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关于in vivo knock down的策略

关于in vivo knock down的策略# Biology - 生物学

o*e2010-09-11 07:09

1 楼

【以下文字转载自 Working 讨论区】
发信人: onlyblue (棉毛裤), 信区: Working
标题: H1b 兼职问题
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Jul 20 18:53:29 2013, 美东)
上网搜了一下，大约有些了解，但还是不是很确定。
我的情况是：目前OPT在学校工作，H1b申请中，应该比较快。
国内有个企业想找我做兼职代表。
这种情况需要办concurrent H1b吗？
如果公司给学校钱，是不是可以用subcontractor的办法避开法律问题？
法律上，兼职会不会对我学校的工作有影响，比如说工作时间上有限制？
万分感谢。

x*n2010-09-11 07:09

2 楼

情人节到了，贴首最近录的《月亮河》给大伙助个兴，呵呵
原发于Music版
Moon river
Johnny Mercer (lyrics) and Henry Mancini (music)
Moon river, wider than a mile
I'm crossing you in style some day
Oh, dream maker, you heart breaker
Wherever you're goin', I'm goin' your way
Two drifters, off to see the world
There's such a lot of world to see
We're after the same rainbow's end, waitin' 'round the bend
My huckleberry friend, moon river, and me
(moon river, wider than a mile)
(I'm crossin' you in style some day)
Oh, dream maker, you

d*s2010-09-11 07:09

3 楼

买了个roku3，最便宜的那一个型号
装了网星电视台，发现它不能连续播放剧集。
每次一次播放完就得跳出从头一层一层进入菜单。
有高人知道是啥原因不？
我另一个朋友家却能连续播放。。。

T*r2010-09-11 07:09

4 楼

设计以adenovirus为载体，以CMV为promoter,drive mCherry和shRNAmir,shRNAmir从
openbiosystem pGIPz上PCR下来，连接到载体上，即pAd/CMV/mcherry-linker-
shRNAmir,
计划用adenovirus侵染免疫缺陷的rag1-/-animal,不知道这样设计合理吗？
另外可以直接用以lentivirus为载体的shRNAmir做in vivo的knock down吗？
多谢了！

j*o2010-09-11 07:09

5 楼

H1B不可以兼职，如果有兼职，需说明你的专业和工作相关，而且新雇主也要给申请
concurrent H1b。但是今年的名额已满，只能等明年4月一号。如果是给学校工作
，H1B名额不受配额限制。

b*e2010-09-11 07:09

6 楼

roku3还有好几个型号？

【在 d*******s 的大作中提到】

: 买了个roku3，最便宜的那一个型号
: 装了网星电视台，发现它不能连续播放剧集。
: 每次一次播放完就得跳出从头一层一层进入菜单。
: 有高人知道是啥原因不？
: 我另一个朋友家却能连续播放。。。

T*r2010-09-11 07:09

7 楼

自己顶一下

【在 T**********r 的大作中提到】

: 设计以adenovirus为载体，以CMV为promoter,drive mCherry和shRNAmir,shRNAmir从
: openbiosystem pGIPz上PCR下来，连接到载体上，即pAd/CMV/mcherry-linker-
: shRNAmir,
: 计划用adenovirus侵染免疫缺陷的rag1-/-animal,不知道这样设计合理吗？
: 另外可以直接用以lentivirus为载体的shRNAmir做in vivo的knock down吗？
: 多谢了！

o*e2010-09-11 07:09

8 楼

多谢回复！
我这种情况通过subcontract的方式可以吗，在工作时限上有没有限制？

【在 j*****o 的大作中提到】

: H1B不可以兼职，如果有兼职，需说明你的专业和工作相关，而且新雇主也要给申请
: concurrent H1b。但是今年的名额已满，只能等明年4月一号。如果是给学校工作
: ，H1B名额不受配额限制。

t*b2010-09-11 07:09

9 楼

回到最上层其实是程序crash了。
到目前为止一共三个人报告过这种情况，一个人发现是router的固件引起的问题，另两
个不明。
和机顶盒应该无关，你可以把自己的拿到朋友家里试试。我估计只有在你家的网络能重
现这个问题。
因为我这里不能重现，所以修复起来很麻烦，如果你有时间，或者其他有类似问题问题
的人有时间的话，我可以给你个调试版本抓取一些日志信息。

w*e2010-09-11 07:09

10 楼

adenovirus 侵染做liver gene knockdown 比较容易.其他tissue 难点.你的基因是在
liver里面么?

w*f2010-09-11 07:09

11 楼

我这里也有同样的问题。每次从新进入看下一集非常麻烦。天线宝宝你认为是router的
问题还是我家网络的问题？我晚上10点以后有时间，请问要怎么修复呢？

t*82010-09-11 07:09

12 楼

我用过lenti和AAV，在neuron里面可以阿。

t*b2010-09-11 07:09

13 楼

你给我私信一下你的邮件或者email s*****[email protected],我把测试程序和说明
email你。

【在 w**f 的大作中提到】

: 我这里也有同样的问题。每次从新进入看下一集非常麻烦。天线宝宝你认为是router的
: 问题还是我家网络的问题？我晚上10点以后有时间，请问要怎么修复呢？

w*e2010-09-11 07:09

14 楼

哦. 我说难点主要是injection方法比较麻烦.楼主说in vivo knock down,我觉得他是
要用小鼠做.做neuron knock down,你是往小鼠脑子里面打病毒么?需要cannula把.如果
gene 在liver里面,tail vein 注射就可以了,相对而言是最容易的.

d*s2010-09-11 07:09

15 楼

嗯谢谢回复。
嘿嘿，好啊好啊。
我也私信给你吧。

【在 t**b 的大作中提到】

: 回到最上层其实是程序crash了。
: 到目前为止一共三个人报告过这种情况，一个人发现是router的固件引起的问题，另两
: 个不明。
: 和机顶盒应该无关，你可以把自己的拿到朋友家里试试。我估计只有在你家的网络能重
: 现这个问题。
: 因为我这里不能重现，所以修复起来很麻烦，如果你有时间，或者其他有类似问题问题
: 的人有时间的话，我可以给你个调试版本抓取一些日志信息。

T*r2010-09-11 07:09

16 楼

我是往pancreas里注射，让adenovirus侵染pancreas，并且在pancreas里表达，这个技
术问题已
经解决了。我是想知道pAd/CMV/mCherry-linker-shRNAmir这样的设计是否合理。
linker是
polycistronic的2A。多谢答复。

【在 w***e 的大作中提到】

: 哦. 我说难点主要是injection方法比较麻烦.楼主说in vivo knock down,我觉得他是
: 要用小鼠做.做neuron knock down,你是往小鼠脑子里面打病毒么?需要cannula把.如果
: gene 在liver里面,tail vein 注射就可以了,相对而言是最容易的.

b*82010-09-11 07:09

17 楼

我也有同样问题。不过我看片不多，晚上一般就看一两集，从头再选也无所谓，也就懒
的管了。

f*b2010-09-11 07:09

18 楼

不合理。shRNA 需要RNA h1 or R6 promoter.

d*s2010-09-11 07:09

19 楼

感谢roku的support人员。
最后还是通过更换路由器解决了问题。：）

a*d2010-09-11 07:09

20 楼

楼上正解，你需要dual promoter vector. CMV drives mCherry and H1 drives shRNA
expression separately

h*n2010-09-11 07:09

21 楼

能否透露你换成哪款路由器啦？我这里也是同样的问题！
谢谢！

【在 d*******s 的大作中提到】

: 感谢roku的support人员。
: 最后还是通过更换路由器解决了问题。：）

T*r2010-09-11 07:09

22 楼

多谢回复，这个正是我考虑的一点，但我这样设计的依据有两个：
1.CMV promoter可以drive shRNAmir的表达，见图1,干扰效果，CMV与H1和U6效果一样
。文章为
2005年nature genetics的Second-generation shRNA libraries covering the mouse
and human genomes.
2.Openbiosystem shRNAmir的设计采用相似的策略。CMV/tuboGFP/IRES/puro
R/shRNAmir,也是一个CMV promoter驱动两个蛋白和一个shRNAmir同时表达。见图2。

【在 f****b 的大作中提到】

: 不合理。shRNA 需要RNA h1 or R6 promoter.

t*b2010-09-11 07:09

23 楼

我给你发了信和测试程序，有空把log给我一下。

【在 h******n 的大作中提到】

: 能否透露你换成哪款路由器啦？我这里也是同样的问题！
: 谢谢！

f*b2010-09-11 07:09

24 楼

"The openbiosystems lentiviral vector includes a tetracycline inducible
promoter that produces tightly regulatable RNAi."
虽然我没有细看，但显然不是CMV那么简单的事情。你自己的实验，你自己要看清楚。

h*n2010-09-11 07:09

25 楼

收到啦，我试一下！

【在 t**b 的大作中提到】

: 我给你发了信和测试程序，有空把log给我一下。

T*r2010-09-11 07:09

26 楼

inducible
多谢提醒，不过你提到这个是openbiosystem的另外一个系统TRIPZ，的确是用
tetracyline
induce的。
Open biosystem有两种shRNAmir系统实现knock down:
a.Stable knockdown: GIPZ；shRNAmir is constitutively expressed as a
polycistronicvector that codes for tGFP, puromycin resistance
marker (Puror) and the shRNAmir.
b.Regulated knockdown: pTRIPZ,也是你提到的。
见链接
http://www.openbiosystems.com/collateral/rnai/pi/Lentiviral%20shRNAmir%2
0for%20Stable%20and%20Regulatable%20RNAi.pdf
再次真诚感谢，有了质疑，才能避免将来实验走弯路。

【在 f****b 的大作中提到】

: "The openbiosystems lentiviral vector includes a tetracycline inducible
: promoter that produces tightly regulatable RNAi."
: 虽然我没有细看，但显然不是CMV那么简单的事情。你自己的实验，你自己要看清楚。

p*y2010-09-11 07:09

27 楼

我是往pancreas里注射，让adenovirus侵染pancreas，并且在pancreas里表达，这个技
术问题已经解决了
能讲讲这个技术吗？把老鼠打开来直接注射？

T*r2010-09-11 07:09

28 楼

是啊，是个surgery,麻醉后进行。