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有人熟悉SILAC么？

有人熟悉SILAC么？# Biology - 生物学

c*n2011-03-20 07:03

1 楼

"These who do not weep, do not see"
-Victor Hugo
我认为是拍得最好的歌剧电影，是一定要带着纸巾去看的
电影的效果就是可以让人看得感人，这是歌剧做不到的
惊人的是这部电影的对话都是唱的，明显不自然，居然能这么感人，说明歌剧的作者和
演员有多么卖力
russell crowe明显唱的很差，但是鱼与熊掌不可兼得，唱的好的男中音也不可能有他
这样的演技
不太喜欢演员直接实况清唱的效果，声音和背景音乐好象离得很远，但这明显是导演故
意造成的
每个演员都是实况演唱，没有任何配音，拍戏的时候嘴边戴着个microphone唱，然后后
期制作用电脑把microphone给涂掉
还有一个细节:那个老神父就是原版les miserables歌剧的男主演
不过这电影肯定在中国人中火不起来，因为中国人听不懂的。我英文很好就是了，每句
唱的我都听得懂。

x*q2011-03-20 07:03

2 楼

For example, 32G iPhone 4 preowned $290
coupon code HOLIDAY15
★ 发自iPhone App: ChineseWeb - 中文网站浏览器

s*s2011-03-20 07:03

3 楼

这个现在发展到什么程度了？比如能够定量全蛋白组了？
还是一次只能定量几百？几千的蛋白？

i*i2011-03-20 07:03

4 楼

thanks for sharing

【在 c******n 的大作中提到】

: "These who do not weep, do not see"
: -Victor Hugo
: 我认为是拍得最好的歌剧电影，是一定要带着纸巾去看的
: 电影的效果就是可以让人看得感人，这是歌剧做不到的
: 惊人的是这部电影的对话都是唱的，明显不自然，居然能这么感人，说明歌剧的作者和
: 演员有多么卖力
: russell crowe明显唱的很差，但是鱼与熊掌不可兼得，唱的好的男中音也不可能有他
: 这样的演技
: 不太喜欢演员直接实况清唱的效果，声音和背景音乐好象离得很远，但这明显是导演故
: 意造成的

e*r2011-03-20 07:03

5 楼

同问

l*e2011-03-20 07:03

6 楼

我就不看了。反正我肯定是看不懂了。相信lz是好意。但是最后一句话让人感觉不是很
舒服。呵呵。

K*S2011-03-20 07:03

7 楼

no one can handle the whole proteome. several thousands of proteins are kind
of routine for most established proteomics labs.

【在 s******s 的大作中提到】

: 这个现在发展到什么程度了？比如能够定量全蛋白组了？
: 还是一次只能定量几百？几千的蛋白？

i*a2011-03-20 07:03

8 楼

看来楼主不是中国人

x*y2011-03-20 07:03

9 楼

同问.我也想试试SILAC,就是不知合不合用? 那位熟悉的请说说.

【在 s******s 的大作中提到】

: 这个现在发展到什么程度了？比如能够定量全蛋白组了？
: 还是一次只能定量几百？几千的蛋白？

k*42011-03-20 07:03

10 楼

超想看，怕听不懂
★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.7

s*s2011-03-20 07:03

11 楼

good to know.
btw, 这个啥成本？我知道普通的MS-Maldi-tof也不到100刀一个。
这个加上特殊media，control啥的，价格和seq比高多少？（比如seq是$1k)

kind

【在 K******S 的大作中提到】

: no one can handle the whole proteome. several thousands of proteins are kind
: of routine for most established proteomics labs.

l*y2011-03-20 07:03

12 楼

你可以先把歌词搜一边确保听的懂。
但是我觉得你只要来美国认真上过学，就一定能听懂。歌词还是比较阳春白雪的。

【在 k**********4 的大作中提到】

: 超想看，怕听不懂
: ★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.7

c*d2011-03-20 07:03

13 楼

最近才做了一次
数据很多，但他们的software还不够完善，有些最后的data和rough spectrum peak不
能match
不知道是我们学校center的技术问题，还是通病

【在 x**y 的大作中提到】

: 同问.我也想试试SILAC,就是不知合不合用? 那位熟悉的请说说.

i*i2011-03-20 07:03

14 楼

能听懂这个就可以看懂.

X*n2011-03-20 07:03

15 楼

我也感觉数据分析是个大问题，感觉要很有经验的人才可以。

k*42011-03-20 07:03

16 楼

能听懂也，貌似比说话还慢。看去！

★ 发自iPhone App: ChineseWeb 7.7

【在 i**i 的大作中提到】

: 能听懂这个就可以看懂.

p*12011-03-20 07:03

17 楼

rough spectrum 是mass spectrum 吗？怎么不吻合？

【在 c********d 的大作中提到】

: 最近才做了一次
: 数据很多，但他们的software还不够完善，有些最后的data和rough spectrum peak不
: 能match
: 不知道是我们学校center的技术问题，还是通病

c*T2011-03-20 07:03

18 楼

LZ奇葩。
这是个音乐剧不是歌剧。
而且唱得非常一般。

p*12011-03-20 07:03

19 楼

做LC-MS/MS, 一次可以鉴定数百甚至上千个蛋白，MALDI-TOF，100刀似乎太贵了

【在 s******s 的大作中提到】

: good to know.
: btw, 这个啥成本？我知道普通的MS-Maldi-tof也不到100刀一个。
: 这个加上特殊media，control啥的，价格和seq比高多少？（比如seq是$1k)
:
: kind

h*e2011-03-20 07:03

20 楼

最后一句亮了

c*d2011-03-20 07:03

21 楼

我用了 light, medium, heavy三种 K/R标记细胞中的蛋白
药物处理以后检测磷酸化蛋白的变化水平
有一些磷酸化peptide的ratio比如heavy:light=15
但是，当仔细看这个peptide的mass spectrum时，他们的峰面积or峰高的差别只有4,5
倍的样子。

【在 p*****1 的大作中提到】

: rough spectrum 是mass spectrum 吗？怎么不吻合？

c*n2011-03-20 07:03

22 楼

废话谁都知道唱的很烂
但是看电影的目的就是看演员演技
要找几个soprano, mezzo soprano, tenor, baritone去演电影,我看你们早就睡着了

【在 c***T 的大作中提到】

: LZ奇葩。
: 这是个音乐剧不是歌剧。
: 而且唱得非常一般。

K*S2011-03-20 07:03

23 楼

如果是COST RECOVERY的CORE LAB做，差不多。人员SALARY，仪器SERVICE CONTRACT,什
么的全算上

【在 p*****1 的大作中提到】

: 做LC-MS/MS, 一次可以鉴定数百甚至上千个蛋白，MALDI-TOF，100刀似乎太贵了

w*y2011-03-20 07:03

24 楼

不难懂。如果了解剧情就更没问题了。整个片子不错，前半部差点，音乐也弱点，后半
部更好。主要角色表演很不错，除了成年柯赛特比较烂。

【在 c******n 的大作中提到】

K*S2011-03-20 07:03

25 楼

现在做SILAC基本上都是用MAXQUANT分析，网上有免费的FORUM，在欧洲的话还可以去参
加他们的TRAINING CLASS.我觉得比较成熟了

【在 X******n 的大作中提到】

: 我也感觉数据分析是个大问题，感觉要很有经验的人才可以。

c*n2011-03-20 07:03

26 楼

我觉得什么歌剧音乐剧本来就是高尚的肥皂剧，看得目的就是好看
这电影场景音乐都不错，3小时好看不闷
比broadway看戏娱乐性强，更感人
成年cosette唱功好，也没什么难度大的情节，演技不需要很多

【在 w******y 的大作中提到】

: 不难懂。如果了解剧情就更没问题了。整个片子不错，前半部差点，音乐也弱点，后半
: 部更好。主要角色表演很不错，除了成年柯赛特比较烂。

c*m2011-03-20 07:03

27 楼

SILAC一个5000刀

【在 s******s 的大作中提到】

: good to know.
: btw, 这个啥成本？我知道普通的MS-Maldi-tof也不到100刀一个。
: 这个加上特殊media，control啥的，价格和seq比高多少？（比如seq是$1k)
:
: kind

n*m2011-03-20 07:03

28 楼

同意，这个电影比音乐剧差远了，唱得一点不感人，电影演员的演唱淡如白水。相比音
乐剧演员的演唱真是能触及观众心灵的。而且电影的表现形式那么丰富，居然不如音乐
剧的舞台效果更震撼。

【在 c***T 的大作中提到】

: LZ奇葩。
: 这是个音乐剧不是歌剧。
: 而且唱得非常一般。

s*s2011-03-20 07:03

29 楼

为啥这么贵？成本出在哪里啊？同位素medium没那么贵吧

【在 c******m 的大作中提到】

: SILAC一个5000刀

p*12011-03-20 07:03

30 楼

mass spectrometry 不能定量。

5

【在 c********d 的大作中提到】

: 我用了 light, medium, heavy三种 K/R标记细胞中的蛋白
: 药物处理以后检测磷酸化蛋白的变化水平
: 有一些磷酸化peptide的ratio比如heavy:light=15
: 但是，当仔细看这个peptide的mass spectrum时，他们的峰面积or峰高的差别只有4,5
: 倍的样子。

p*12011-03-20 07:03

31 楼

Orbitrap 用MAXQUANT分析， ABI 5600 采用另外的软件。其实分析软件大致差不多，
重要的是仪器。

【在 K******S 的大作中提到】

: 现在做SILAC基本上都是用MAXQUANT分析，网上有免费的FORUM，在欧洲的话还可以去参
: 加他们的TRAINING CLASS.我觉得比较成熟了

K*S2011-03-20 07:03

32 楼

of course it can with labeling, label free is also possible for same peptide
across samples. you can't compare different peptides though.

【在 p*****1 的大作中提到】

: mass spectrometry 不能定量。
:
: 5

K*S2011-03-20 07:03

33 楼

that's why I don't trust any software for important data. Manually
extracting peak areas is still the most reliable way to go. I will guess the
settings in the software can be adjusted a little bit. (anything related to
threshold or peak intensity) I had similar experience when I was in
graduate school. The overall trend match for most of the cases, however I
can always find some difference in either the exact intensity or the ratio.

5

【在 c********d 的大作中提到】

p*12011-03-20 07:03

34 楼

mass spectrometry 通常只能做相对定量, 峰面积增加2倍，并不表明浓度增加两倍。

peptide

【在 K******S 的大作中提到】

: of course it can with labeling, label free is also possible for same peptide
: across samples. you can't compare different peptides though.

K*S2011-03-20 07:03

35 楼

then what are absolute quantitation, stable isotopic labeling and MRM doing
in both industry and academia?

【在 p*****1 的大作中提到】

: mass spectrometry 通常只能做相对定量, 峰面积增加2倍，并不表明浓度增加两倍。
:
: peptide