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急问, 纯化出来的蛋白怎么保存?
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急问, 纯化出来的蛋白怎么保存?# Biology - 生物学
h*e
1
TSC can expect email in a day many times, NSC can only expect phsical mail
box, once aday
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A*e
2
要是拍卖STORM这个ID,大约能拍到多少钱?
@@
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h*a
3
几年前感恩节入的 用的不多~
9成新机子+ram扩充到128M(原装是64M)+原电+备电+高容量备电+4G cf卡(这个机子
是可以sd卡至少up他哦16G+cf卡同时工作的)+皮套+座充+车充(需要找找 找到了可以
当gps使 如果你有蓝牙gps模块的话)
感兴趣的pm我吧 价格么 100?合理就出了 从来没搞过ebay 不敢去ebay玩~
谢谢~
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c*a
4
his tagged 的蛋白用nickel resin纯化出来,在elution buffer里, buffer里有
imidazole, sodium
phosphate. 一共1ml. 以后需要做activity asssy, 请问怎么保存才能不失活性?
是不是要加protease inhibitors, glycerol? 加多少glycerol? 冻-20还是-80?
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d*r
5
嗯哪
等待 is only thing .
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f*t
6
送我吧

【在 A*********e 的大作中提到】
: 要是拍卖STORM这个ID,大约能拍到多少钱?
: @@

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a*y
7
什么价格算是合理?还是楼主先说吧,否则给你来个20,你觉得合理吗?在ebay的上限
是129.99,下限不知道,看到有bid 80的。

【在 h*******a 的大作中提到】
: 几年前感恩节入的 用的不多~
: 9成新机子+ram扩充到128M(原装是64M)+原电+备电+高容量备电+4G cf卡(这个机子
: 是可以sd卡至少up他哦16G+cf卡同时工作的)+皮套+座充+车充(需要找找 找到了可以
: 当gps使 如果你有蓝牙gps模块的话)
: 感兴趣的pm我吧 价格么 100?合理就出了 从来没搞过ebay 不敢去ebay玩~
: 谢谢~

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l*k
8
先透析,去掉imidazole, glycerol 5-10%, protease inhibitor不是必须的,可以加
一点EDTA, 1mM, 绝大部分serine protease没有Mg离子都没有活性了,有的蛋白要加DTT或者beta mecapitalmethanol,保持溶液的还原状态,视情况而定。
然后分装,用液氮进行迅速冷却,然后保存在-80, 有些比较脆弱的蛋白即使这样保存也会失活,那就需要找到合适的buffer,或者每次都用fresh made的蛋白
推荐你去读一下一个科大师兄写的从纯化到星辰,里面提到了很多蛋白提纯跟保存的技
术,对于做蛋白的很有帮助
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b*a
9
waiting is painful....
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A*e
10
我先拍一拍,看看什么价位再说,嗯嗯
好歹我买来的时候还花了100银子呢

【在 f**t 的大作中提到】
: 送我吧
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h*a
11
呵呵 谢谢提醒~那就100吧 我的配置比原装的配置还是要高点哈~

【在 a****y 的大作中提到】
: 什么价格算是合理?还是楼主先说吧,否则给你来个20,你觉得合理吗?在ebay的上限
: 是129.99,下限不知道,看到有bid 80的。

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s*y
12

这个帖子在哪里啊

【在 l*******k 的大作中提到】
: 先透析,去掉imidazole, glycerol 5-10%, protease inhibitor不是必须的,可以加
: 一点EDTA, 1mM, 绝大部分serine protease没有Mg离子都没有活性了,有的蛋白要加DTT或者beta mecapitalmethanol,保持溶液的还原状态,视情况而定。
: 然后分装,用液氮进行迅速冷却,然后保存在-80, 有些比较脆弱的蛋白即使这样保存也会失活,那就需要找到合适的buffer,或者每次都用fresh made的蛋白
: 推荐你去读一下一个科大师兄写的从纯化到星辰,里面提到了很多蛋白提纯跟保存的技
: 术,对于做蛋白的很有帮助

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W*e
13
这样也好,NSC的白天可以安心上班。

【在 h*********e 的大作中提到】
: TSC can expect email in a day many times, NSC can only expect phsical mail
: box, once aday

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f*t
14
那个居然是你买的,不是你自己注册的?

【在 A*********e 的大作中提到】
: 我先拍一拍,看看什么价位再说,嗯嗯
: 好歹我买来的时候还花了100银子呢

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A*L
15
这东西现在居然还有人在用? 还能卖这么多钱?

【在 h*******a 的大作中提到】
: 几年前感恩节入的 用的不多~
: 9成新机子+ram扩充到128M(原装是64M)+原电+备电+高容量备电+4G cf卡(这个机子
: 是可以sd卡至少up他哦16G+cf卡同时工作的)+皮套+座充+车充(需要找找 找到了可以
: 当gps使 如果你有蓝牙gps模块的话)
: 感兴趣的pm我吧 价格么 100?合理就出了 从来没搞过ebay 不敢去ebay玩~
: 谢谢~

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l*k
16
搜一下这个名字就能找到下载了,如果找不到,可以留给我你的信箱,我晚上回家发给
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w*t
17
不那么容易安心上班了。

【在 W******e 的大作中提到】
: 这样也好,NSC的白天可以安心上班。
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A*e
18
对咯。。看见有人叫卖。。我因为喜欢短的一个字的ID,就买了一个

【在 f**t 的大作中提到】
: 那个居然是你买的,不是你自己注册的?
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f*t
19
100?
白给我都嫌占地方
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p*m
20
精华区 网友文集 royluo

【在 s*******y 的大作中提到】
:
: 这个帖子在哪里啊

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l*l
21
不记得自己是什么SC的一天都不得消停。。。

【在 w**t 的大作中提到】
: 不那么容易安心上班了。
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f*t
22
还不够短

【在 A*********e 的大作中提到】
: 对咯。。看见有人叫卖。。我因为喜欢短的一个字的ID,就买了一个
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h*a
23
hehe我也不了解行情啊 我就看着上边那个ebay的价大概写的~

【在 f*****t 的大作中提到】
: 100?
: 白给我都嫌占地方

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s*y
24
谢谢~

【在 l*******k 的大作中提到】
: 搜一下这个名字就能找到下载了,如果找不到,可以留给我你的信箱,我晚上回家发给
: 你

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p*o
25
问一个问题啊,卡是寄到家里还是律师那里啊?
好像485的收据上是律师的地址,去年搬家根据要求去USCIS report 了一下 address
change.
谢。
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A*e
26
你的名字虽然短,可是不那么直观

【在 f**t 的大作中提到】
: 还不够短
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f*t
27

找个朋友谁愿意要的送人玩吧

【在 h*******a 的大作中提到】
: hehe我也不了解行情啊 我就看着上边那个ebay的价大概写的~
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s*y
28
谢谢,看到了,就是排版有点乱……

【在 p*****m 的大作中提到】
: 精华区 网友文集 royluo
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j*1
29
I asked the officer at the call center the same question and was told that
the cards should be sent to your home address. If you have moved since you
filed your I-485, you'd better call them to update your mailing address. I
filed AR-11 form when I moved 3 years ago, but the officer told me the
address shown on his computer was still the old address and he was very kind
to update the address for me.

【在 p****o 的大作中提到】
: 问一个问题啊,卡是寄到家里还是律师那里啊?
: 好像485的收据上是律师的地址,去年搬家根据要求去USCIS report 了一下 address
: change.
: 谢。

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f*t
30
太直了不好

【在 A*********e 的大作中提到】
: 你的名字虽然短,可是不那么直观
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A*L
31
去ebay卖吧
这个机子当年是不错,很火,甚至后来还升值了
不过隔了这么多年之后,到现在smart phone已经发展到了这个程度
这款机器也很难值这个价格了

【在 h*******a 的大作中提到】
: hehe我也不了解行情啊 我就看着上边那个ebay的价大概写的~
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l*k
32
我有个电子版的,晚上回家找给你,话说当年来美国,这个师兄还是帮了很大的忙
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p*o
33
谢谢jierui,
刚刚打过电话,好像不小心还给做了SR,给了个confirmation number,告诉30天之内
没消息再打电话。但愿交好运吧。

kind

【在 j********1 的大作中提到】
: I asked the officer at the call center the same question and was told that
: the cards should be sent to your home address. If you have moved since you
: filed your I-485, you'd better call them to update your mailing address. I
: filed AR-11 form when I moved 3 years ago, but the officer told me the
: address shown on his computer was still the old address and he was very kind
: to update the address for me.

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A*e
34
原来你喜欢弯弯

【在 f**t 的大作中提到】
: 太直了不好
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h*a
35
thx!呵呵

【在 A****L 的大作中提到】
: 去ebay卖吧
: 这个机子当年是不错,很火,甚至后来还升值了
: 不过隔了这么多年之后,到现在smart phone已经发展到了这个程度
: 这款机器也很难值这个价格了

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s*y
36
非常感谢,站内pm了

【在 l*******k 的大作中提到】
: 我有个电子版的,晚上回家找给你,话说当年来美国,这个师兄还是帮了很大的忙
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r*e
37
bad thing is you check too many times a day.

【在 h*********e 的大作中提到】
: TSC can expect email in a day many times, NSC can only expect phsical mail
: box, once aday

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f*t
38
也要看弯的是什么

【在 A*********e 的大作中提到】
: 原来你喜欢弯弯
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w*g
39
有点舍不得, 当年也在上面看了不少书的.
我还留着我的PALM ZIRE32呢, 那, 才是古董.

【在 A****L 的大作中提到】
: 去ebay卖吧
: 这个机子当年是不错,很火,甚至后来还升值了
: 不过隔了这么多年之后,到现在smart phone已经发展到了这个程度
: 这款机器也很难值这个价格了

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a*k
40
偶来补充自己的看法吧:透析不是必须的,只要imidazole不影响activity就好。一般
不用再加protease inhibitor,因为细胞裂解的时候不是已经加过了吗。不建议加EDTA
,不知道lz是要做什么activity assay,很有可能这个蛋白本身自己就是需要镁离子的。
glycerol,对于一般的蛋白我们都是加10%,然后分装后用液氮冻完存在-80度。但是
碰到很不好保存的蛋白,比如冻了一两个月就没有activity的,把glycerol加到20%会
有帮助。

DTT或者beta mecapitalmethanol,保持溶液的还原状态,视情况而定。
存也会失活,那就需要找到合适的buffer,或者每次都用fresh made的蛋白

【在 l*******k 的大作中提到】
: 先透析,去掉imidazole, glycerol 5-10%, protease inhibitor不是必须的,可以加
: 一点EDTA, 1mM, 绝大部分serine protease没有Mg离子都没有活性了,有的蛋白要加DTT或者beta mecapitalmethanol,保持溶液的还原状态,视情况而定。
: 然后分装,用液氮进行迅速冷却,然后保存在-80, 有些比较脆弱的蛋白即使这样保存也会失活,那就需要找到合适的buffer,或者每次都用fresh made的蛋白
: 推荐你去读一下一个科大师兄写的从纯化到星辰,里面提到了很多蛋白提纯跟保存的技
: 术,对于做蛋白的很有帮助

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w*t
41
it is easy to check email with Iphone. But the problem is for NSCer, there
is nothing to check except coming to mitbbs to refresh for some news to
relief the pain.

【在 r****e 的大作中提到】
: bad thing is you check too many times a day.
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A*e
42
香蕉?

【在 f**t 的大作中提到】
: 也要看弯的是什么
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A*L
43
当纪念挺好
我也留了个dell的pda在家,用也没法用,扔又不舍得,没准再过几年就舍得扔了

【在 w*****g 的大作中提到】
: 有点舍不得, 当年也在上面看了不少书的.
: 我还留着我的PALM ZIRE32呢, 那, 才是古董.

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c*a
44
谢谢大家, fresh的蛋白还在elution buffer里时 就做过activity assay, imidazole不影响活性. 放4度
一个星期之后蛋白就不行了. 所以想存在低温下.
回头拜读一下从纯化到星辰.
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x*g
45
Looks like TSC is only updating after 6pm
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f*t
46
茄子

【在 A*********e 的大作中提到】
: 香蕉?
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w*g
47
当年小500买的, 马皮的用了不到三年就过期了. 这比账要算在老乔身上.
其实当年有人把SIM卡绑在X51V上. 还有适配器买过.

【在 A****L 的大作中提到】
: 当纪念挺好
: 我也留了个dell的pda在家,用也没法用,扔又不舍得,没准再过几年就舍得扔了

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k*n
48
试试50%Glyceral, -20 oC
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A*e
49
苦瓜

【在 f**t 的大作中提到】
: 茄子
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w*g
50
摸了一下, 除了ZIRE32外, 抽屉里还有PSP1000, PSP2000各一台, 外加一个SB NDSL. 都
被我用来看过电子书.
其实我还拿过第三代IPOD, 对, 那个液精屏的看过电子书. 俱往已.

【在 w*****g 的大作中提到】
: 当年小500买的, 马皮的用了不到三年就过期了. 这比账要算在老乔身上.
: 其实当年有人把SIM卡绑在X51V上. 还有适配器买过.

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s*n
51
能发给我一份电子版的么?Thanks!

【在 l*******k 的大作中提到】
: 我有个电子版的,晚上回家找给你,话说当年来美国,这个师兄还是帮了很大的忙
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f*t
52
扁豆

【在 A*********e 的大作中提到】
: 苦瓜
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A*L
53
电子产品用3年也差不多了
不过不得不承认,iphone的出现,对smart phone现在的市场影响很大

【在 w*****g 的大作中提到】
: 当年小500买的, 马皮的用了不到三年就过期了. 这比账要算在老乔身上.
: 其实当年有人把SIM卡绑在X51V上. 还有适配器买过.

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r*i
54
glycerol 是蛋白稳定剂(因蛋白而异)并能保护蛋白在急冻时候少受破坏 >=5%才有用
imidazole 是弱的denaturant, 很多蛋白不喜欢
EDTA 是金属chelator, 如果你的蛋白里没有金属,应该没有伤害,但也没什么用,因为在
提纯中用EDTA 可以抑制金属蛋白酶
很多时候100mM KCl (or NaCl, (NH4)2SO4)with/without 50 mM Arg 增加可溶性和稳
定性, 原理很有争议, 也有用 Arg + Asp
最后, 浓缩,离心,分装,急冻 (N2 liquid), -80
or 50%glycerol -20
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A*e
55
越来越小了!

【在 f**t 的大作中提到】
: 扁豆
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h*a
56
psp还是不错的哈 飞机上打法时间挺好~iphone玩游戏太耗电了~
以后准备飞机上psp+kindle了 呵呵~



【在 w*****g 的大作中提到】
: 摸了一下, 除了ZIRE32外, 抽屉里还有PSP1000, PSP2000各一台, 外加一个SB NDSL. 都
: 被我用来看过电子书.
: 其实我还拿过第三代IPOD, 对, 那个液精屏的看过电子书. 俱往已.

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f*t
57
对,过一会变成蚯蚓了

【在 A*********e 的大作中提到】
: 越来越小了!
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f*w
58
如果不缺钱和地方,就留着吧, 你花了多少钱升级ram? 我记得这个升级挺贵的啊
x51v其实算dell挺经典了的,只可惜现在pda过时了,而且原装的64mb ram小了点

hehe我也不了解行情啊 我就看着上边那个ebay的价大概写的~

【在 h*******a 的大作中提到】
: hehe我也不了解行情啊 我就看着上边那个ebay的价大概写的~
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l*r
59
在哪儿拍卖啊?
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k*e
60
我也有个x51v,64RAM没升级。
我现在装的是WM6.1,有BT GPS,我用IGO8(8.3.2),有新地图吗?大家都用什么导航
软件? 网上很多PNA的, PDA的比较少了。

【在 f******w 的大作中提到】
: 如果不缺钱和地方,就留着吧, 你花了多少钱升级ram? 我记得这个升级挺贵的啊
: x51v其实算dell挺经典了的,只可惜现在pda过时了,而且原装的64mb ram小了点
:
: hehe我也不了解行情啊 我就看着上边那个ebay的价大概写的~

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f*t
61
我这里
把银子汇过来就行了

【在 l*r 的大作中提到】
: 在哪儿拍卖啊?
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p*n
62
我的X51v就成了gps了, 用tomtom
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A*e
63
别说,我家从上周来了一只鼹鼠
在草地上到处打洞

【在 f**t 的大作中提到】
: 对,过一会变成蚯蚓了
avatar
h*a
64
不缺地方 缺钱 哈哈~升级ram是09年暑假搞的 150rmb~

【在 f******w 的大作中提到】
: 如果不缺钱和地方,就留着吧, 你花了多少钱升级ram? 我记得这个升级挺贵的啊
: x51v其实算dell挺经典了的,只可惜现在pda过时了,而且原装的64mb ram小了点
:
: hehe我也不了解行情啊 我就看着上边那个ebay的价大概写的~

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A*e
65
基督版。。我去开个贴

【在 l*r 的大作中提到】
: 在哪儿拍卖啊?
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t*y
66
我也有一个,还在用呢。听mp3,查字典,GPS,记事本,录音机
挺有用的。当然等我换了smart phone它就要被束之高阁了

【在 w*****g 的大作中提到】
: 当年小500买的, 马皮的用了不到三年就过期了. 这比账要算在老乔身上.
: 其实当年有人把SIM卡绑在X51V上. 还有适配器买过.

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f*t
67
有没有抓住烹了?

【在 A*********e 的大作中提到】
: 别说,我家从上周来了一只鼹鼠
: 在草地上到处打洞

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f*w
68
我靠, 国内这么便宜啊, 早知道带回去搞了, 这边我看要1,2百刀,nnd

不缺地方 缺钱 哈哈~升级ram是09年暑假搞的 150rmb~

【在 h*******a 的大作中提到】
: 不缺地方 缺钱 哈哈~升级ram是09年暑假搞的 150rmb~
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A*e
69
是从邻居家跑过来的,邻居赶了很久,灌水,下药,超声波,什么都试过,最后不知道
是哪招给试对了,结果跑我们家来找虫子吃了
据说有种方法就是给地上打农药,把土里的虫子都弄死了,然后鼹鼠没得吃了,就会跑
到别人家的地里去

【在 A*********e 的大作中提到】
: 别说,我家从上周来了一只鼹鼠
: 在草地上到处打洞

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k*e
70
什么地方搞的升级? 便宜啊!

【在 h*******a 的大作中提到】
: 不缺地方 缺钱 哈哈~升级ram是09年暑假搞的 150rmb~
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f*t
71
养猫吧

【在 A*********e 的大作中提到】
: 是从邻居家跑过来的,邻居赶了很久,灌水,下药,超声波,什么都试过,最后不知道
: 是哪招给试对了,结果跑我们家来找虫子吃了
: 据说有种方法就是给地上打农药,把土里的虫子都弄死了,然后鼹鼠没得吃了,就会跑
: 到别人家的地里去

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h*a
72
上海某电脑城 呵呵

【在 k***e 的大作中提到】
: 什么地方搞的升级? 便宜啊!
avatar
A*e
73
哪里抓得住啊

【在 f**t 的大作中提到】
: 有没有抓住烹了?
avatar
f*e
74
这个也太爽了,我升级一个就花了100刀
还可以等android移植好了玩一玩

【在 h*******a 的大作中提到】
: 上海某电脑城 呵呵
avatar
f*t
75
下夹子

【在 A*********e 的大作中提到】
: 哪里抓得住啊
avatar
h*a
76
恩?现在可以装android了?

【在 f*******e 的大作中提到】
: 这个也太爽了,我升级一个就花了100刀
: 还可以等android移植好了玩一玩

avatar
A*e
77
猫有邻居养,我们看看就够了

【在 f**t 的大作中提到】
: 养猫吧
avatar
A*e
79
还不晓得它喜欢吃什么呢,用什么做诱饵?

【在 f**t 的大作中提到】
: 下夹子
avatar
D*6
81
原来真是冬天。。。

【在 A*********e 的大作中提到】
: 要是拍卖STORM这个ID,大约能拍到多少钱?
: @@

avatar
p*e
82
四月清风,好婉约啊,风格变了,呵呵

【在 A*********e 的大作中提到】
: 要是拍卖STORM这个ID,大约能拍到多少钱?
: @@

avatar
uq
83
馬甲市場也是風雲變幻,有漲有跌啊

【在 A*********e 的大作中提到】
: 我先拍一拍,看看什么价位再说,嗯嗯
: 好歹我买来的时候还花了100银子呢

avatar
f*t
84
现在看跌

【在 uq 的大作中提到】
: 馬甲市場也是風雲變幻,有漲有跌啊
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