制酶切然后跑胶看
么？你送去测序的质粒浓度是多少？太浓或者太稀都可能测不好，质粒测序的模板用量
在200-500ng之间结果最好。
么错。
你的质粒是怎么提的？DNA quality不是光看OD就行了啊。你做过限制酶切然后跑胶看
么？你送去测序的质粒浓度是多少？太浓或者太稀都可能测不好，质粒测序的模板用量
在200-500ng之间结果最好。
L*e
6 楼
感觉没有
x*s
7 楼
我为了用飞信，办了一个移动的号
陆。
【在 m**********g 的大作中提到】
: LD在国内，我们想弄一个可以发短信的软件。我看飞信的review里有人说在美国用的很
: 好。结果下载了，注册了账号了，登陆的时候被告知此版本不支持非中国移动用户登陆。
: 来这里确定一下。
: 同时问一下有什么办法和国内的手机发短信？谢谢。
陆。
【在 m**********g 的大作中提到】
: LD在国内，我们想弄一个可以发短信的软件。我看飞信的review里有人说在美国用的很
: 好。结果下载了，注册了账号了，登陆的时候被告知此版本不支持非中国移动用户登陆。
: 来这里确定一下。
: 同时问一下有什么办法和国内的手机发短信？谢谢。
s*x
8 楼
extracted DNA with mini prep. as required, DNA concentration is 50ng/ml.any
suggestion is greatly appreciated.
suggestion is greatly appreciated.
p*3
9 楼
不是说美国经济好转了吗？咋还是不好找。
【在 L*****e 的大作中提到】
: 感觉没有
【在 L*****e 的大作中提到】
: 感觉没有
m*g
10 楼
这个怎么收费的？有人知道吗？
我可以用我爸爸或者妈妈的账号，我猜，但是他们是不是还要去专门开通这项业务？
陆。
【在 L*****y 的大作中提到】
: 弄个移动的号?
:
: LD在国内，我们想弄一个可以发短信的软件。我看飞信的review里有人说在美国用的很
: 好。结果下载了，注册了账号了，登陆的时候被告知此版本不支持非中国移动用户登陆。
: 来这里确定一下。
: 同时问一下有什么办法和国内的手机发短信？谢谢。
我可以用我爸爸或者妈妈的账号，我猜，但是他们是不是还要去专门开通这项业务？
陆。
【在 L*****y 的大作中提到】
: 弄个移动的号?
:
: LD在国内，我们想弄一个可以发短信的软件。我看飞信的review里有人说在美国用的很
: 好。结果下载了，注册了账号了，登陆的时候被告知此版本不支持非中国移动用户登陆。
: 来这里确定一下。
: 同时问一下有什么办法和国内的手机发短信？谢谢。
h*g
11 楼
做酶切确定是那个质粒，有的时候质粒污染不是你做的那个，sequencing primer自然
粘不上。
粘不上。
s*a
12 楼
好像好了很多
很多千老都找到了
【在 p******3 的大作中提到】
: 好找点了没？。
很多千老都找到了
【在 p******3 的大作中提到】
: 好找点了没？。
m*g
13 楼
是有个号就行？还是必须去开通这个业务。比如我用我爸妈的号？
【在 x*********s 的大作中提到】
: 我为了用飞信，办了一个移动的号
:
: 陆。
【在 x*********s 的大作中提到】
: 我为了用飞信，办了一个移动的号
:
: 陆。
l*a
14 楼
DNA 量可以再减，mini prep 的时候如果用太多的细菌，会overflow 你的column，造
成太多杂质和盐混在DNA 溶液里，然后影响 sequencing reaction.
成太多杂质和盐混在DNA 溶液里，然后影响 sequencing reaction.
a*1
15 楼
Yep...
【在 s***a 的大作中提到】
: 好像好了很多
: 很多千老都找到了
【在 s***a 的大作中提到】
: 好像好了很多
: 很多千老都找到了
L*y
16 楼
发短信就可以开通. 每个月好像6块
这个怎么收费的？有人知道吗？
我可以用我爸爸或者妈妈的账号，我猜，但是他们是不是还要去专门开通这项业务？
陆。
【在 m**********g 的大作中提到】
: 这个怎么收费的？有人知道吗？
: 我可以用我爸爸或者妈妈的账号，我猜，但是他们是不是还要去专门开通这项业务？
:
: 陆。
这个怎么收费的？有人知道吗？
我可以用我爸爸或者妈妈的账号，我猜，但是他们是不是还要去专门开通这项业务？
陆。
【在 m**********g 的大作中提到】
: 这个怎么收费的？有人知道吗？
: 我可以用我爸爸或者妈妈的账号，我猜，但是他们是不是还要去专门开通这项业务？
:
: 陆。
T*t
17 楼
50ng/ml还是50ng/ul啊？前者的话，就太稀了。
B*s
18 楼
有多好，能具体说说么？
比如什么背景
【在 a*******1 的大作中提到】
: Yep...
比如什么背景
【在 a*******1 的大作中提到】
: Yep...
e*r
19 楼
textfree
d*a
20 楼
design your own sequencing primers. purify DNA.
a*1
21 楼
Organic/nano...
【在 B*****s 的大作中提到】
: 有多好，能具体说说么？
: 比如什么背景
【在 B*****s 的大作中提到】
: 有多好，能具体说说么？
: 比如什么背景
g*n
22 楼
只能发美国的号
【在 e*****r 的大作中提到】
: textfree
【在 e*****r 的大作中提到】
: textfree
C*e
23 楼
就是50 ng/ul也有点低
有的时候可以测出来
不过一般都会要求在100 ng/ul以上吧
跑个胶看看
另外乙醇沉淀、浓缩一下
有的时候可以测出来
不过一般都会要求在100 ng/ul以上吧
跑个胶看看
另外乙醇沉淀、浓缩一下
s*a
24 楼
不用开通 有号码就可以了
【在 m**********g 的大作中提到】
: 是有个号就行？还是必须去开通这个业务。比如我用我爸妈的号？
【在 m**********g 的大作中提到】
: 是有个号就行？还是必须去开通这个业务。比如我用我爸妈的号？
T*t
25 楼
50ng/ul够了啊，多加几微升不就行了。:) 我送过20ug/ul的样品也测出来过的。关键
还是要够纯。
【在 C*******e 的大作中提到】
: 就是50 ng/ul也有点低
: 有的时候可以测出来
: 不过一般都会要求在100 ng/ul以上吧
: 跑个胶看看
: 另外乙醇沉淀、浓缩一下
还是要够纯。
【在 C*******e 的大作中提到】
: 就是50 ng/ul也有点低
: 有的时候可以测出来
: 不过一般都会要求在100 ng/ul以上吧
: 跑个胶看看
: 另外乙醇沉淀、浓缩一下
x*s
26 楼
现在不用钱了
【在 L*****y 的大作中提到】
: 发短信就可以开通. 每个月好像6块
:
: 这个怎么收费的？有人知道吗？
: 我可以用我爸爸或者妈妈的账号，我猜，但是他们是不是还要去专门开通这项业务？
: 陆。
【在 L*****y 的大作中提到】
: 发短信就可以开通. 每个月好像6块
:
: 这个怎么收费的？有人知道吗？
: 我可以用我爸爸或者妈妈的账号，我猜，但是他们是不是还要去专门开通这项业务？
: 陆。
n*w
27 楼
做出来先做个pcr什么的，确定一下，然后测序。。。
lz总比我上次遇到的要好一些。。。
我提完以后，跑了pcr，发现，嗯，那个条带在那里，说明我插到ta vector了，可是测
序回来，t7和sp6返回的基本都差不多，就那100bp左右。。我傻了。。。其他2.3kb呢
。。。。
lz总比我上次遇到的要好一些。。。
我提完以后，跑了pcr，发现，嗯，那个条带在那里，说明我插到ta vector了，可是测
序回来，t7和sp6返回的基本都差不多，就那100bp左右。。我傻了。。。其他2.3kb呢
。。。。
X*O
28 楼
先用PC客户端软件去注册,
然后在手机上用飞信.
1.用ET飞信,支持WiFi和美国的3G/GPRS,但是只能发不能收.
2.或者用WAP飞信,支持wifi和3G/GPRS, 可以收发.
另外PC的客户端就随便收发了.
如果你要发给普通手机,你必须有移动公司的手机号.
然后在手机上用飞信.
1.用ET飞信,支持WiFi和美国的3G/GPRS,但是只能发不能收.
2.或者用WAP飞信,支持wifi和3G/GPRS, 可以收发.
另外PC的客户端就随便收发了.
如果你要发给普通手机,你必须有移动公司的手机号.
s*x
29 楼
我可能犯了一个错误。 我只是MUTATE 一个AA，而我用的是MULTI－MUTATION 的 KIT。
（现有的）。我不知两个KIT有何不同。MILTI KIT是否可用在SINGLE AA MUTATION 上
。
（现有的）。我不知两个KIT有何不同。MILTI KIT是否可用在SINGLE AA MUTATION 上
。
l*C
30 楼
没事
【在 s**x 的大作中提到】
: 我可能犯了一个错误。 我只是MUTATE 一个AA，而我用的是MULTI－MUTATION 的 KIT。
: （现有的）。我不知两个KIT有何不同。MILTI KIT是否可用在SINGLE AA MUTATION 上
: 。
【在 s**x 的大作中提到】
: 我可能犯了一个错误。 我只是MUTATE 一个AA，而我用的是MULTI－MUTATION 的 KIT。
: （现有的）。我不知两个KIT有何不同。MILTI KIT是否可用在SINGLE AA MUTATION 上
: 。
g*y
31 楼
1. 用的什么competent cell
2. 你spin down cell 的时候离心机多少转速。
3. mini prep的p1 有没有加Rnase. 是不是保存冰箱里。
4. mini prep 时, 加p2后有没有超过5 分钟？
5.mini prep 加p3后是怎么mix的
6.你用的水有没有auto clave.
7.你pick了多少colony?
【在 s**x 的大作中提到】
: 我现在做一个MUTATION。那到菌落后， 提DNA。可是我的DNA SEQUENCE 结果非常糟糕
: 。测出来的也不知道是什么。根本不对。 SIGNAL／NOISE 比例特低。 DNA QUALITY是
: ，没有问题的。我测过OD。而且是溶在水里的。用的是T７的PRIMER。 SELECTIVE
: ANTIBIOTICS 是 CHLORAMPHENICOL。 我想知道： 大家如遇到这中情况是解决的？
: CHLORAMPHENICOL 大家是如何使用的？ 我的是溶在酒精。多谢多谢。 已经纠缠１个月
: 了。 有点伤自尊啦 。
2. 你spin down cell 的时候离心机多少转速。
3. mini prep的p1 有没有加Rnase. 是不是保存冰箱里。
4. mini prep 时, 加p2后有没有超过5 分钟？
5.mini prep 加p3后是怎么mix的
6.你用的水有没有auto clave.
7.你pick了多少colony?
【在 s**x 的大作中提到】
: 我现在做一个MUTATION。那到菌落后， 提DNA。可是我的DNA SEQUENCE 结果非常糟糕
: 。测出来的也不知道是什么。根本不对。 SIGNAL／NOISE 比例特低。 DNA QUALITY是
: ，没有问题的。我测过OD。而且是溶在水里的。用的是T７的PRIMER。 SELECTIVE
: ANTIBIOTICS 是 CHLORAMPHENICOL。 我想知道： 大家如遇到这中情况是解决的？
: CHLORAMPHENICOL 大家是如何使用的？ 我的是溶在酒精。多谢多谢。 已经纠缠１个月
: 了。 有点伤自尊啦 。
g*y
32 楼
50ng/ml这个浓度非常非常的低。一般 至少都是50ug/ul
any
【在 s**x 的大作中提到】
: 我可能犯了一个错误。 我只是MUTATE 一个AA，而我用的是MULTI－MUTATION 的 KIT。
: （现有的）。我不知两个KIT有何不同。MILTI KIT是否可用在SINGLE AA MUTATION 上
: 。
any
【在 s**x 的大作中提到】
: 我可能犯了一个错误。 我只是MUTATE 一个AA，而我用的是MULTI－MUTATION 的 KIT。
: （现有的）。我不知两个KIT有何不同。MILTI KIT是否可用在SINGLE AA MUTATION 上
: 。
c*y
33 楼
【在 s**x 的大作中提到】
: 我现在做一个MUTATION。那到菌落后， 提DNA。可是我的DNA SEQUENCE 结果非常糟糕
: 。测出来的也不知道是什么。根本不对。 SIGNAL／NOISE 比例特低。 DNA QUALITY是
: ，没有问题的。我测过OD。而且是溶在水里的。用的是T７的PRIMER。 SELECTIVE
: ANTIBIOTICS 是 CHLORAMPHENICOL。 我想知道： 大家如遇到这中情况是解决的？
: CHLORAMPHENICOL 大家是如何使用的？ 我的是溶在酒精。多谢多谢。 已经纠缠１个月
: 了。 有点伤自尊啦 。
c*y
34 楼
where did you send for sequencing?
【在 c***y 的大作中提到】
【在 c***y 的大作中提到】
s*x
35 楼
我用的是stratagene kit。做了很多的mini prep，没问题的。今天我酶切了质粒。
mutate之前的事没问题的。可之后的就切不出任何bands。 明天我问问公司，看我是否
用错。
mutate之前的事没问题的。可之后的就切不出任何bands。 明天我问问公司，看我是否
用错。
T*t
36 楼
用Qiagen的mini prep kit最好。
“切不出任何bands”，是说根本看不到条带是么？那更可能是浓度太低了。
“切不出任何bands”，是说根本看不到条带是么？那更可能是浓度太低了。
s*d
37 楼
看起来像是突变不成功。是不是菌落非常少？
【在 s**x 的大作中提到】
: 我用的是stratagene kit。做了很多的mini prep，没问题的。今天我酶切了质粒。
: mutate之前的事没问题的。可之后的就切不出任何bands。 明天我问问公司，看我是否
: 用错。
【在 s**x 的大作中提到】
: 我用的是stratagene kit。做了很多的mini prep，没问题的。今天我酶切了质粒。
: mutate之前的事没问题的。可之后的就切不出任何bands。 明天我问问公司，看我是否
: 用错。
A*i
38 楼
我是做DNA sequencing的，我们公司在湾区，如果你也是在湾区的话可以和我联系，我
们免费帮你做几个titration testing,做测序这个东西有可能不是DNA本身的问题，我
们做反应的条件也非常重要，或者说你DNA本身容易形成secondary strucutre的话（G/
C rich),结果也会不好。你所说的signal/noise低有可能是他们做反应的时候DNA的量
不够或者PCR cycle不够，一般你送几个样品的话他们是不会每个用户都优化反应条件
的。如果你不在湾区，你可以叫你用的那家公司加大反应量，用150ng,300ng和600ng
template做个titration。如果你想把样品寄来我们公司试一下的话请和我联系，湾区
附近的公司和大学我们都是免费pick up的。我们第一次帮你做都是免费的。我email:
l****[email protected]，good luck!
们免费帮你做几个titration testing,做测序这个东西有可能不是DNA本身的问题，我
们做反应的条件也非常重要，或者说你DNA本身容易形成secondary strucutre的话（G/
C rich),结果也会不好。你所说的signal/noise低有可能是他们做反应的时候DNA的量
不够或者PCR cycle不够，一般你送几个样品的话他们是不会每个用户都优化反应条件
的。如果你不在湾区，你可以叫你用的那家公司加大反应量，用150ng,300ng和600ng
template做个titration。如果你想把样品寄来我们公司试一下的话请和我联系，湾区
附近的公司和大学我们都是免费pick up的。我们第一次帮你做都是免费的。我email:
l****[email protected]，good luck!
e*s
39 楼
有没有做digestion test?
同时做一下single 和double digestion test,看看酶切位点对不对，Size对不对。
【在 s**x 的大作中提到】
: 我现在做一个MUTATION。那到菌落后， 提DNA。可是我的DNA SEQUENCE 结果非常糟糕
: 。测出来的也不知道是什么。根本不对。 SIGNAL／NOISE 比例特低。 DNA QUALITY是
: ，没有问题的。我测过OD。而且是溶在水里的。用的是T７的PRIMER。 SELECTIVE
: ANTIBIOTICS 是 CHLORAMPHENICOL。 我想知道： 大家如遇到这中情况是解决的？
: CHLORAMPHENICOL 大家是如何使用的？ 我的是溶在酒精。多谢多谢。 已经纠缠１个月
: 了。 有点伤自尊啦 。
同时做一下single 和double digestion test,看看酶切位点对不对，Size对不对。
【在 s**x 的大作中提到】
: 我现在做一个MUTATION。那到菌落后， 提DNA。可是我的DNA SEQUENCE 结果非常糟糕
: 。测出来的也不知道是什么。根本不对。 SIGNAL／NOISE 比例特低。 DNA QUALITY是
: ，没有问题的。我测过OD。而且是溶在水里的。用的是T７的PRIMER。 SELECTIVE
: ANTIBIOTICS 是 CHLORAMPHENICOL。 我想知道： 大家如遇到这中情况是解决的？
: CHLORAMPHENICOL 大家是如何使用的？ 我的是溶在酒精。多谢多谢。 已经纠缠１个月
: 了。 有点伤自尊啦 。
s*x
40 楼
please read pics.
http://www.flickr.com/photos/[email protected]/4822251530/
1: undigested: pre- PCR and 4 colonies DNA
2: digested (ecroR I and xhoI): pre-PCr and post-PCR colonies DNA(pre-PCR
result is correct). i guess the problem is PCR (kit did not work?)
http://www.flickr.com/photos/[email protected]/4822251530/
1: undigested: pre- PCR and 4 colonies DNA
2: digested (ecroR I and xhoI): pre-PCr and post-PCR colonies DNA(pre-PCR
result is correct). i guess the problem is PCR (kit did not work?)
s*x
41 楼
no1 knows it??
T*t
42 楼
看起来你突变后挑菌落做的miniprep量是没问题的，可是size好像差太多了。而且双酶切只有两个酶切位点，和突变之前的质粒差别太大了。我觉得是质粒出错了，会不会转化的时候污染了其他质粒，挑错了菌落。如果miniprep出来的质粒是错的，还用原来的测序引物去测，因为引物不对，当然就测不出来了。
看了一下前面的回复，4楼的同学早就言简意赅的说过了。
看了一下前面的回复，4楼的同学早就言简意赅的说过了。
s*e
43 楼
你搞笑吧？大提出来最高也就3ug/ul顶多了，哪来的50ug/ul。。。
【在 g*****y 的大作中提到】
: 50ng/ml这个浓度非常非常的低。一般 至少都是50ug/ul
:
: any
【在 g*****y 的大作中提到】
: 50ng/ml这个浓度非常非常的低。一般 至少都是50ug/ul
:
: any
C*e
44 楼
这个要看的吧，20ng/ul不可能每次都测出来对不对
而且一般测序测不出来你complain，人家测序中心一跑胶，就会跟你说你的质粒浓度不够
又不是自己测序，可以掌握多加少加
【在 T**********t 的大作中提到】
: 50ng/ul够了啊，多加几微升不就行了。:) 我送过20ug/ul的样品也测出来过的。关键
: 还是要够纯。
而且一般测序测不出来你complain，人家测序中心一跑胶，就会跟你说你的质粒浓度不够
又不是自己测序，可以掌握多加少加
【在 T**********t 的大作中提到】
: 50ng/ul够了啊，多加几微升不就行了。:) 我送过20ug/ul的样品也测出来过的。关键
: 还是要够纯。
C*e
45 楼
人家肯定是笔误啦
【在 s**e 的大作中提到】
: 你搞笑吧？大提出来最高也就3ug/ul顶多了，哪来的50ug/ul。。。
【在 s**e 的大作中提到】
: 你搞笑吧？大提出来最高也就3ug/ul顶多了，哪来的50ug/ul。。。
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