t*3
2 楼
【 以下文字转载自 Stock 讨论区 】
发信人: temp123 (ttt), 信区: Stock
标 题: BOA支票最大可以开多少钱？？
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 22 01:35:07 2010, 美东)
不知怎么搞的，恍惚记得有人说是1万。。。。
发信人: temp123 (ttt), 信区: Stock
标 题: BOA支票最大可以开多少钱？？
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 22 01:35:07 2010, 美东)
不知怎么搞的，恍惚记得有人说是1万。。。。
l*r
3 楼
刘福洋87号
身从花中过，片语不留伤，已在桃园外，花开花又败，纪念了天空，揣摩了时光，已是
昨日的太阳，今日的雨也不必紧张，我以舞者身份走入舞林，以舞者身份淡出舞林，心
未变，舞未变，若以舞者身份走入舞林，以演员身份走到最后，舞虽变，心已远，同一
条路走的人很多，我喜欢自己走过，有人轻声说他来过。
身从花中过，片语不留伤，已在桃园外，花开花又败，纪念了天空，揣摩了时光，已是
昨日的太阳，今日的雨也不必紧张，我以舞者身份走入舞林，以舞者身份淡出舞林，心
未变，舞未变，若以舞者身份走入舞林，以演员身份走到最后，舞虽变，心已远，同一
条路走的人很多，我喜欢自己走过，有人轻声说他来过。
b*r
4 楼
Anyone has experience of inserting 9kb in a 8.4kb vector? 2 months was gone
,but I get nothing. Would
you like to take a look a this protocol and give me some suggestion ?
Thanks a lot
Purpose: Insert 9kb mouse sequence into vector pPNT6.
Vector pPNT6: Its map is at http://www.addgene.org/pgvec1?
f=c&identifier=11072&atqx=pnt6&cmd=findpl . I have inserted 0.9kb DNA in
this vector at XhoI/EcorI
double sites. I should have no problem in cloning short fragment.
Insert DNA is 9kb.I have cloned this 9kb in TOPO vector. I use NotI to cut
this 9kb
from TOPO. The task is to insert this 9kb into pPNT6 at NotI site. My
protocol is:
1. Digest pPNT6 (1 ug),TOPO-9kb(2 ug) with 5 unit of NotI enzyme (NEB) in a
volume
of 50uL,respectively for 3 hours. CIP treats pPNT6 for 1 hour in NotI
digestion mixture.
2. Run the vector(8.4kb) and TOPO-9kb on an 0.7% agarose gel. Make sure
vector and TOPO
-9kb are cut well completely.
3. Use Qiagen gel purification kit to isolate DNA from gel. Run a gel to
estimate the
concentration ratio of vector vs 9kb insert. As compared to DNA ladder, the
purified
vector and 9kb insert should be more than 10ng/uL in 40ul volume. Before
ligation, heat vector and insert
at 65 degree for 10 minutes.
4.Ligation reaction:
9kb insert: 30-150ng;
vector(8.4kb): 10ng;
Ligase:Takara ligase mixture or NEB T4 DNA ligase.
water up to 20 uL
incubate 16 degrees overnight; Didn't do phenol/chloroform extraction,
ethanol
purification for this ligation mixture. DNA were almost lost in previous
phenol/chloroform /ethanol
purification method. PCR using ligation mixture. One primer is T3 from pPNT6
,the other is from 9kb. PCR
result show 9kb is inserted into pPNT6 (false positive?).
6. Transformation protocol:
Heat ligation mixture at 65 degree for 10 minutes. Take 5ul of ligation
mixture to 50 ul DH5 alpha
competent cell placed in ice. Incubate
for 5 minutes,heat shock at 42 degree for 45 seconds,immediately move to ice
and place
for 5 minutes. Add 150 ul of SOC medium,shaking for 1 hour at 250rpm at 37
degree.Take 50ul of
cells on the LB plates contained 75 ug/ml of Ampicilin. Incubate in 37
degree( 30 degree is better for
transformed E.coli to grow?).
7. After 14 hours,some colonies appear. Do colony PCR.One of primers from
vector( T3). The other primer
is from insert 9kb DNA. Picked more than 500 colonies. No positive colony.
The negative control of pPNT6
itself has no colony grown.
8. Isolate plasmid and cut by NotI enzme. Some are empty plasmid,some are
strange plasmid,some has no
plasmid,etc. Anyway,fail to isolate target plasmid.
Any good ligation/transformation kit available for helping troubleshoot for
every step?
,but I get nothing. Would
you like to take a look a this protocol and give me some suggestion ?
Thanks a lot
Purpose: Insert 9kb mouse sequence into vector pPNT6.
Vector pPNT6: Its map is at http://www.addgene.org/pgvec1?
f=c&identifier=11072&atqx=pnt6&cmd=findpl . I have inserted 0.9kb DNA in
this vector at XhoI/EcorI
double sites. I should have no problem in cloning short fragment.
Insert DNA is 9kb.I have cloned this 9kb in TOPO vector. I use NotI to cut
this 9kb
from TOPO. The task is to insert this 9kb into pPNT6 at NotI site. My
protocol is:
1. Digest pPNT6 (1 ug),TOPO-9kb(2 ug) with 5 unit of NotI enzyme (NEB) in a
volume
of 50uL,respectively for 3 hours. CIP treats pPNT6 for 1 hour in NotI
digestion mixture.
2. Run the vector(8.4kb) and TOPO-9kb on an 0.7% agarose gel. Make sure
vector and TOPO
-9kb are cut well completely.
3. Use Qiagen gel purification kit to isolate DNA from gel. Run a gel to
estimate the
concentration ratio of vector vs 9kb insert. As compared to DNA ladder, the
purified
vector and 9kb insert should be more than 10ng/uL in 40ul volume. Before
ligation, heat vector and insert
at 65 degree for 10 minutes.
4.Ligation reaction:
9kb insert: 30-150ng;
vector(8.4kb): 10ng;
Ligase:Takara ligase mixture or NEB T4 DNA ligase.
water up to 20 uL
incubate 16 degrees overnight; Didn't do phenol/chloroform extraction,
ethanol
purification for this ligation mixture. DNA were almost lost in previous
phenol/chloroform /ethanol
purification method. PCR using ligation mixture. One primer is T3 from pPNT6
,the other is from 9kb. PCR
result show 9kb is inserted into pPNT6 (false positive?).
6. Transformation protocol:
Heat ligation mixture at 65 degree for 10 minutes. Take 5ul of ligation
mixture to 50 ul DH5 alpha
competent cell placed in ice. Incubate
for 5 minutes,heat shock at 42 degree for 45 seconds,immediately move to ice
and place
for 5 minutes. Add 150 ul of SOC medium,shaking for 1 hour at 250rpm at 37
degree.Take 50ul of
cells on the LB plates contained 75 ug/ml of Ampicilin. Incubate in 37
degree( 30 degree is better for
transformed E.coli to grow?).
7. After 14 hours,some colonies appear. Do colony PCR.One of primers from
vector( T3). The other primer
is from insert 9kb DNA. Picked more than 500 colonies. No positive colony.
The negative control of pPNT6
itself has no colony grown.
8. Isolate plasmid and cut by NotI enzme. Some are empty plasmid,some are
strange plasmid,some has no
plasmid,etc. Anyway,fail to isolate target plasmid.
Any good ligation/transformation kit available for helping troubleshoot for
every step?
d*q
5 楼
UCSD说说。
p*e
6 楼
吃第一个
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
l*i
7 楼
我开过$29700的，没事
【在 t*****3 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Stock 讨论区 】
: 发信人: temp123 (ttt), 信区: Stock
: 标 题: BOA支票最大可以开多少钱？？
: 发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jun 22 01:35:07 2010, 美东)
: 不知怎么搞的，恍惚记得有人说是1万。。。。
【在 t*****3 的大作中提到】
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i*t
8 楼
好湿！
o*r
9 楼
十年前俺做过这事（17Kb的plasmid），而且过程和你说的很象，最后筛了5个月（每天
就是早上抽质粒，下午PCR/跑胶，然后ligation/transformation，回家前pick colony
/incubation O/N），前后尝试了无数种ligase/competent cell，几乎市面上相关产品
都试了个遍，终于找到一个要的clone。其实17Kb对于某些质粒而言已经差不多是上限
，不稳定，体内很容易发生重组，如果可能尝试不同的vector，或者不同的competent
cell/transformation protocol。另外你或许可以试试Ca++ based
transformation。
就是早上抽质粒，下午PCR/跑胶，然后ligation/transformation，回家前pick colony
/incubation O/N），前后尝试了无数种ligase/competent cell，几乎市面上相关产品
都试了个遍，终于找到一个要的clone。其实17Kb对于某些质粒而言已经差不多是上限
，不稳定，体内很容易发生重组，如果可能尝试不同的vector，或者不同的competent
cell/transformation protocol。另外你或许可以试试Ca++ based
transformation。
j*a
10 楼
re
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
p*d
11 楼
BSO现金很多呀
【在 l*****i 的大作中提到】
: 我开过$29700的，没事
【在 l*****i 的大作中提到】
: 我开过$29700的，没事
s*l
12 楼
就是放屁。舞蹈演员舞蹈演员，他不是演员？只不过他是个蹩脚的演员而已。
【在 l********r 的大作中提到】
: 刘福洋87号
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: 昨日的太阳，今日的雨也不必紧张，我以舞者身份走入舞林，以舞者身份淡出舞林，心
: 未变，舞未变，若以舞者身份走入舞林，以演员身份走到最后，舞虽变，心已远，同一
: 条路走的人很多，我喜欢自己走过，有人轻声说他来过。
【在 l********r 的大作中提到】
: 刘福洋87号
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: 昨日的太阳，今日的雨也不必紧张，我以舞者身份走入舞林，以舞者身份淡出舞林，心
: 未变，舞未变，若以舞者身份走入舞林，以演员身份走到最后，舞虽变，心已远，同一
: 条路走的人很多，我喜欢自己走过，有人轻声说他来过。
l*y
13 楼
buy your officemate a lunch and ask him to try it once for you.
gone
cut
【在 b******r 的大作中提到】
: Anyone has experience of inserting 9kb in a 8.4kb vector? 2 months was gone
: ,but I get nothing. Would
: you like to take a look a this protocol and give me some suggestion ?
: Thanks a lot
: Purpose: Insert 9kb mouse sequence into vector pPNT6.
: Vector pPNT6: Its map is at http://www.addgene.org/pgvec1?
: f=c&identifier=11072&atqx=pnt6&cmd=findpl . I have inserted 0.9kb DNA in
: this vector at XhoI/EcorI
: double sites. I should have no problem in cloning short fragment.
: Insert DNA is 9kb.I have cloned this 9kb in TOPO vector. I use NotI to cut
gone
cut
【在 b******r 的大作中提到】
: Anyone has experience of inserting 9kb in a 8.4kb vector? 2 months was gone
: ,but I get nothing. Would
: you like to take a look a this protocol and give me some suggestion ?
: Thanks a lot
: Purpose: Insert 9kb mouse sequence into vector pPNT6.
: Vector pPNT6: Its map is at http://www.addgene.org/pgvec1?
: f=c&identifier=11072&atqx=pnt6&cmd=findpl . I have inserted 0.9kb DNA in
: this vector at XhoI/EcorI
: double sites. I should have no problem in cloning short fragment.
: Insert DNA is 9kb.I have cloned this 9kb in TOPO vector. I use NotI to cut
l*g
14 楼
re
s*g
15 楼
见过45万的，再大的不知道。
【在 t*****3 的大作中提到】
: 【 以下文字转载自 Stock 讨论区 】
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j*n
16 楼
唉，内心这么不平静啊。走了就走了阿，一步三回头地干啥啊
p*i
17 楼
you could try XL-10 GOLD competent bugs, for long plasmids.
【在 b******r 的大作中提到】
: Anyone has experience of inserting 9kb in a 8.4kb vector? 2 months was gone
: ,but I get nothing. Would
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: Thanks a lot
: Purpose: Insert 9kb mouse sequence into vector pPNT6.
: Vector pPNT6: Its map is at http://www.addgene.org/pgvec1?
: f=c&identifier=11072&atqx=pnt6&cmd=findpl . I have inserted 0.9kb DNA in
: this vector at XhoI/EcorI
: double sites. I should have no problem in cloning short fragment.
: Insert DNA is 9kb.I have cloned this 9kb in TOPO vector. I use NotI to cut
【在 b******r 的大作中提到】
: Anyone has experience of inserting 9kb in a 8.4kb vector? 2 months was gone
: ,but I get nothing. Would
: you like to take a look a this protocol and give me some suggestion ?
: Thanks a lot
: Purpose: Insert 9kb mouse sequence into vector pPNT6.
: Vector pPNT6: Its map is at http://www.addgene.org/pgvec1?
: f=c&identifier=11072&atqx=pnt6&cmd=findpl . I have inserted 0.9kb DNA in
: this vector at XhoI/EcorI
: double sites. I should have no problem in cloning short fragment.
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d*i
18 楼
re!!!
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
o*y
19 楼
专注自黑二十年
我真不知道他在干嘛玩意儿
我真不知道他在干嘛玩意儿
b*r
20 楼
Thanks. Frustration around me every day.
g*t
21 楼
re
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
j*n
22 楼
一堆粉丝在捧，他不觉得是自黑阿。
【在 o**y 的大作中提到】
: 专注自黑二十年
: 我真不知道他在干嘛玩意儿
【在 o**y 的大作中提到】
: 专注自黑二十年
: 我真不知道他在干嘛玩意儿
b*r
23 楼
Why do you think '体内很容易发生重组'?
colony
competent
【在 o********r 的大作中提到】
: 十年前俺做过这事（17Kb的plasmid），而且过程和你说的很象，最后筛了5个月（每天
: 就是早上抽质粒，下午PCR/跑胶，然后ligation/transformation，回家前pick colony
: /incubation O/N），前后尝试了无数种ligase/competent cell，几乎市面上相关产品
: 都试了个遍，终于找到一个要的clone。其实17Kb对于某些质粒而言已经差不多是上限
: ，不稳定，体内很容易发生重组，如果可能尝试不同的vector，或者不同的competent
: cell/transformation protocol。另外你或许可以试试Ca++ based
: transformation。
colony
competent
【在 o********r 的大作中提到】
: 十年前俺做过这事（17Kb的plasmid），而且过程和你说的很象，最后筛了5个月（每天
: 就是早上抽质粒，下午PCR/跑胶，然后ligation/transformation，回家前pick colony
: /incubation O/N），前后尝试了无数种ligase/competent cell，几乎市面上相关产品
: 都试了个遍，终于找到一个要的clone。其实17Kb对于某些质粒而言已经差不多是上限
: ，不稳定，体内很容易发生重组，如果可能尝试不同的vector，或者不同的competent
: cell/transformation protocol。另外你或许可以试试Ca++ based
: transformation。
R*s
24 楼
晕， 戴总都来了。。。
【在 d*i 的大作中提到】
: re!!!
【在 d*i 的大作中提到】
: re!!!
c*n
25 楼
这家伙不说话是对自己最有利的，嘴是真欠
o*r
26 楼
PCR产物size不对，sequencing证实里面的序列并非是plasmid或者是任何插入plasmid
的序列
【在 b******r 的大作中提到】
: Why do you think '体内很容易发生重组'?
:
: colony
: competent
的序列
【在 b******r 的大作中提到】
: Why do you think '体内很容易发生重组'?
:
: colony
: competent
s*0
27 楼
Re
y*e
28 楼
印象好深他和傲月的探戈，他那两叶刀眉画的他好英俊的，
p*i
29 楼
加油
【在 b******r 的大作中提到】
: Thanks. Frustration around me every day.
【在 b******r 的大作中提到】
: Thanks. Frustration around me every day.
c*u
30 楼
re
s*l
31 楼
舞台上跟张傲月假惺惺拥抱，舞台下一篇篇微博酸文讽刺挖苦辱骂张傲月，假的不能再
假了，还天天唧唧歪歪自己真性情。
【在 y*e 的大作中提到】
: 印象好深他和傲月的探戈，他那两叶刀眉画的他好英俊的，
假了，还天天唧唧歪歪自己真性情。
【在 y*e 的大作中提到】
: 印象好深他和傲月的探戈，他那两叶刀眉画的他好英俊的，
r*r
32 楼
一般大片段克隆，会导致连接效率很低，克隆数大大减少，可以看看你的克隆数和你常做的克隆比是不是还比较正常，如果比较正常，那说明这种假阳性很可能是因为你的插入片段有一段序列比较容易发生重组，试着30度长克隆和摇菌看看。另外，能不用单酶切做克隆就不要用，你大片段克隆还用这个策略，最好换其它双酶切。
另外，单就大片段克隆而言，建议用GeneHogs菌株，我手上的片段普遍10k以上，用这个菌株，从来没出现过问题，感受态效率一般7次方就可以了，15kb可以长百来个克隆。
因此建议先更换单酶切策略和换genehogs，然后不行再换30度生长看。30度生长，已发生重组的质粒，一般10个有2个总是对的。
gone
cut
【在 b******r 的大作中提到】
: Anyone has experience of inserting 9kb in a 8.4kb vector? 2 months was gone
: ,but I get nothing. Would
: you like to take a look a this protocol and give me some suggestion ?
: Thanks a lot
: Purpose: Insert 9kb mouse sequence into vector pPNT6.
: Vector pPNT6: Its map is at http://www.addgene.org/pgvec1?
: f=c&identifier=11072&atqx=pnt6&cmd=findpl . I have inserted 0.9kb DNA in
: this vector at XhoI/EcorI
: double sites. I should have no problem in cloning short fragment.
: Insert DNA is 9kb.I have cloned this 9kb in TOPO vector. I use NotI to cut
另外，单就大片段克隆而言，建议用GeneHogs菌株，我手上的片段普遍10k以上，用这个菌株，从来没出现过问题，感受态效率一般7次方就可以了，15kb可以长百来个克隆。
因此建议先更换单酶切策略和换genehogs，然后不行再换30度生长看。30度生长，已发生重组的质粒，一般10个有2个总是对的。
gone
cut
【在 b******r 的大作中提到】
: Anyone has experience of inserting 9kb in a 8.4kb vector? 2 months was gone
: ,but I get nothing. Would
: you like to take a look a this protocol and give me some suggestion ?
: Thanks a lot
: Purpose: Insert 9kb mouse sequence into vector pPNT6.
: Vector pPNT6: Its map is at http://www.addgene.org/pgvec1?
: f=c&identifier=11072&atqx=pnt6&cmd=findpl . I have inserted 0.9kb DNA in
: this vector at XhoI/EcorI
: double sites. I should have no problem in cloning short fragment.
: Insert DNA is 9kb.I have cloned this 9kb in TOPO vector. I use NotI to cut
z*r
33 楼
吃
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
M*u
34 楼
越是说自己不在乎，越care啊，看来心伤的深啊。
【在 l********r 的大作中提到】
: 刘福洋87号
: 身从花中过，片语不留伤，已在桃园外，花开花又败，纪念了天空，揣摩了时光，已是
: 昨日的太阳，今日的雨也不必紧张，我以舞者身份走入舞林，以舞者身份淡出舞林，心
: 未变，舞未变，若以舞者身份走入舞林，以演员身份走到最后，舞虽变，心已远，同一
: 条路走的人很多，我喜欢自己走过，有人轻声说他来过。
【在 l********r 的大作中提到】
: 刘福洋87号
: 身从花中过，片语不留伤，已在桃园外，花开花又败，纪念了天空，揣摩了时光，已是
: 昨日的太阳，今日的雨也不必紧张，我以舞者身份走入舞林，以舞者身份淡出舞林，心
: 未变，舞未变，若以舞者身份走入舞林，以演员身份走到最后，舞虽变，心已远，同一
: 条路走的人很多，我喜欢自己走过，有人轻声说他来过。
b*r
35 楼
Good idea. My 9kb DNA itself contains too many restriction sites. NotI is
the only choice.
'Description:
Important: GeneHogs® competent cells are being discontinued on December
31, 2007.
Use ElectroMAX™ DH10B™ T1R cells for exceptional performance!
'
常做的克隆比是不是还比较正常，如
果比较正常，那说明这种假阳性很可能是因为你的插入片段有一段序列比较容易发生重
组，试着30度长克隆和摇菌看看。
另外，能不用单酶切做克隆就不要用，你大片段克隆还用这个策略，最好换其它双酶切。
这个菌株，从来没出现过问题，感
受态效率一般7次方就可以了，15kb可以长百来个克隆。
发生重组的质粒，一般10个有2个
总是对的。
【在 r****r 的大作中提到】
: 一般大片段克隆，会导致连接效率很低，克隆数大大减少，可以看看你的克隆数和你常做的克隆比是不是还比较正常，如果比较正常，那说明这种假阳性很可能是因为你的插入片段有一段序列比较容易发生重组，试着30度长克隆和摇菌看看。另外，能不用单酶切做克隆就不要用，你大片段克隆还用这个策略，最好换其它双酶切。
: 另外，单就大片段克隆而言，建议用GeneHogs菌株，我手上的片段普遍10k以上，用这个菌株，从来没出现过问题，感受态效率一般7次方就可以了，15kb可以长百来个克隆。
: 因此建议先更换单酶切策略和换genehogs，然后不行再换30度生长看。30度生长，已发生重组的质粒，一般10个有2个总是对的。
:
: gone
: cut
the only choice.
'Description:
Important: GeneHogs® competent cells are being discontinued on December
31, 2007.
Use ElectroMAX™ DH10B™ T1R cells for exceptional performance!
'
常做的克隆比是不是还比较正常，如
果比较正常，那说明这种假阳性很可能是因为你的插入片段有一段序列比较容易发生重
组，试着30度长克隆和摇菌看看。
另外，能不用单酶切做克隆就不要用，你大片段克隆还用这个策略，最好换其它双酶切。
这个菌株，从来没出现过问题，感
受态效率一般7次方就可以了，15kb可以长百来个克隆。
发生重组的质粒，一般10个有2个
总是对的。
【在 r****r 的大作中提到】
: 一般大片段克隆，会导致连接效率很低，克隆数大大减少，可以看看你的克隆数和你常做的克隆比是不是还比较正常，如果比较正常，那说明这种假阳性很可能是因为你的插入片段有一段序列比较容易发生重组，试着30度长克隆和摇菌看看。另外，能不用单酶切做克隆就不要用，你大片段克隆还用这个策略，最好换其它双酶切。
: 另外，单就大片段克隆而言，建议用GeneHogs菌株，我手上的片段普遍10k以上，用这个菌株，从来没出现过问题，感受态效率一般7次方就可以了，15kb可以长百来个克隆。
: 因此建议先更换单酶切策略和换genehogs，然后不行再换30度生长看。30度生长，已发生重组的质粒，一般10个有2个总是对的。
:
: gone
: cut
g*r
36 楼
re!
g*s
37 楼
刘团情商堪忧啊，看来的确不能太小上学，12岁就大学了，能忍到现在再酸算是不错了。
【在 l********r 的大作中提到】
: 刘福洋87号
: 身从花中过，片语不留伤，已在桃园外，花开花又败，纪念了天空，揣摩了时光，已是
: 昨日的太阳，今日的雨也不必紧张，我以舞者身份走入舞林，以舞者身份淡出舞林，心
: 未变，舞未变，若以舞者身份走入舞林，以演员身份走到最后，舞虽变，心已远，同一
: 条路走的人很多，我喜欢自己走过，有人轻声说他来过。
【在 l********r 的大作中提到】
: 刘福洋87号
: 身从花中过，片语不留伤，已在桃园外，花开花又败，纪念了天空，揣摩了时光，已是
: 昨日的太阳，今日的雨也不必紧张，我以舞者身份走入舞林，以舞者身份淡出舞林，心
: 未变，舞未变，若以舞者身份走入舞林，以演员身份走到最后，舞虽变，心已远，同一
: 条路走的人很多，我喜欢自己走过，有人轻声说他来过。
r*r
38 楼
我宁愿改造载体的酶切位点，都不会去做9kb的CIP克隆
December
【在 b******r 的大作中提到】
: Good idea. My 9kb DNA itself contains too many restriction sites. NotI is
: the only choice.
: 'Description:
: Important: GeneHogs® competent cells are being discontinued on December
: 31, 2007.
: Use ElectroMAX™ DH10B™ T1R cells for exceptional performance!
: '
:
: 常做的克隆比是不是还比较正常，如
: 果比较正常，那说明这种假阳性很可能是因为你的插入片段有一段序列比较容易发生重
December
【在 b******r 的大作中提到】
: Good idea. My 9kb DNA itself contains too many restriction sites. NotI is
: the only choice.
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: Important: GeneHogs® competent cells are being discontinued on December
: 31, 2007.
: Use ElectroMAX™ DH10B™ T1R cells for exceptional performance!
: '
:
: 常做的克隆比是不是还比较正常，如
: 果比较正常，那说明这种假阳性很可能是因为你的插入片段有一段序列比较容易发生重
q*i
39 楼
re
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
n*5
40 楼
吃
R*s
41 楼
爽！！！！！！！！！！！ 谢谢大家， 赢了每个人双黄
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
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c*k
42 楼
chi
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
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T*r
43 楼
hai you ma?
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
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h*a
44 楼
re!
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
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: 他荷必胜！！！！！！！！
R*s
45 楼
你真的是狐狸么？
【在 h*******a 的大作中提到】
: re!
【在 h*******a 的大作中提到】
: re!
m*m
46 楼
re
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
n*u
47 楼
re
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
h*a
48 楼
估计是一个你不认识的狐狸……
【在 R*****s 的大作中提到】
: 你真的是狐狸么？
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: 你真的是狐狸么？
b*i
49 楼
re，还有么？
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: 他荷必胜！！！！！！！！
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j*e
50 楼
re
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: 他荷必胜！！！！！！！！
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: 他荷必胜！！！！！！！！
p*e
51 楼
吃到了:D
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
【在 R*****s 的大作中提到】
: 他荷必胜！！！！！！！！
d*e
52 楼
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