inducible knockout:tamoxifen还是4OH-tamoxifen?# Biology - 生物学Z*e2011-01-16 08:011 楼有人知道怎么找带图片的教程吗 找了一下 好复杂 怕拆了安不会去多谢包子管饱
C*S2011-01-16 08:012 楼需要在老鼠出生后诱导KO,前一阵用tamoxifen 1mg连续5天,没有检测到KO。有人说要用4OH-tamoxifen。会是这种原因吗?还有,我查了一下sigma,有两种4OHT,一种50mg,$190;一种25mg,$380。哪种效果好?
G*e2011-01-16 08:013 楼不会TAM就可以,如果对老鼠cell culture的话用OHT【在 C**S 的大作中提到】: 需要在老鼠出生后诱导KO,前一阵用tamoxifen 1mg连续5天,没有检测到KO。有人说要: 用4OH-tamoxifen。会是这种原因吗?: 还有,我查了一下sigma,有两种4OHT,一种50mg,$190;一种25mg,$380。哪种效果好: ?
l*n2011-01-16 08:014 楼用tamoxifen连续5天后,可以多等几天再测蛋白。有的蛋白半衰期很长。【在 C**S 的大作中提到】: 需要在老鼠出生后诱导KO,前一阵用tamoxifen 1mg连续5天,没有检测到KO。有人说要: 用4OH-tamoxifen。会是这种原因吗?: 还有,我查了一下sigma,有两种4OHT,一种50mg,$190;一种25mg,$380。哪种效果好: ?
C*S2011-01-16 08:016 楼Thanks. I did wait for 5 days after the last injection.【在 l**********n 的大作中提到】: 用tamoxifen连续5天后,可以多等几天再测蛋白。有的蛋白半衰期很长。
D*a2011-01-16 08:018 楼不用非用母的吧,公的母的都会被KO的你试试加量呢?我们实验室有人做的,量具体不知道,是早晚各一次持续五天,他们第一次摸的时候弄了三种不同浓度不同长度的protocol来实验。另外你的cre真的管用吗?我们隔壁实验室也用cre在另一个器官做ko,我们用的是同一只flox的老鼠,他们的就效率很低
G*e2011-01-16 08:019 楼顺便请教,你的蛋白去到多干净,或者genotypeing?【在 l**********n 的大作中提到】: 用tamoxifen连续5天后,可以多等几天再测蛋白。有的蛋白半衰期很长。
S*92011-01-16 08:0110 楼老鼠诱导用tamoxifem是work的。但是不同的cre不一样的,有些cre需要gastric lavage才行,大多数是IP。我做过有ve-cad Cre和Tie Cre无论用那种方法都没有work。我Tie Cre用过每天灌胃1mg,连续3周也没work。文献有报道6周食物加Tamoxifen。有几个系统剔除的cre,一般IP 10天, 每天1mg, 在3~4周开始,然后停药1周以后可以用,老鼠剔除效果在95~99%之间。 感觉IP 5天的,剔除率大概在92~95%。这个都是根据不同的target定的。再者,有些cre对于不同组织剔除IP的老鼠年龄也有很大关系,有些脑血管内皮剔除需要在新生鼠24小时内IP一次,这个时候就需要用4-OH,估计是新生鼠肝脏功能还没有成鼠成熟,对于Tamoxifen的代谢利用不足吧。
C*S2011-01-16 08:0111 楼The one I used is ve-cad cre ...... Did you get it from UCLA?【在 S******9 的大作中提到】: 老鼠诱导用tamoxifem是work的。: 但是不同的cre不一样的,有些cre需要gastric lavage才行,大多数是IP。: 我做过有ve-cad Cre和Tie Cre无论用那种方法都没有work。我Tie Cre用过每天灌胃: 1mg,连续3周也没work。文献有报道6周食物加Tamoxifen。: 有几个系统剔除的cre,一般IP 10天, 每天1mg, 在3~4周开始,然后停药1周以后可: 以用,老鼠剔除效果在95~99%之间。 感觉IP 5天的,剔除率大概在92~95%。这个都是: 根据不同的target定的。: 再者,有些cre对于不同组织剔除IP的老鼠年龄也有很大关系,有些脑血管内皮剔除需: 要在新生鼠24小时内IP一次,这个时候就需要用4-OH,估计是新生鼠肝脏功能还没有成: 鼠成熟,对于Tamoxifen的代谢利用不足吧。
D*y2011-01-16 08:0113 楼I used oral gavage (0.8 mg/10g body weight). after 7 days, I can detect itusing rosa26 reporter mice.【在 C**S 的大作中提到】: 需要在老鼠出生后诱导KO,前一阵用tamoxifen 1mg连续5天,没有检测到KO。有人说要: 用4OH-tamoxifen。会是这种原因吗?: 还有,我查了一下sigma,有两种4OHT,一种50mg,$190;一种25mg,$380。哪种效果好: ?
S*92011-01-16 08:0114 楼Rosa26 work不等于在你的target上work。it【在 D***y 的大作中提到】: I used oral gavage (0.8 mg/10g body weight). after 7 days, I can detect it: using rosa26 reporter mice.
C*S2011-01-16 08:0115 楼谢谢,是同一种。请问你们最后换到哪一种cre了?【在 S******9 的大作中提到】: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17072878