d*e
2 楼
最近一直在做WESTERNBLOT检测蛋白的表达,目的蛋白会形成一个五聚体,大小在60KDa
左右。电泳上样的时候没有煮沸变性,跑完电泳发现目的蛋白在40KDa的地方(和上样
的MARKER比较),少了20多KDa, 尝试用native-PAGE 胶跑电泳,但是条带size一下子
又很大了(和上样的MARKER比较),偏差很大,还不如SDS-PAGE胶。请问站内的高手是
怎么解决这个问题的?有构象的蛋白跑SDS-PAGE电泳size 不准确了。
左右。电泳上样的时候没有煮沸变性,跑完电泳发现目的蛋白在40KDa的地方(和上样
的MARKER比较),少了20多KDa, 尝试用native-PAGE 胶跑电泳,但是条带size一下子
又很大了(和上样的MARKER比较),偏差很大,还不如SDS-PAGE胶。请问站内的高手是
怎么解决这个问题的?有构象的蛋白跑SDS-PAGE电泳size 不准确了。
r*y
3 楼
Take it easy. It is still not late.
b*u
5 楼
多谢鼓励~~~慢慢等了...
k*0
6 楼
糖链修饰或超强输水,都引起表观分子量异常。
非变性胶,不是用来测分子量的。
检查抗体特异性如何或是否目标蛋白质发生降解或切除信号肽,等等。
非变性胶,不是用来测分子量的。
检查抗体特异性如何或是否目标蛋白质发生降解或切除信号肽,等等。
n*w
7 楼
您的结果只有1条带吗?
相关阅读
p16, p21, p53 antibody on IF staining?CRISPR会不会取代 RNAi呢?真诚求建议,身处绝境 (转载)向免疫学大牛请教,细胞内inflammation marker什么最好?HBV热潮,没有人讨论最近发表在Science的文章吗?用科学检验传说,油脂与健康之——脂肪酸Re: 生物博后转行cs吐槽先修课 (转载)求推荐做Southern Blot的gDNA extract kit如何找博后(植物抗病)文献求助postdoc 选择K99 interim payline 和 PO 的态度疑问真诚求审稿机会:心血管发育和疾病领域How to prepare 40 mM hydrogen peroxide from 30% H2O2 solution?问个offer是否需要negotiate?请教一句话的英语怎么写,多谢K99 问题请教请推荐海运公司paper help询问几个杂志的审稿周期