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请问有没有办法只转single copy到细胞里。
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e*o
2 楼
正在做一个实验，需要把一个文库转到细胞里.但只能让一个细胞只含一分 DNA copy.
电转，Lipofectamine, virus等都是同时转多份copy。不知道，各位大虾有没有什么好
的建议，谢谢！
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w*m
3 楼
听完的感觉，姚贝娜确实没有自己的特色，
又忆江南能唱成甜妹子，山歌好比春江水
唱成了西北风，完全是技巧型歌手，一首
歌不能唱成自己的，就会永远去唱别人的
歌，等于承认了自己是二流歌手
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e*o
4 楼
大家都没有什么好的建议吗？ 还是这个根本就是不现实？一个细胞只含有一种dna，多
份copy也行。效率低也没关系。
谢谢！
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s*t
5 楼
好像比较适合做背景音乐啊。。。就放在那里，还挺好听。赫赫
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D*a
6 楼
定点Homologous recombination?
外行，瞎说的
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w*m
7 楼
这一点让我想起了胡月，胡月能唱邓丽君，能唱走西口，
也能唱西北风，唱歌技巧应该是很好的，但她多变的风格，
渐渐被人忘记了，田震也唱过西本风，但后来只唱自己的
风格，自己的名曲也就越来越多。一个好的歌手到最后
就是看谁的风格被大众所接受，而不是技巧有多好。
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T*t
8 楼
我能想象的是增加细胞对文库的ratio，比方说你的文库里总共有100,000个copy，你就
用100，000，000个细胞来转这个文库。因为文库被充分稀释，那么每个细胞能够take
in的DNA不会超过两个。
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n*w
10 楼
可以像做细菌转化一样screen吗？
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f*k
11 楼
二和七不是很喜欢，其他几首都循环好多遍了！
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e*o
12 楼
感谢各位的回复与建议。
Homologous recombination的想法很好，我也想过用attp,phic31的办法来做，要先置
入attp site, 然后筛选，再接着转化。只是我用的是原代细胞，不能分化。所以在
筛选起来很麻烦。也不能象细菌那样screen.
降低dna总量应该可行，但是1pg dna 就有太多的copy 了，而且据说，减低dna 总量只
能降低转化效率，不能很好的降低单个细胞转化copy数。
也想过混一些junk DNA在文库里，可是也不能保证单copy，而且不知道重复性高不高。
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p*e
13 楼
觉得不错.

【在 f******k 的大作中提到】
: 二和七不是很喜欢，其他几首都循环好多遍了！
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m*u
14 楼
降低DNA浓度就行。不就一个泊松分布么。倍比稀释。单细胞克隆怎么拿？

.

【在 e***o 的大作中提到】
: 正在做一个实验，需要把一个文库转到细胞里.但只能让一个细胞只含一分 DNA copy.
: 电转，Lipofectamine, virus等都是同时转多份copy。不知道，各位大虾有没有什么好
: 的建议，谢谢！
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y*8
15 楼
其实第二首非常好了。
如果把伴奏去掉，非常贴近原生态的山歌。
江南的江河水面可是非常宽的，要想"这别唱来那别和"，就得要大嗓门才行。
这和茉莉花，采茶那样对自己的吟唱是不一样的。

【在 f******k 的大作中提到】
: 二和七不是很喜欢，其他几首都循环好多遍了！
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H*N
16 楼
lentivirus usually transfects cells with single copies.
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f*k
17 楼
我不是觉得她没唱好，也不是觉得歌不好听，只是山歌这一类都不太和我个人的口味，
偶尔听听不排斥，但是说不上喜欢，没有反复听的冲动。

【在 y******8 的大作中提到】
: 其实第二首非常好了。
: 如果把伴奏去掉，非常贴近原生态的山歌。
: 江南的江河水面可是非常宽的，要想"这别唱来那别和"，就得要大嗓门才行。
: 这和茉莉花，采茶那样对自己的吟唱是不一样的。
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j*r
18 楼
People doing genome-wide screening often dilute virus to get a moi less than
1, then use the pool of virus to infect cell. In that case, theoretically
one cell is infected by one virus. If you need more details, try to read
papers from Elledge lab. Good luck,
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n*n
19 楼
有自己特色的时候又说歌路太窄 不能多变
去tm的辨识度

【在 w*****m 的大作中提到】
: 听完的感觉，姚贝娜确实没有自己的特色，
: 又忆江南能唱成甜妹子，山歌好比春江水
: 唱成了西北风，完全是技巧型歌手，一首
: 歌不能唱成自己的，就会永远去唱别人的
: 歌，等于承认了自己是二流歌手
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i*t
20 楼
For lentivirus, I use MOI 1:3 to get no more than one copy in a single cell
for my genomic shRNA library screening.
avatar
p*e
21 楼
倒是觉得姚贝娜以前知名度不够 其实很多歌都唱的很不错. 当然目前缺一个很流行
的口水歌.

【在 n****n 的大作中提到】
: 有自己特色的时候又说歌路太窄 不能多变
: 去tm的辨识度
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Z*5
22 楼
这个还真不一定吧，要考虑一下转染试剂的原理，会只包裹一个DNA分子？

【在 m*****u 的大作中提到】
: 降低DNA浓度就行。不就一个泊松分布么。倍比稀释。单细胞克隆怎么拿？
:
: .
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e*o
23 楼
再次感谢各位的回复与建议。
受益匪浅！我手里的是AAV，不知道AAV降到一定的MOI后是否和lenti一样。
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o*a
24 楼
为啥不行？emulsion PCR不是也号称只包一个分子吗？

【在 Z******5 的大作中提到】
: 这个还真不一定吧，要考虑一下转染试剂的原理，会只包裹一个DNA分子？
avatar
w*u
25 楼
BAC
lentivirus
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