m*e
2 楼
金星这个人既不幽默，也没涵养，长得又恶心，尤其说话的声音，眉飞色舞的，对别人指指点点，而且还抨击的都是些比较善良的明星，这是个什么鬼啊？为什么电视台要让这样的鬼上电视呢？太恶心了。而且网上好像还有很多金星的水军，这个人凭什么当主持人啊？就因为她敢乱喷吗？她根本不具备一个主持人的基本素质啊，普通话带着东北味儿，声音很脏，主要的是这个人的心理很变态，心胸狭窄，赶紧让她滚蛋吧。
O*n
3 楼
向小雨是何洁演的。
m*m
4 楼
用饱和硫酸铵沉淀了蛋白，完全去除上清液后，PELLET用BUFFER溶解，先用PIPET轻轻
把PELLET打碎成小碎片，然后在37C超声水槽里超声，最后还是有微小的蛋白碎片怎么
都不溶解，测了OD280=2左右，也不算很浓啊，这个浓度的时候这个蛋白一般都是溶解
的，测了PH也没有问题。请问该如何让蛋白完全溶解阿？
把PELLET打碎成小碎片，然后在37C超声水槽里超声，最后还是有微小的蛋白碎片怎么
都不溶解，测了OD280=2左右，也不算很浓啊，这个浓度的时候这个蛋白一般都是溶解
的，测了PH也没有问题。请问该如何让蛋白完全溶解阿？
s*n
5 楼
大师回国了？
l*n
6 楼
确实挺那什么的，男子气概
m*n
7 楼
我一眼看见就发现了，演技真差。。
s*y
8 楼
Dialyze against your buffer overnight
【在 m****m 的大作中提到】
: 用饱和硫酸铵沉淀了蛋白，完全去除上清液后，PELLET用BUFFER溶解，先用PIPET轻轻
: 把PELLET打碎成小碎片，然后在37C超声水槽里超声，最后还是有微小的蛋白碎片怎么
: 都不溶解，测了OD280=2左右，也不算很浓啊，这个浓度的时候这个蛋白一般都是溶解
: 的，测了PH也没有问题。请问该如何让蛋白完全溶解阿？
【在 m****m 的大作中提到】
: 用饱和硫酸铵沉淀了蛋白，完全去除上清液后，PELLET用BUFFER溶解，先用PIPET轻轻
: 把PELLET打碎成小碎片，然后在37C超声水槽里超声，最后还是有微小的蛋白碎片怎么
: 都不溶解，测了OD280=2左右，也不算很浓啊，这个浓度的时候这个蛋白一般都是溶解
: 的，测了PH也没有问题。请问该如何让蛋白完全溶解阿？
O*n
9 楼
我怎么就没看出来呢。。。不怎么像了！
【在 m*********n 的大作中提到】
: 我一眼看见就发现了，演技真差。。
【在 m*********n 的大作中提到】
: 我一眼看见就发现了，演技真差。。
D*9
10 楼
yes, you have to remove salt first, I used to dialyze my protein at 4
degree overnight
degree overnight
p*6
11 楼
画的妆不一样吧，电视里淡妆，看不大出来是何洁了
【在 O********n 的大作中提到】
: 我怎么就没看出来呢。。。不怎么像了！
【在 O********n 的大作中提到】
: 我怎么就没看出来呢。。。不怎么像了！
m*m
12 楼
The reason why I didn't dialysis is that my protein is a hydrophobic
membrane protein which is desolved in an expensive detergent. If I dialysis,
the detergent will also go away and my protein will precipitate anyway.
I wonder if there's any other way to concentrate protein except using this
method and centrifuge through a membrane to get rid of the water? The later
is not so efficient, because I see some protein also pass the membrane which
causes loss.
Can we use vaccum dry under low temperatu
membrane protein which is desolved in an expensive detergent. If I dialysis,
the detergent will also go away and my protein will precipitate anyway.
I wonder if there's any other way to concentrate protein except using this
method and centrifuge through a membrane to get rid of the water? The later
is not so efficient, because I see some protein also pass the membrane which
causes loss.
Can we use vaccum dry under low temperatu
a*u
13 楼
整容整成了几把蛋
【在 O********n 的大作中提到】
: 向小雨是何洁演的。
【在 O********n 的大作中提到】
: 向小雨是何洁演的。
m*m
14 楼
dd,,,,,,,,
s*y
15 楼
这几种方法你都可以试一下。没有哪一个是肯定保险的。
至于说用concentrator会损失蛋白？这个可能是因为你没有选对大小合适
的滤膜。一般来说，滤膜的孔的标定尺寸应该比你的蛋白的真正尺寸小
三倍。比方说30K 的蛋白必须用小于10K MWCO的膜，否则蛋白有可能漏过去。
另外，在dialysis 的时候，你可以在外面的溶液里也放上detergent 啊，
我不明白这个为什么会是问题。而且，一般来说，detergent 在溶液里
会形成微团，所以不会容易的透过滤膜
dialysis,
later
which
【在 m****m 的大作中提到】
: The reason why I didn't dialysis is that my protein is a hydrophobic
: membrane protein which is desolved in an expensive detergent. If I dialysis,
: the detergent will also go away and my protein will precipitate anyway.
: I wonder if there's any other way to concentrate protein except using this
: method and centrifuge through a membrane to get rid of the water? The later
: is not so efficient, because I see some protein also pass the membrane which
: causes loss.
: Can we use vaccum dry under low temperatu
至于说用concentrator会损失蛋白？这个可能是因为你没有选对大小合适
的滤膜。一般来说，滤膜的孔的标定尺寸应该比你的蛋白的真正尺寸小
三倍。比方说30K 的蛋白必须用小于10K MWCO的膜，否则蛋白有可能漏过去。
另外，在dialysis 的时候，你可以在外面的溶液里也放上detergent 啊，
我不明白这个为什么会是问题。而且，一般来说，detergent 在溶液里
会形成微团，所以不会容易的透过滤膜
dialysis,
later
which
【在 m****m 的大作中提到】
: The reason why I didn't dialysis is that my protein is a hydrophobic
: membrane protein which is desolved in an expensive detergent. If I dialysis,
: the detergent will also go away and my protein will precipitate anyway.
: I wonder if there's any other way to concentrate protein except using this
: method and centrifuge through a membrane to get rid of the water? The later
: is not so efficient, because I see some protein also pass the membrane which
: causes loss.
: Can we use vaccum dry under low temperatu
a*o
16 楼
如果已经是纯化的蛋白，就不用硫酸铵了吧，这个主要是分离用的
可以用乙醇或TCA， 不知道会不会好溶，没经验
可以用乙醇或TCA， 不知道会不会好溶，没经验
a*o
17 楼
看来你是赵本山
【在 s******y 的大作中提到】
: 这几种方法你都可以试一下。没有哪一个是肯定保险的。
: 至于说用concentrator会损失蛋白？这个可能是因为你没有选对大小合适
: 的滤膜。一般来说，滤膜的孔的标定尺寸应该比你的蛋白的真正尺寸小
: 三倍。比方说30K 的蛋白必须用小于10K MWCO的膜，否则蛋白有可能漏过去。
: 另外，在dialysis 的时候，你可以在外面的溶液里也放上detergent 啊，
: 我不明白这个为什么会是问题。而且，一般来说，detergent 在溶液里
: 会形成微团，所以不会容易的透过滤膜
:
: dialysis,
: later
【在 s******y 的大作中提到】
: 这几种方法你都可以试一下。没有哪一个是肯定保险的。
: 至于说用concentrator会损失蛋白？这个可能是因为你没有选对大小合适
: 的滤膜。一般来说，滤膜的孔的标定尺寸应该比你的蛋白的真正尺寸小
: 三倍。比方说30K 的蛋白必须用小于10K MWCO的膜，否则蛋白有可能漏过去。
: 另外，在dialysis 的时候，你可以在外面的溶液里也放上detergent 啊，
: 我不明白这个为什么会是问题。而且，一般来说，detergent 在溶液里
: 会形成微团，所以不会容易的透过滤膜
:
: dialysis,
: later
s*y
18 楼
小师弟呵，那个三倍的说法是蛋白生化界人常用的。
因为公司们标定那个MWCO 一般是用直链高分子聚合物来测的。
换算成球型分子就必须比这个大三倍，才能保证球形分子的直径是孔径的
1。5倍左右
【在 a****o 的大作中提到】
: 看来你是赵本山
因为公司们标定那个MWCO 一般是用直链高分子聚合物来测的。
换算成球型分子就必须比这个大三倍，才能保证球形分子的直径是孔径的
1。5倍左右
【在 a****o 的大作中提到】
: 看来你是赵本山
a*a
19 楼
漏也漏不了多少，我用30k的concentrator试着想分离10k的蛋白（可以想让他
漏过去）
结果发现也就20%能过去。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: 小师弟呵，那个三倍的说法是蛋白生化界人常用的。
: 因为公司们标定那个MWCO 一般是用直链高分子聚合物来测的。
: 换算成球型分子就必须比这个大三倍，才能保证球形分子的直径是孔径的
: 1。5倍左右
漏过去）
结果发现也就20%能过去。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: 小师弟呵，那个三倍的说法是蛋白生化界人常用的。
: 因为公司们标定那个MWCO 一般是用直链高分子聚合物来测的。
: 换算成球型分子就必须比这个大三倍，才能保证球形分子的直径是孔径的
: 1。5倍左右
s*y
20 楼
这个就是这样的，你要想漏过去的反而漏不过去。
不想要漏过去的反而会哗哗的漏掉。
而且，这种concentrator 设计的时候不是为了分离蛋白用的，
像你这种用法，会让很多蛋白会卡在孔里或者粘在膜上，不可能全部漏过去的，
能弄到20%已经不错了，但是如果你测一下上方溶液里的蛋白含量，应该会小于80%
【在 a***a 的大作中提到】
: 漏也漏不了多少，我用30k的concentrator试着想分离10k的蛋白（可以想让他
: 漏过去）
: 结果发现也就20%能过去。。。
不想要漏过去的反而会哗哗的漏掉。
而且，这种concentrator 设计的时候不是为了分离蛋白用的，
像你这种用法，会让很多蛋白会卡在孔里或者粘在膜上，不可能全部漏过去的，
能弄到20%已经不错了，但是如果你测一下上方溶液里的蛋白含量，应该会小于80%
【在 a***a 的大作中提到】
: 漏也漏不了多少，我用30k的concentrator试着想分离10k的蛋白（可以想让他
: 漏过去）
: 结果发现也就20%能过去。。。
a*a
21 楼
这个本底损失我当然知道
【在 s******y 的大作中提到】
: 这个就是这样的，你要想漏过去的反而漏不过去。
: 不想要漏过去的反而会哗哗的漏掉。
: 而且，这种concentrator 设计的时候不是为了分离蛋白用的，
: 像你这种用法，会让很多蛋白会卡在孔里或者粘在膜上，不可能全部漏过去的，
: 能弄到20%已经不错了，但是如果你测一下上方溶液里的蛋白含量，应该会小于80%
【在 s******y 的大作中提到】
: 这个就是这样的，你要想漏过去的反而漏不过去。
: 不想要漏过去的反而会哗哗的漏掉。
: 而且，这种concentrator 设计的时候不是为了分离蛋白用的，
: 像你这种用法，会让很多蛋白会卡在孔里或者粘在膜上，不可能全部漏过去的，
: 能弄到20%已经不错了，但是如果你测一下上方溶液里的蛋白含量，应该会小于80%
m*m
22 楼
难道就没有一个既好用又省事的浓缩蛋白的方法吗？可以真空抽吗，弄掉些水分就好阿
a*a
23 楼
很多做nmr的蛋白的确可以这么折腾。很爽
【在 m****m 的大作中提到】
: 难道就没有一个既好用又省事的浓缩蛋白的方法吗？可以真空抽吗，弄掉些水分就好阿
【在 m****m 的大作中提到】
: 难道就没有一个既好用又省事的浓缩蛋白的方法吗？可以真空抽吗，弄掉些水分就好阿
s*y
24 楼
当然可以，真空抽，保持比较低的温度（10度左右就好）
但是，抽完之后溶液里的盐度会很高的，得dialyze 一次。
或者，你一开始就用比较低盐的溶液的溶解蛋白，然后再抽真空。
【在 m****m 的大作中提到】
: 难道就没有一个既好用又省事的浓缩蛋白的方法吗？可以真空抽吗，弄掉些水分就好阿
但是，抽完之后溶液里的盐度会很高的，得dialyze 一次。
或者，你一开始就用比较低盐的溶液的溶解蛋白，然后再抽真空。
【在 m****m 的大作中提到】
: 难道就没有一个既好用又省事的浓缩蛋白的方法吗？可以真空抽吗，弄掉些水分就好阿
m*m
25 楼
我想把磷脂蛋白抽干些可以放多点样品到ROTOR里，老板还不同意呢，说水分的多少可
能会影响结构功能。。。
【在 a***a 的大作中提到】
: 很多做nmr的蛋白的确可以这么折腾。很爽
能会影响结构功能。。。
【在 a***a 的大作中提到】
: 很多做nmr的蛋白的确可以这么折腾。很爽
a*g
26 楼
我印象中Pierce测定他们的concentrator的MWCO是用的BSA，lysozyme，ubiquitin和
cytochrome C。
【在 s******y 的大作中提到】
: 小师弟呵，那个三倍的说法是蛋白生化界人常用的。
: 因为公司们标定那个MWCO 一般是用直链高分子聚合物来测的。
: 换算成球型分子就必须比这个大三倍，才能保证球形分子的直径是孔径的
: 1。5倍左右
cytochrome C。
【在 s******y 的大作中提到】
: 小师弟呵，那个三倍的说法是蛋白生化界人常用的。
: 因为公司们标定那个MWCO 一般是用直链高分子聚合物来测的。
: 换算成球型分子就必须比这个大三倍，才能保证球形分子的直径是孔径的
: 1。5倍左右
s*y
27 楼
不同的公司做法不一样。这个得看他们的产品说明。
【在 a******g 的大作中提到】
: 我印象中Pierce测定他们的concentrator的MWCO是用的BSA，lysozyme，ubiquitin和
: cytochrome C。
【在 a******g 的大作中提到】
: 我印象中Pierce测定他们的concentrator的MWCO是用的BSA，lysozyme，ubiquitin和
: cytochrome C。
e*s
28 楼
你说的就是冷冻干燥啊，冷冻干燥也有保持蛋白活性和保持活性的问题。而且往往要加
入大量的保护剂，BSA之类的。
研究上还是超滤好。而且Sunnyday说的膜孔3倍分子量以下是很对的。
【在 m****m 的大作中提到】
: 难道就没有一个既好用又省事的浓缩蛋白的方法吗？可以真空抽吗，弄掉些水分就好阿
入大量的保护剂，BSA之类的。
研究上还是超滤好。而且Sunnyday说的膜孔3倍分子量以下是很对的。
【在 m****m 的大作中提到】
: 难道就没有一个既好用又省事的浓缩蛋白的方法吗？可以真空抽吗，弄掉些水分就好阿
l*n
29 楼
37C超声? 蛋白是不是变性了？
【在 m****m 的大作中提到】
: 用饱和硫酸铵沉淀了蛋白，完全去除上清液后，PELLET用BUFFER溶解，先用PIPET轻轻
: 把PELLET打碎成小碎片，然后在37C超声水槽里超声，最后还是有微小的蛋白碎片怎么
: 都不溶解，测了OD280=2左右，也不算很浓啊，这个浓度的时候这个蛋白一般都是溶解
: 的，测了PH也没有问题。请问该如何让蛋白完全溶解阿？
【在 m****m 的大作中提到】
: 用饱和硫酸铵沉淀了蛋白，完全去除上清液后，PELLET用BUFFER溶解，先用PIPET轻轻
: 把PELLET打碎成小碎片，然后在37C超声水槽里超声，最后还是有微小的蛋白碎片怎么
: 都不溶解，测了OD280=2左右，也不算很浓啊，这个浓度的时候这个蛋白一般都是溶解
: 的，测了PH也没有问题。请问该如何让蛋白完全溶解阿？
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