Licor Odessey是不是灵敏度差一点?# Biology - 生物学d*n2010-11-14 08:111 楼在中国有驾照,来美国想开车的话,需要在中国办理英文公证或者来美国的DPS办理什么手续吗?我在Texas,父母想来过年,他们自己不能开车的话很不方便……谢谢~
Y*u2010-11-14 08:112 楼☆─────────────────────────────────────☆runsun (runsun) 于 (Tue Aug 17 11:50:07 2010, 美东) 提到:写的很粗浅的一篇文章,但是已经讲到了一些关键点。
d*z2010-11-14 08:113 楼【 以下文字转载自 PDA 讨论区 】发信人: dreamz (帐号出租), 信区: PDA标 题: 怎么样,这个键盘够骚吧!发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jul 25 20:38:17 2011, 美东)CUBE LASER VIRTUAL KEYBOARD$169LASER投影到任何平面上,全键盘,蓝牙连接IPHONE,IPAD,TABLET,LAPTOP
s*r2010-11-14 08:114 楼同样的sample,同样的actin抗体,follow它的protocol,ECL 1 min 有很清楚的带,Odyssey扫出来的看不见,加强intensity也只有很淡的条带,大家有什么经验,Odyssey能达到普通ECL的灵敏度吗?
s*d2010-11-14 08:115 楼查你们州的dmv怎么规定的啊每个州情况都不同【在 d*****n 的大作中提到】: 在中国有驾照,来美国想开车的话,需要在中国办理英文公证或者来美国的DPS办理什: 么手续吗?我在Texas,父母想来过年,他们自己不能开车的话很不方便……谢谢~
T*x2010-11-14 08:116 楼iphone可以接蓝牙键盘?【在 d****z 的大作中提到】: 【 以下文字转载自 PDA 讨论区 】: 发信人: dreamz (帐号出租), 信区: PDA: 标 题: 怎么样,这个键盘够骚吧!: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jul 25 20:38:17 2011, 美东): CUBE LASER VIRTUAL KEYBOARD: $169: LASER投影到任何平面上,全键盘,蓝牙连接IPHONE,IPAD,TABLET,LAPTOP
I*y2010-11-14 08:117 楼ECL用的二抗有HRP酶,而Odyssey用的二抗是有荧光的。这个灵敏度应该是有差异的,不过我不确定Odyssey的灵敏度是否差一些带,【在 s******r 的大作中提到】: 同样的sample,同样的actin抗体,follow它的protocol,: ECL 1 min 有很清楚的带,Odyssey扫出来的看不见,加强intensity也只有很淡的条带,: 大家有什么经验,Odyssey能达到普通ECL的灵敏度吗?
c*72010-11-14 08:118 楼我姐姐去加州玩,用中国驾照没问题,租车都可以。不知别的州行不行。【在 d*****n 的大作中提到】: 在中国有驾照,来美国想开车的话,需要在中国办理英文公证或者来美国的DPS办理什: 么手续吗?我在Texas,父母想来过年,他们自己不能开车的话很不方便……谢谢~
r*y2010-11-14 08:119 楼这个连击单键估计有问题,得抬足够高【在 d****z 的大作中提到】: 【 以下文字转载自 PDA 讨论区 】: 发信人: dreamz (帐号出租), 信区: PDA: 标 题: 怎么样,这个键盘够骚吧!: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jul 25 20:38:17 2011, 美东): CUBE LASER VIRTUAL KEYBOARD: $169: LASER投影到任何平面上,全键盘,蓝牙连接IPHONE,IPAD,TABLET,LAPTOP
f*r2010-11-14 08:1110 楼为了能一次就找出问题,请提供以下信息:1)二抗的厂家和cat. #2)odyssey扫描参数3)扫描所得图像,一共三个图(波长700黑白,波长800黑白,两个波长混合彩色)
p*o2010-11-14 08:1112 楼pros: 1.看起来酷;2.便携cons: 1.没有确认感;2.仍无法盲打。结论:适合纯装13人士使用。【在 d****z 的大作中提到】: 【 以下文字转载自 PDA 讨论区 】: 发信人: dreamz (帐号出租), 信区: PDA: 标 题: 怎么样,这个键盘够骚吧!: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jul 25 20:38:17 2011, 美东): CUBE LASER VIRTUAL KEYBOARD: $169: LASER投影到任何平面上,全键盘,蓝牙连接IPHONE,IPAD,TABLET,LAPTOP
s*y2010-11-14 08:1113 楼正常。其实就是因为显示的方式问题,把对比调一下就好了带,【在 s******r 的大作中提到】: 同样的sample,同样的actin抗体,follow它的protocol,: ECL 1 min 有很清楚的带,Odyssey扫出来的看不见,加强intensity也只有很淡的条带,: 大家有什么经验,Odyssey能达到普通ECL的灵敏度吗?
c*h2010-11-14 08:1115 楼加上按键音就有确认感了吧。【在 p**o 的大作中提到】: pros: 1.看起来酷;2.便携: cons: 1.没有确认感;2.仍无法盲打。: 结论:适合纯装13人士使用。
s*r2010-11-14 08:1116 楼多谢你能抽空指点,我block用的是5% milk in 1xTBST,2抗之前步骤都相同,同一张膜剪两半。2抗也是5% milk,1xTBST, 室温1hr,TBST洗完了后,PBS洗两边,膜完全晾干后scan.1), 2Ab是Licor自己的IRDye 800CW Goat anti-Mouse,#926-322101:5000 in 5% milk.2), 双色彩图700 intensity 2.5, 800 intensity 5.800单独扫描参数是 intensity 7.5.sensitivity都用的缺省值5。3), 上了四个图,ECL扫描的图,彩图包括700和800 channel,参数如上,800单色图,参数如上,800灰度图,从800单色图export,没有压缩。主要比较第一条lane。因为只用了一种一抗,所以700灰度图应该没什么用。麻烦帮着诊断诊断。【在 f*********r 的大作中提到】: 为了能一次就找出问题,请提供以下信息:: 1)二抗的厂家和cat. #: 2)odyssey扫描参数: 3)扫描所得图像,一共三个图(波长700黑白,波长800黑白,两个波长混合彩色)
s*r2010-11-14 08:1118 楼你觉得ECL和Odyssey比哪个更灵敏一些?我知道这里可能有带,所以还能调来调去看能不能出来,如果是不知道的话,可能就会当做没有带了。正常。其实就是因为显示的方式问题,把对比调一下就好了带,【在 s******y 的大作中提到】: 正常。: 其实就是因为显示的方式问题,把对比调一下就好了: : 带,
s*o2010-11-14 08:1120 楼我一直用Licor,我的经验是他的灵敏度要比ecl高。我增经用过低于5ug的total protein上样,actin的结果也还是非常好。要trouble shooting别人的问题,总是比较难。根据你的介绍,我不知道blocking buffer是不是问题,在licor的manual里,他有专门的blocking buffer的配方的,我一直用那个,配完后分装冻起来。用milk和BSA据说都会减弱或者产生比较强的background。我们旁边的实验室也有人用milk,但他们2抗用的浓度要大,1;2000。我一般用1:10000。还有一个问题就是,不知道你的2抗是不是长期放在4度,时间太长会显著的降低他的灵敏度的。分装,放在4度尽量在1-2月内用完,最好。别的,我也不知道了,你先试试,回头UPDATE一下进展。
f*r2010-11-14 08:1124 楼actin,我的理解是表达极强的蛋白。基本可以看作是housekeeping,做loadingcontrol。所以应该是极强,至少也是很强。在默认设置下,应该是强信号,甚至是过饱和。这种背景还算低,但actin信号几乎没有的情况,说明western本身有问题。如果其他步骤没有出差错的话,最大问题就是二抗-milk组合出了问题。odyssey是不推荐使用奶粉的。就是因为它太灵敏,牛奶甚至普通bsa的背景太高。因为很多公司这么做,所以我怀疑licor也可能会这样。licor一向推荐自己出的二抗和blocking buffer。尤其是后者,比牛奶和bsa都贵很多,是他们公司主打消耗品之一。他们非常不愿意见到客户用廉价的奶粉。别家出的二抗他管不了,但是自家的二抗,很可能有什么技术,保证它与奶粉和普通bsa不兼容。下面有两个选项可以尝试一下。1)改用licor专用blocking buffer试一下。2)改用别家二抗试一下。(rockland, invitrogen等公司都有比较成熟的红外荧光二抗)。2个选项交叉试一下,一共4种条件(含原先二抗-奶粉组合)。有了这四种对比,就可以明确到底是二抗问题,还是奶粉问题,还是两者都有问题。
f*r2010-11-14 08:1126 楼我也觉得不用晾干。当然,晾干也可以。湿的条件,尤其是在扫描平面上加上一些水,然后放上膜,就有了类似全反射的效果,就像显微镜油镜。在信号比较弱的情况下,湿比干效果好。【在 s**********o 的大作中提到】: 还有一个,你的膜为何要晾干??
s*y2010-11-14 08:1128 楼你的那种绿色的膜背景很高啊,不知道你用的是不是Nitrocellulose?如果你不小心用错了PVDF,会导致背景非常高!另外,最好不要用牛奶。我的经验是,要么就用牛奶里面提纯的那个casein,那么就乖乖的用Licor 产的blocking buffer。直接用牛奶的话也很容易导致背景很高。在我的经验里,Licor Odessey 的灵敏度比Femto kit稍微低一点点,但是绝对比普通的ECL强的多【在 s******r 的大作中提到】: 多谢你能抽空指点,: 我block用的是5% milk in 1xTBST,: 2抗之前步骤都相同,同一张膜剪两半。: 2抗也是5% milk,1xTBST, 室温1hr,: TBST洗完了后,PBS洗两边,膜完全晾干后scan.: 1), 2Ab是Licor自己的IRDye 800CW Goat anti-Mouse,#926-32210: 1:5000 in 5% milk.: 2), 双色彩图700 intensity 2.5, 800 intensity 5.: 800单独扫描参数是 intensity 7.5.: sensitivity都用的缺省值5。
s*o2010-11-14 08:1130 楼其实从sigma买东西自己配的话,也很便宜【在 f*********r 的大作中提到】: actin,我的理解是表达极强的蛋白。基本可以看作是housekeeping,做loading: control。所以应该是极强,至少也是很强。在默认设置下,应该是强信号,甚至是过: 饱和。这种背景还算低,但actin信号几乎没有的情况,说明western本身有问题。: 如果其他步骤没有出差错的话,最大问题就是二抗-milk组合出了问题。: odyssey是不推荐使用奶粉的。就是因为它太灵敏,牛奶甚至普通bsa的背景太高。: 因为很多公司这么做,所以我怀疑licor也可能会这样。licor一向推荐自己出的二抗和: blocking buffer。尤其是后者,比牛奶和bsa都贵很多,是他们公司主打消耗品之一。: 他们非常不愿意见到客户用廉价的奶粉。别家出的二抗他管不了,但是自家的二抗,很: 可能有什么技术,保证它与奶粉和普通bsa不兼容。: 下面有两个选项可以尝试一下。
s*o2010-11-14 08:1132 楼PVDF还好吧,我就是用这个【在 s******y 的大作中提到】: 你的那种绿色的膜背景很高啊,不知道你用的是不是Nitrocellulose?: 如果你不小心用错了PVDF,会导致背景非常高!: 另外,最好不要用牛奶。我的经验是,要么就用牛奶里面提纯的那个casein,: 那么就乖乖的用Licor 产的blocking buffer。直接用牛奶的话也很容易导致: 背景很高。: 在我的经验里,Licor Odessey 的灵敏度比Femto kit稍微低一点点,但是: 绝对比普通的ECL强的多
s*r2010-11-14 08:1134 楼谢谢,有空我再试一下,二抗跟别人借的,也可能有点问题。我一直用Licor,我的经验是他的灵敏度要比ecl高。我增经用过低于5ug的total protein上样,actin的结果也还是非常好。要trouble shooting别人的问题,总是比较难。根据你的介绍,我不知道blocking buffer是不是问题,在licor的manual里,他有专门的blocking buffer的配方的,我一直用那个,配完后分装冻起来。用milk和BSA据说都会减弱或者产生比较强的background。我们旁边的实验室也有人用milk,但他们2抗用的浓度要大,1;2000。我一般用1:10000。还有一个问题就是,不知道你的2抗是不是长期放在4度,时间太长会显著的降低他的灵敏度的。分装,放在4度尽量在1-2月内用完,最好。别的,我也不知道了,你先试试,回头UPDATE一下进展。【在 s**********o 的大作中提到】: 我一直用Licor,我的经验是他的灵敏度要比ecl高。: 我增经用过低于5ug的total protein上样,actin的结果也还是非常好。: 要trouble shooting别人的问题,总是比较难。根据你的介绍,: 我不知道blocking buffer是不是问题,在licor的manual里,: 他有专门的blocking buffer的配方的,我一直用那个,配完后分装冻起来。: 用milk和BSA据说都会减弱或者产生比较强的background。我们旁边的实验室: 也有人用milk,但他们2抗用的浓度要大,1;2000。我一般用1:10000。: 还有一个问题就是,不知道你的2抗是不是长期放在4度,时间太长会显著的降低他的灵: 敏度的。: 分装,放在4度尽量在1-2月内用完,最好。
s*r2010-11-14 08:1138 楼这个sample本身就比较稀,第一条lane已经是1:5稀释,后面是1:25, 1:125稀释。所以western 本身的问题应该不大,主要是想看看在我手里ECL和Odyssey哪个好使,可能二抗和blocking buffer都不够好,所以我这个看起来Odyssey比普通ECL要弱上几倍。actin,我的理解是表达极强的蛋白。基本可以看作是housekeeping,做loadingcontrol。所以应该是极强,至少也是很强。在默认设置下,应该是强信号,甚至是过饱和。这种背景还算低,但actin信号几乎没有的情况,说明western本身有问题。如果其他步骤没有出差错的话,最大问题就是二抗-milk组合出了问题。odyssey是不推荐使用奶粉的。就是因为它太灵敏,牛奶甚至普通bsa的背景太高。因为很多公司这么做,所以我怀疑licor也可能会这样。licor一向推荐自己出的二抗和blocking buffer。尤其是后者,比牛奶和bsa都贵很多,是他们公司主打消耗品之一。他们非常不愿意见到客户用廉价的奶粉。别家出的二抗他管不了,但是自家的二抗,很可能有什么技术,保证它与奶粉和普通bsa不兼容。下面有两个选项可以尝试一下。1)改用licor专用blocking buffer试一下。2)改用别家二抗试一下。(rockland, invitrogen等公司都有比较成熟的红外荧光二抗)。2个选项交叉试一下,一共4种条件(含原先二抗-奶粉组合)。有了这四种对比,就可以明确到底是二抗问题,还是奶粉问题,还是两者都有问题。【在 f*********r 的大作中提到】: actin,我的理解是表达极强的蛋白。基本可以看作是housekeeping,做loading: control。所以应该是极强,至少也是很强。在默认设置下,应该是强信号,甚至是过: 饱和。这种背景还算低,但actin信号几乎没有的情况,说明western本身有问题。: 如果其他步骤没有出差错的话,最大问题就是二抗-milk组合出了问题。: odyssey是不推荐使用奶粉的。就是因为它太灵敏,牛奶甚至普通bsa的背景太高。: 因为很多公司这么做,所以我怀疑licor也可能会这样。licor一向推荐自己出的二抗和: blocking buffer。尤其是后者,比牛奶和bsa都贵很多,是他们公司主打消耗品之一。: 他们非常不愿意见到客户用廉价的奶粉。别家出的二抗他管不了,但是自家的二抗,很: 可能有什么技术,保证它与奶粉和普通bsa不兼容。: 下面有两个选项可以尝试一下。
C*R2010-11-14 08:1139 楼扯淡的product,没有触感,怎么盲打?【在 d****z 的大作中提到】: 【 以下文字转载自 PDA 讨论区 】: 发信人: dreamz (帐号出租), 信区: PDA: 标 题: 怎么样,这个键盘够骚吧!: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jul 25 20:38:17 2011, 美东): CUBE LASER VIRTUAL KEYBOARD: $169: LASER投影到任何平面上,全键盘,蓝牙连接IPHONE,IPAD,TABLET,LAPTOP
s*r2010-11-14 08:1140 楼是PVDF,millipore non-fluoscence的,用intensity 7.5,背景已经很高了,anyway,想省钱大概是不行了。你的那种绿色的膜背景很高啊,不知道你用的是不是Nitrocellulose?如果你不小心用错了PVDF,会导致背景非常高!另外,最好不要用牛奶。我的经验是,要么就用牛奶里面提纯的那个casein,那么就乖乖的用Licor 产的blocking buffer。直接用牛奶的话也很容易导致背景很高。在我的经验里,Licor Odessey 的灵敏度比Femto kit稍微低一点点,但是绝对比普通的ECL强的多【在 s******y 的大作中提到】: 你的那种绿色的膜背景很高啊,不知道你用的是不是Nitrocellulose?: 如果你不小心用错了PVDF,会导致背景非常高!: 另外,最好不要用牛奶。我的经验是,要么就用牛奶里面提纯的那个casein,: 那么就乖乖的用Licor 产的blocking buffer。直接用牛奶的话也很容易导致: 背景很高。: 在我的经验里,Licor Odessey 的灵敏度比Femto kit稍微低一点点,但是: 绝对比普通的ECL强的多
d*z2010-11-14 08:1141 楼【 以下文字转载自 PDA 讨论区 】发信人: dreamz (帐号出租), 信区: PDA标 题: 怎么样,这个键盘够骚吧!发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jul 25 20:38:17 2011, 美东)CUBE LASER VIRTUAL KEYBOARD$169LASER投影到任何平面上,全键盘,蓝牙连接IPHONE,IPAD,TABLET,LAPTOP
f*r2010-11-14 08:1142 楼你的结论有两点不确切。第一,背景并非很强。我以前专门发贴阐述过这个问题。你的那张膜是个很典型的例子。http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31358315.html请注意该贴第二页的跟贴。有些具体的图例讲解图像调节问题。第二,费用方面。硬件上,建造暗室、购买和安装设备的费用不比licor节省。耗材上,底片、显影药都不便宜,而且还有回收废液的费用。【在 s******r 的大作中提到】: 是PVDF,millipore non-fluoscence的,用intensity 7.5,背景已经很高了,: anyway,想省钱大概是不行了。: : 你的那种绿色的膜背景很高啊,不知道你用的是不是Nitrocellulose?: 如果你不小心用错了PVDF,会导致背景非常高!: 另外,最好不要用牛奶。我的经验是,要么就用牛奶里面提纯的那个casein,: 那么就乖乖的用Licor 产的blocking buffer。直接用牛奶的话也很容易导致: 背景很高。: 在我的经验里,Licor Odessey 的灵敏度比Femto kit稍微低一点点,但是: 绝对比普通的ECL强的多
T*x2010-11-14 08:1143 楼iphone可以接蓝牙键盘?【在 d****z 的大作中提到】: 【 以下文字转载自 PDA 讨论区 】: 发信人: dreamz (帐号出租), 信区: PDA: 标 题: 怎么样,这个键盘够骚吧!: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jul 25 20:38:17 2011, 美东): CUBE LASER VIRTUAL KEYBOARD: $169: LASER投影到任何平面上,全键盘,蓝牙连接IPHONE,IPAD,TABLET,LAPTOP
r*y2010-11-14 08:1145 楼这个连击单键估计有问题,得抬足够高【在 d****z 的大作中提到】: 【 以下文字转载自 PDA 讨论区 】: 发信人: dreamz (帐号出租), 信区: PDA: 标 题: 怎么样,这个键盘够骚吧!: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jul 25 20:38:17 2011, 美东): CUBE LASER VIRTUAL KEYBOARD: $169: LASER投影到任何平面上,全键盘,蓝牙连接IPHONE,IPAD,TABLET,LAPTOP
m*52010-11-14 08:1146 楼同发现PVDF绿色背景很高,得用红色怎么解决?我有一个蛋白用Nitrocellulose做不出来【在 s******y 的大作中提到】: 你的那种绿色的膜背景很高啊,不知道你用的是不是Nitrocellulose?: 如果你不小心用错了PVDF,会导致背景非常高!: 另外,最好不要用牛奶。我的经验是,要么就用牛奶里面提纯的那个casein,: 那么就乖乖的用Licor 产的blocking buffer。直接用牛奶的话也很容易导致: 背景很高。: 在我的经验里,Licor Odessey 的灵敏度比Femto kit稍微低一点点,但是: 绝对比普通的ECL强的多
p*o2010-11-14 08:1147 楼pros: 1.看起来酷;2.便携cons: 1.没有确认感;2.仍无法盲打。结论:适合纯装13人士使用。【在 d****z 的大作中提到】: 【 以下文字转载自 PDA 讨论区 】: 发信人: dreamz (帐号出租), 信区: PDA: 标 题: 怎么样,这个键盘够骚吧!: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jul 25 20:38:17 2011, 美东): CUBE LASER VIRTUAL KEYBOARD: $169: LASER投影到任何平面上,全键盘,蓝牙连接IPHONE,IPAD,TABLET,LAPTOP
c*h2010-11-14 08:1149 楼加上按键音就有确认感了吧。【在 p**o 的大作中提到】: pros: 1.看起来酷;2.便携: cons: 1.没有确认感;2.仍无法盲打。: 结论:适合纯装13人士使用。
r*m2010-11-14 08:1156 楼我个人的经验是LICOR的灵敏度介于ECL pico和femto之间,很弱的signal用LICOR看很吃力,因为背景还是太高了,不像ECL,只要操作得好背景应该为0。不过我觉得LICOR最要命的是二抗的specificity问题,IP下来的sample用不同species的二抗竟然能看到很强的IgG,这个让我直接怀疑用它同时做两个primary的specificity可靠性。。。事实上我也确实遇到过一个channel的signal透到另一个channel的情况,不过不知道是荧光的bleed through还是二抗的cross-reactivity?
d*e2010-11-14 08:1158 楼我一直在用Licor Odessey,觉得Licor Odessey 的灵敏度非常的高。用的是它家的二抗,稀释到1:10000都能得到很好的信号。我一直用5%的脱脂奶粉block, 有时候背景比较强,但总体上好过得去。哪位好人能提供一下Licor Odessey自家的blockingbuffer 的配方,老板不同意买这个blocking buffer.带,【在 s******r 的大作中提到】: 同样的sample,同样的actin抗体,follow它的protocol,: ECL 1 min 有很清楚的带,Odyssey扫出来的看不见,加强intensity也只有很淡的条带,: 大家有什么经验,Odyssey能达到普通ECL的灵敏度吗?
g*52010-11-14 08:1162 楼用了4年licor了。感觉比ecl灵敏。如果用pdvf (我一般只用nc),二抗中加点sds可以降低背景 。actin不出来,原因应该是二抗问题。还有,我从来不干膜,总是湿扫。他家有专门的strip buffer,管用。1:5,但是我用1:10,室温20分钟,4度两小时。tbst洗4遍,可以直接用别的一抗。有时候tubulin去不干净。【在 s******y 的大作中提到】: 你的那种绿色的膜背景很高啊,不知道你用的是不是Nitrocellulose?: 如果你不小心用错了PVDF,会导致背景非常高!: 另外,最好不要用牛奶。我的经验是,要么就用牛奶里面提纯的那个casein,: 那么就乖乖的用Licor 产的blocking buffer。直接用牛奶的话也很容易导致: 背景很高。: 在我的经验里,Licor Odessey 的灵敏度比Femto kit稍微低一点点,但是: 绝对比普通的ECL强的多
C*R2010-11-14 08:1168 楼扯淡的product,没有触感,怎么盲打?【在 d****z 的大作中提到】: 【 以下文字转载自 PDA 讨论区 】: 发信人: dreamz (帐号出租), 信区: PDA: 标 题: 怎么样,这个键盘够骚吧!: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon Jul 25 20:38:17 2011, 美东): CUBE LASER VIRTUAL KEYBOARD: $169: LASER投影到任何平面上,全键盘,蓝牙连接IPHONE,IPAD,TABLET,LAPTOP