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现在工作形势咋样了?
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现在工作形势咋样了?# Chemistry - 化学
m*g
1
LD在国内,我们想弄一个可以发短信的软件。我看飞信的review里有人说在美国用的很
好。结果下载了,注册了账号了,登陆的时候被告知此版本不支持非中国移动用户登陆。
来这里确定一下。
同时问一下有什么办法和国内的手机发短信?谢谢。
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s*x
2
我现在做一个MUTATION。那到菌落后, 提DNA。可是我的DNA SEQUENCE 结果非常糟糕
。测出来的也不知道是什么。根本不对。 SIGNAL/NOISE 比例特低。 DNA QUALITY是
,没有问题的。我测过OD。而且是溶在水里的。用的是T7的PRIMER。 SELECTIVE
ANTIBIOTICS 是 CHLORAMPHENICOL。 我想知道: 大家如遇到这中情况是解决的?
CHLORAMPHENICOL 大家是如何使用的? 我的是溶在酒精。多谢多谢。 已经纠缠1个月
了。 有点伤自尊啦 。
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p*3
3
好找点了没?。
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L*y
4
弄个移动的号?

LD在国内,我们想弄一个可以发短信的软件。我看飞信的review里有人说在美国用的很
好。结果下载了,注册了账号了,登陆的时候被告知此版本不支持非中国移动用户登陆。
来这里确定一下。
同时问一下有什么办法和国内的手机发短信?谢谢。

【在 m**********g 的大作中提到】
: LD在国内,我们想弄一个可以发短信的软件。我看飞信的review里有人说在美国用的很
: 好。结果下载了,注册了账号了,登陆的时候被告知此版本不支持非中国移动用户登陆。
: 来这里确定一下。
: 同时问一下有什么办法和国内的手机发短信?谢谢。

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T*t
5
DNA quality和你用的antibiotics没什么必然联系吧。Chloramphenicol用酒精溶没什
么错。
你的质粒是怎么提的?DNA quality不是光看OD就行了啊。你做过限制酶切然后跑胶看
么?你送去测序的质粒浓度是多少?太浓或者太稀都可能测不好,质粒测序的模板用量
在200-500ng之间结果最好。
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L*e
6
感觉没有
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x*s
7
我为了用飞信,办了一个移动的号

陆。

【在 m**********g 的大作中提到】
: LD在国内,我们想弄一个可以发短信的软件。我看飞信的review里有人说在美国用的很
: 好。结果下载了,注册了账号了,登陆的时候被告知此版本不支持非中国移动用户登陆。
: 来这里确定一下。
: 同时问一下有什么办法和国内的手机发短信?谢谢。

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s*x
8
extracted DNA with mini prep. as required, DNA concentration is 50ng/ml.any
suggestion is greatly appreciated.
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p*3
9
不是说美国经济好转了吗?咋还是不好找。

【在 L*****e 的大作中提到】
: 感觉没有
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m*g
10
这个怎么收费的?有人知道吗?
我可以用我爸爸或者妈妈的账号,我猜,但是他们是不是还要去专门开通这项业务?

陆。

【在 L*****y 的大作中提到】
: 弄个移动的号?
:
: LD在国内,我们想弄一个可以发短信的软件。我看飞信的review里有人说在美国用的很
: 好。结果下载了,注册了账号了,登陆的时候被告知此版本不支持非中国移动用户登陆。
: 来这里确定一下。
: 同时问一下有什么办法和国内的手机发短信?谢谢。

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h*g
11
做酶切确定是那个质粒,有的时候质粒污染不是你做的那个,sequencing primer自然
粘不上。
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s*a
12
好像好了很多
很多千老都找到了

【在 p******3 的大作中提到】
: 好找点了没?。
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m*g
13
是有个号就行?还是必须去开通这个业务。比如我用我爸妈的号?

【在 x*********s 的大作中提到】
: 我为了用飞信,办了一个移动的号
:
: 陆。

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l*a
14
DNA 量可以再减,mini prep 的时候如果用太多的细菌,会overflow 你的column,造
成太多杂质和盐混在DNA 溶液里,然后影响 sequencing reaction.
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a*1
15
Yep...

【在 s***a 的大作中提到】
: 好像好了很多
: 很多千老都找到了

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L*y
16
发短信就可以开通. 每个月好像6块

这个怎么收费的?有人知道吗?
我可以用我爸爸或者妈妈的账号,我猜,但是他们是不是还要去专门开通这项业务?
陆。

【在 m**********g 的大作中提到】
: 这个怎么收费的?有人知道吗?
: 我可以用我爸爸或者妈妈的账号,我猜,但是他们是不是还要去专门开通这项业务?
:
: 陆。

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T*t
17
50ng/ml还是50ng/ul啊?前者的话,就太稀了。
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B*s
18
有多好,能具体说说么?
比如什么背景

【在 a*******1 的大作中提到】
: Yep...
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e*r
19
textfree
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d*a
20
design your own sequencing primers. purify DNA.
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a*1
21
Organic/nano...

【在 B*****s 的大作中提到】
: 有多好,能具体说说么?
: 比如什么背景

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g*n
22
只能发美国的号

【在 e*****r 的大作中提到】
: textfree
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C*e
23
就是50 ng/ul也有点低
有的时候可以测出来
不过一般都会要求在100 ng/ul以上吧
跑个胶看看
另外乙醇沉淀、浓缩一下
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s*a
24
不用开通 有号码就可以了

【在 m**********g 的大作中提到】
: 是有个号就行?还是必须去开通这个业务。比如我用我爸妈的号?
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T*t
25
50ng/ul够了啊,多加几微升不就行了。:) 我送过20ug/ul的样品也测出来过的。关键
还是要够纯。

【在 C*******e 的大作中提到】
: 就是50 ng/ul也有点低
: 有的时候可以测出来
: 不过一般都会要求在100 ng/ul以上吧
: 跑个胶看看
: 另外乙醇沉淀、浓缩一下

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x*s
26
现在不用钱了

【在 L*****y 的大作中提到】
: 发短信就可以开通. 每个月好像6块
:
: 这个怎么收费的?有人知道吗?
: 我可以用我爸爸或者妈妈的账号,我猜,但是他们是不是还要去专门开通这项业务?
: 陆。

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n*w
27
做出来先做个pcr什么的,确定一下,然后测序。。。
lz总比我上次遇到的要好一些。。。
我提完以后,跑了pcr,发现,嗯,那个条带在那里,说明我插到ta vector了,可是测
序回来,t7和sp6返回的基本都差不多,就那100bp左右。。我傻了。。。其他2.3kb呢
。。。。
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X*O
28
先用PC客户端软件去注册,
然后在手机上用飞信.
1.用ET飞信,支持WiFi和美国的3G/GPRS,但是只能发不能收.
2.或者用WAP飞信,支持wifi和3G/GPRS, 可以收发.
另外PC的客户端就随便收发了.
如果你要发给普通手机,你必须有移动公司的手机号.
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s*x
29
我可能犯了一个错误。 我只是MUTATE 一个AA,而我用的是MULTI-MUTATION 的 KIT。
(现有的)。我不知两个KIT有何不同。MILTI KIT是否可用在SINGLE AA MUTATION 上
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l*C
30
没事

【在 s**x 的大作中提到】
: 我可能犯了一个错误。 我只是MUTATE 一个AA,而我用的是MULTI-MUTATION 的 KIT。
: (现有的)。我不知两个KIT有何不同。MILTI KIT是否可用在SINGLE AA MUTATION 上
: 。

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g*y
31
1. 用的什么competent cell
2. 你spin down cell 的时候离心机多少转速。
3. mini prep的p1 有没有加Rnase. 是不是保存冰箱里。
4. mini prep 时, 加p2后有没有超过5 分钟?
5.mini prep 加p3后是怎么mix的
6.你用的水有没有auto clave.
7.你pick了多少colony?

【在 s**x 的大作中提到】
: 我现在做一个MUTATION。那到菌落后, 提DNA。可是我的DNA SEQUENCE 结果非常糟糕
: 。测出来的也不知道是什么。根本不对。 SIGNAL/NOISE 比例特低。 DNA QUALITY是
: ,没有问题的。我测过OD。而且是溶在水里的。用的是T7的PRIMER。 SELECTIVE
: ANTIBIOTICS 是 CHLORAMPHENICOL。 我想知道: 大家如遇到这中情况是解决的?
: CHLORAMPHENICOL 大家是如何使用的? 我的是溶在酒精。多谢多谢。 已经纠缠1个月
: 了。 有点伤自尊啦 。

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g*y
32
50ng/ml这个浓度非常非常的低。一般 至少都是50ug/ul

any

【在 s**x 的大作中提到】
: 我可能犯了一个错误。 我只是MUTATE 一个AA,而我用的是MULTI-MUTATION 的 KIT。
: (现有的)。我不知两个KIT有何不同。MILTI KIT是否可用在SINGLE AA MUTATION 上
: 。

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c*y
33


【在 s**x 的大作中提到】
: 我现在做一个MUTATION。那到菌落后, 提DNA。可是我的DNA SEQUENCE 结果非常糟糕
: 。测出来的也不知道是什么。根本不对。 SIGNAL/NOISE 比例特低。 DNA QUALITY是
: ,没有问题的。我测过OD。而且是溶在水里的。用的是T7的PRIMER。 SELECTIVE
: ANTIBIOTICS 是 CHLORAMPHENICOL。 我想知道: 大家如遇到这中情况是解决的?
: CHLORAMPHENICOL 大家是如何使用的? 我的是溶在酒精。多谢多谢。 已经纠缠1个月
: 了。 有点伤自尊啦 。

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c*y
34
where did you send for sequencing?

【在 c***y 的大作中提到】

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s*x
35
我用的是stratagene kit。做了很多的mini prep,没问题的。今天我酶切了质粒。
mutate之前的事没问题的。可之后的就切不出任何bands。 明天我问问公司,看我是否
用错。
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T*t
36
用Qiagen的mini prep kit最好。
“切不出任何bands”,是说根本看不到条带是么?那更可能是浓度太低了。
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s*d
37
看起来像是突变不成功。是不是菌落非常少?

【在 s**x 的大作中提到】
: 我用的是stratagene kit。做了很多的mini prep,没问题的。今天我酶切了质粒。
: mutate之前的事没问题的。可之后的就切不出任何bands。 明天我问问公司,看我是否
: 用错。

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A*i
38
我是做DNA sequencing的,我们公司在湾区,如果你也是在湾区的话可以和我联系,我
们免费帮你做几个titration testing,做测序这个东西有可能不是DNA本身的问题,我
们做反应的条件也非常重要,或者说你DNA本身容易形成secondary strucutre的话(G/
C rich),结果也会不好。你所说的signal/noise低有可能是他们做反应的时候DNA的量
不够或者PCR cycle不够,一般你送几个样品的话他们是不会每个用户都优化反应条件
的。如果你不在湾区,你可以叫你用的那家公司加大反应量,用150ng,300ng和600ng
template做个titration。如果你想把样品寄来我们公司试一下的话请和我联系,湾区
附近的公司和大学我们都是免费pick up的。我们第一次帮你做都是免费的。我email:
l****[email protected],good luck!
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e*s
39
有没有做digestion test?
同时做一下single 和double digestion test,看看酶切位点对不对,Size对不对。

【在 s**x 的大作中提到】
: 我现在做一个MUTATION。那到菌落后, 提DNA。可是我的DNA SEQUENCE 结果非常糟糕
: 。测出来的也不知道是什么。根本不对。 SIGNAL/NOISE 比例特低。 DNA QUALITY是
: ,没有问题的。我测过OD。而且是溶在水里的。用的是T7的PRIMER。 SELECTIVE
: ANTIBIOTICS 是 CHLORAMPHENICOL。 我想知道: 大家如遇到这中情况是解决的?
: CHLORAMPHENICOL 大家是如何使用的? 我的是溶在酒精。多谢多谢。 已经纠缠1个月
: 了。 有点伤自尊啦 。

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s*x
41
no1 knows it??
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T*t
42
看起来你突变后挑菌落做的miniprep量是没问题的,可是size好像差太多了。而且双酶切只有两个酶切位点,和突变之前的质粒差别太大了。我觉得是质粒出错了,会不会转化的时候污染了其他质粒,挑错了菌落。如果miniprep出来的质粒是错的,还用原来的测序引物去测,因为引物不对,当然就测不出来了。
看了一下前面的回复,4楼的同学早就言简意赅的说过了。
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s*e
43
你搞笑吧?大提出来最高也就3ug/ul顶多了,哪来的50ug/ul。。。

【在 g*****y 的大作中提到】
: 50ng/ml这个浓度非常非常的低。一般 至少都是50ug/ul
:
: any

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C*e
44
这个要看的吧,20ng/ul不可能每次都测出来对不对
而且一般测序测不出来你complain,人家测序中心一跑胶,就会跟你说你的质粒浓度不够
又不是自己测序,可以掌握多加少加

【在 T**********t 的大作中提到】
: 50ng/ul够了啊,多加几微升不就行了。:) 我送过20ug/ul的样品也测出来过的。关键
: 还是要够纯。

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C*e
45
人家肯定是笔误啦

【在 s**e 的大作中提到】
: 你搞笑吧?大提出来最高也就3ug/ul顶多了,哪来的50ug/ul。。。
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