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抗体对Western 与IP会差很多吗

抗体对Western 与IP会差很多吗# Biology - 生物学

G*J2010-08-26 07:08

1 楼

这几天版上的祝福帖非常的多，大家也都给了最真挚的祝福。可是转天再看版面的时候
，却找不到前一天的帖子了，估计是了楼主径自删除了帖子，没有更新update.相信版
上有很多人都和我一样希望看到结果。希望发了祝福帖的朋友们都能够写出爸妈的签经
，收到祝福后不应该消失，不是吗？！同意的朋友顶一下。
另外建议版主将这个作为条例吧，凡是发祝福帖的都要发签经！

l*d2010-08-26 07:08

2 楼

h*n2010-08-26 07:08

3 楼

最近在研究一个很大的蛋白，有2500个氨基酸。我在这个蛋白的N端加了个FLag。筛了
稳定表达细胞系，用FLAG抗体检测不到蛋白的表达，但我用这个蛋白本身的抗体可以检
测到很强的信号。我以为FLAG序列没有表达，然后就做了FLAG IP，接着用蛋白本身的
抗体看看FLag能否沉下蛋白，结果发现FLAG能能沉下蛋白，比INPUT多。因为实验需要
，只能用1xFLAG,而不能用3XFLAG.FLAG抗体做IP比western灵敏吗？为什么我的western
检测不到？

e*52010-08-26 07:08

4 楼

A*e2010-08-26 07:08

5 楼

嗷嗷嗷嗷呜

【在 l*******d 的大作中提到】

s*s2010-08-26 07:08

6 楼

有一个问题
IP出来的怎么会比input多呢？
你input control是10% input还是所有的啊？

G*J2010-08-26 07:08

7 楼

c*t2010-08-26 07:08

8 楼

赞，等

【在 l*******d 的大作中提到】

h*n2010-08-26 07:08

9 楼

1/50

【在 s*********s 的大作中提到】

: 有一个问题
: IP出来的怎么会比input多呢？
: 你input control是10% input还是所有的啊？

G*i2010-08-26 07:08

10 楼

同意
否则这个版都成了祝福版了

【在 G**J 的大作中提到】

: 这几天版上的祝福帖非常的多，大家也都给了最真挚的祝福。可是转天再看版面的时候
: ，却找不到前一天的帖子了，估计是了楼主径自删除了帖子，没有更新update.相信版
: 上有很多人都和我一样希望看到结果。希望发了祝福帖的朋友们都能够写出爸妈的签经
: ，收到祝福后不应该消失，不是吗？！同意的朋友顶一下。
: 另外建议版主将这个作为条例吧，凡是发祝福帖的都要发签经！

m*e2010-08-26 07:08

11 楼

有些事情注定要跟随我们一生，
并不时时想起，却没有一刻忘记。
LZ不必不安，
其实一直是亲人的爱与祝福在与你作伴。
想到姐姐温暖的怀抱与含笑的眼睛，
你也应该回报她一个放松的，舒展的，熟悉的微笑；
告诉她你也爱她。

s*s2010-08-26 07:08

12 楼

所以，IP比1/50 input多是正常的
你前面的结果，对于stable cell line
用蛋白本身的抗体做western，ectopic expression的stable cell line比control
cell line高多少？
我有一个hypothesis,需要你更多的information才能判断.

western

【在 h*****n 的大作中提到】

: 最近在研究一个很大的蛋白，有2500个氨基酸。我在这个蛋白的N端加了个FLag。筛了
: 稳定表达细胞系，用FLAG抗体检测不到蛋白的表达，但我用这个蛋白本身的抗体可以检
: 测到很强的信号。我以为FLAG序列没有表达，然后就做了FLAG IP，接着用蛋白本身的
: 抗体看看FLag能否沉下蛋白，结果发现FLAG能能沉下蛋白，比INPUT多。因为实验需要
: ，只能用1xFLAG,而不能用3XFLAG.FLAG抗体做IP比western灵敏吗？为什么我的western
: 检测不到？

w*e2010-08-26 07:08

13 楼

UP!

l*d2010-08-26 07:08

14 楼

谢谢五月村。20多年过去了，我已经学会了理性地看待发生的一切，对于我姐姐是天国里俯视大地的那双眼睛，我只需要踏踏实实安安心心地工作和生活，照顾好自己和家人，我想我微笑的时候她也一定在开心微笑。谨此祝愿天下有情人，爱你的和你爱的人，都过得开心，健康和快乐。

【在 m********e 的大作中提到】

: 有些事情注定要跟随我们一生，
: 并不时时想起，却没有一刻忘记。
: LZ不必不安，
: 其实一直是亲人的爱与祝福在与你作伴。
: 想到姐姐温暖的怀抱与含笑的眼睛，
: 你也应该回报她一个放松的，舒展的，熟悉的微笑；
: 告诉她你也爱她。

t*y2010-08-26 07:08

15 楼

增加抗体浓度。譬如原先1：1000稀释，现在1：200稀释，估计可以看到。我也碰到类
似的情况。

G*i2010-08-26 07:08

16 楼

UP again!

【在 G**J 的大作中提到】

s*l2010-08-26 07:08

17 楼

我觉得是1*tag的问题，用3*tag应该好些，我表达一个1*HA tag的蛋白作stable line
，筛选的时候用HA的抗体根本没信号，用该蛋白的抗体可以看到比endogenous强的
shift band

western

【在 h*****n 的大作中提到】

h*n2010-08-26 07:08

18 楼

高很多，甚至一度觉得表达太高了。

【在 s*********s 的大作中提到】

: 所以，IP比1/50 input多是正常的
: 你前面的结果，对于stable cell line
: 用蛋白本身的抗体做western，ectopic expression的stable cell line比control
: cell line高多少？
: 我有一个hypothesis,需要你更多的information才能判断.
:
: western