从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记（二十二）# Biology - 生物学
r*o
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本文献给YL
（二十二）失败中的启示
离子交换层析之后是最后一步纯化，疏水作用层析(hydrophobic
Interaction Chromatography, HIC)。HIC和硫酸铵沉淀是同一个原理。
蛋白质表面有一些疏水区域，如果在蛋白质样品溶液里面加足够的盐，
就会与这些疏水区域争夺水分子。没有了足够的分子，这些疏水区域倾向
于与其他疏水区域结合。HIC的beads上衍生有非极性基团，可以与蛋白
质的疏水区域结合，这样蛋白质就能bind到柱子上。要想把蛋白质洗脱
下来，则要用低盐缓冲液冲洗，盐浓度下降之后蛋白质与柱子的疏水相互
作用也被削弱，所以能被冲洗下来。由于HIC要求样品的起始盐浓度很高，
所以特别适于作为硫酸铵沉淀或者离子交换层析后续步骤。因为硫酸铵沉
淀（无论是上清还是沉淀）和离子交换层析的产物，盐浓度都非常高，如
果直接再跑HIC，不但省了透析脱盐的一步，还进一步纯化了蛋白。现在
常用的HIC resin上的疏水基团有两种，一种是Phenyl 另一种是Octyl。比
较而言，Octyl group更加疏水一些。我们这一次的实验中用的是Phenyl
se
（二十二）失败中的启示
离子交换层析之后是最后一步纯化，疏水作用层析(hydrophobic
Interaction Chromatography, HIC)。HIC和硫酸铵沉淀是同一个原理。
蛋白质表面有一些疏水区域，如果在蛋白质样品溶液里面加足够的盐，
就会与这些疏水区域争夺水分子。没有了足够的分子，这些疏水区域倾向
于与其他疏水区域结合。HIC的beads上衍生有非极性基团，可以与蛋白
质的疏水区域结合，这样蛋白质就能bind到柱子上。要想把蛋白质洗脱
下来，则要用低盐缓冲液冲洗，盐浓度下降之后蛋白质与柱子的疏水相互
作用也被削弱，所以能被冲洗下来。由于HIC要求样品的起始盐浓度很高，
所以特别适于作为硫酸铵沉淀或者离子交换层析后续步骤。因为硫酸铵沉
淀（无论是上清还是沉淀）和离子交换层析的产物，盐浓度都非常高，如
果直接再跑HIC，不但省了透析脱盐的一步，还进一步纯化了蛋白。现在
常用的HIC resin上的疏水基团有两种，一种是Phenyl 另一种是Octyl。比
较而言，Octyl group更加疏水一些。我们这一次的实验中用的是Phenyl
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