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请教Dual Luciferase Assay

请教Dual Luciferase Assay# Biology - 生物学

y*42011-02-17 08:02

1 楼

最近学校会打折卖上一代13寸MBP（model# MC700LL/A）$920 包括税
就是这款
http://www.amazon.com/Apple-MacBook-MC700LL-13-3-Inch-VERSION/d
i5 2.3g， 4g ram，320g hd
因为之前没关注过MBP的价钱，也从没买过mac（如果买了这个，就是自己第一个mac啦
），请问这个价钱算合适了么，还是等blackfriday或者back to school promotion？
因为自己并不急需电脑，所以可以找个便宜的机会买
另外，大家能给些中肯的关于用13 MBP的感受或评价么？
目前看到的缺点有：screen reflection，各种port都在一边不方便同时插多个设备
希望大家多多给些其他的观点。
本来觉得13寸的air也挺好的，毕竟个人觉得13寸pro还是挺重的啊（本人女生，亲自去
店里试过），后来发现air完全没有wired internet接口，遇到没有wifi的时候就郁闷
了。不知道大家实际用的时候有没有这种问题

L*O2011-02-17 08:02

2 楼

我用promega的。
做triplicate，结果３值差异好大。Firefly一般background有30左右,而实验组也只有
30左右. Renillia一般比较正常,在１００左右。。
谢谢!~~~~~~~~~~~~~~~~~~~

y*42011-02-17 08:02

3 楼

自己顶~

Z*52011-02-17 08:02

4 楼

你这个值也太低了吧。读数大小和荧光收集时间的设置有关，我一般设置收集2秒，自
己用移液枪加液（没钱，剩），每次就测3个well的。具体：
背景值：黑板40左右，白板100左右
Firely的值从几万（转染效率低的细胞）到几千万（293T细胞）；Renilia的值从几百
到几万（我用的是pRL-TK载体做内参，转的相对较少）
你的明显有问题（当然前提是问题不是出在你用的promoter上），建议你在你用的cell
line和293细胞中同时转染pGL3 control，pGL3 Basic，和pRL-TK载体，然后测荧光值
，看看你的试剂，测试程序等有没有问题。

d*12011-02-17 08:02

5 楼

女生还是上mba吧
美国我咋觉得每天常呆的地方要没wifi还挺难的再说万一急着用还可以连iphone
反倒是网线接口不好找吧

B*o2011-02-17 08:02

6 楼

你这两数据都不太正常啊。一般状况下 firefly都能几千上万，renilla也会上千（具
体数字根据transfection的ratio和量有所变化）。
同意楼上的，你最好pGL-control, basic加RL-tk做control试一试，看看测试的流程，
试剂啥的是不是有问题

【在 L**********O 的大作中提到】

: 我用promega的。
: 做triplicate，结果３值差异好大。Firefly一般background有30左右,而实验组也只有
: 30左右. Renillia一般比较正常,在１００左右。。
: 谢谢!~~~~~~~~~~~~~~~~~~~

y*42011-02-17 08:02

7 楼

我们办公室的无线网络信号不好，我现在的本儿都还一直在用有线，无奈啊
所以可能还是得pro啊
不过还是谢谢你的意见~

【在 d*****1 的大作中提到】

: 女生还是上mba吧
: 美国我咋觉得每天常呆的地方要没wifi还挺难的再说万一急着用还可以连iphone
: 反倒是网线接口不好找吧

z*g2011-02-17 08:02

8 楼

貌是这个assay variability极大，又是overexpression condition, 一般erro bar 都
超级大，不太reliable.

cell

【在 Z******5 的大作中提到】

: 你这个值也太低了吧。读数大小和荧光收集时间的设置有关，我一般设置收集2秒，自
: 己用移液枪加液（没钱，剩），每次就测3个well的。具体：
: 背景值：黑板40左右，白板100左右
: Firely的值从几万（转染效率低的细胞）到几千万（293T细胞）；Renilia的值从几百
: 到几万（我用的是pRL-TK载体做内参，转的相对较少）
: 你的明显有问题（当然前提是问题不是出在你用的promoter上），建议你在你用的cell
: line和293细胞中同时转染pGL3 control，pGL3 Basic，和pRL-TK载体，然后测荧光值
: ，看看你的试剂，测试程序等有没有问题。

y*42011-02-17 08:02

9 楼

大家认为MC700 算税920左右算划算么

m*n2011-02-17 08:02

10 楼

dual glo lit?

H*z2011-02-17 08:02

11 楼

非要用网线的话，有adapt

L*O2011-02-17 08:02

12 楼

Thank you, guys!
I transfect the primary cells with pGL and pRL-TK at the same time using
Lipofectamine. I haven't tried transfect the 293T cells. So do you think the
first thing I need to try is to transfect the 293T cells with these two
vectors at the same time?
I think the vectors are fine, esp. the pGL--- we bought it from promega :)

b*d2011-02-17 08:02

13 楼

买个一头插网线，一头是usb口的转换器就成了，几块钱。
干活儿还是要MBP(话说干活儿难道不是台式机才最好吗？），出个差看个视频上个网啥
的，MBA全力胜出啊。
不过要上MBA就要上2代。1代很多缺陷。

L*O2011-02-17 08:02

14 楼

no. Dual Luciferase Assay

【在 m****n 的大作中提到】

: dual glo lit?

y*42011-02-17 08:02

15 楼

看大家的回复都支持MBA，就又去试了试MBP和MBA，为什么我觉得MBA的屏幕看着没有
MBP好呢，不是分辨率更高么。。。迷惑了，是我眼拙？
我目前还是倾向MBP
另外mc700能同时处理多个照片photoshop吧，都是实验照片，都挺大的，以前的旧电脑
经常多开几个就容易卡了
还有最重要的问题，到底mc700 $920到底划算吗

s*s2011-02-17 08:02

16 楼

值太小。
每次要混匀，（细胞和transfection mix都要），否则variation很大。

【在 L**********O 的大作中提到】

l*02011-02-17 08:02

17 楼

我觉得还是挺划算的。我是上个礼拜买的mbp。比较了macmall(old version)和apple(
new version)，都比你说的贵。最后我还是在apple.com买了一台mbp，因
为我用discover卡有5%cashback。我觉得你找到的deal的性价比已经很高了。

【在 y*******4 的大作中提到】

: 看大家的回复都支持MBA，就又去试了试MBP和MBA，为什么我觉得MBA的屏幕看着没有
: MBP好呢，不是分辨率更高么。。。迷惑了，是我眼拙？
: 我目前还是倾向MBP
: 另外mc700能同时处理多个照片photoshop吧，都是实验照片，都挺大的，以前的旧电脑
: 经常多开几个就容易卡了
: 还有最重要的问题，到底mc700 $920到底划算吗

W*C2011-02-17 08:02

18 楼

ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　没ｗｏｒｋ。。。不行就换transfection reagent, 比如
ｆｕｌｌｇｅｎｅ

f*y2011-02-17 08:02

19 楼

我也觉得挺划算的。我们学校是$999+TAX. 不知道LZ在那个地方啊？

L*O2011-02-17 08:02

20 楼

do you mean Fugene?

【在 W****C 的大作中提到】

: ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　没ｗｏｒｋ。。。不行就换transfection reagent, 比如
: ｆｕｌｌｇｅｎｅ

y*42011-02-17 08:02

21 楼

美国中部大农村

★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器

【在 f***y 的大作中提到】

: 我也觉得挺划算的。我们学校是$999+TAX. 不知道LZ在那个地方啊？

m*n2011-02-17 08:02

22 楼

我用luminoscan ascent micro-plate reader.
用的是white wall, clear-bottom, cell culture-treated 96-well plate.
不加任何溶液的情况下，integration time 1 second or 10 second,
读数是 0.08.
这个正常吗？
Thanks。

y*42011-02-17 08:02

23 楼

昨天顶着巨大的心理压力可还是买了啊，觉得自己好败家啊…寻求安慰啊

【在 y*******4 的大作中提到】

: 最近学校会打折卖上一代13寸MBP（model# MC700LL/A）$920 包括税
: 就是这款
: http://www.amazon.com/Apple-MacBook-MC700LL-13-3-Inch-VERSION/d
: i5 2.3g， 4g ram，320g hd
: 因为之前没关注过MBP的价钱，也从没买过mac（如果买了这个，就是自己第一个mac啦
: ），请问这个价钱算合适了么，还是等blackfriday或者back to school promotion？
: 因为自己并不急需电脑，所以可以找个便宜的机会买
: 另外，大家能给些中肯的关于用13 MBP的感受或评价么？
: 目前看到的缺点有：screen reflection，各种port都在一边不方便同时插多个设备
: 希望大家多多给些其他的观点。

B*o2011-02-17 08:02

24 楼

你先确认一下你的primary cell能被transfect不。
其实大部分的DLA都是在293T里做的，你用primary cell有啥原因么？

the

【在 L**********O 的大作中提到】

: Thank you, guys!
: I transfect the primary cells with pGL and pRL-TK at the same time using
: Lipofectamine. I haven't tried transfect the 293T cells. So do you think the
: first thing I need to try is to transfect the 293T cells with these two
: vectors at the same time?
: I think the vectors are fine, esp. the pGL--- we bought it from promega :)