q*3
2 楼
虽然我知道脚气不是她想要拥有的，不能够责怪她，但是我真的很痛苦，每天活在水
深火热中，有时候甚至觉得走出办公室我身上都有一股脚气味了，还有在办公室简直呼
吸困难，关键还要努力工作，简直太痛苦。
其实，根据我长时间观察，我早就发现谁是罪魁祸首了，但是我总不能直接告诉她
我因为你的脚气很痛苦吧，这样很伤人啊，而且不论怎么说都很伤人面子，所以，只有
憋着了。我也采取过措施，一开始买了一盆绿植，没用，后来又买了一盆，还是没用。
这个方法放弃了。后来又想着把办公室门打开，但还是没有用。
所以，想问苍天，问各位大神，我该怎么办？而且那位同事穿运动鞋还不穿袜子，
你说能不严重吗？她没有想过去治疗吗？又不是不能够治。其实，我想了很好的一个办
法，跟她聊天，然后聊到这个，就说我以前也有脚气，用什么方子可以治疗，建议她去
试一下，当然我早就科普了很多治疗脚气的方法，就等时机成熟了。大家觉得这个方法
棒不棒！不行就再指导一下，让我长命百岁活下去吧！
深火热中，有时候甚至觉得走出办公室我身上都有一股脚气味了，还有在办公室简直呼
吸困难，关键还要努力工作，简直太痛苦。
其实，根据我长时间观察，我早就发现谁是罪魁祸首了，但是我总不能直接告诉她
我因为你的脚气很痛苦吧，这样很伤人啊，而且不论怎么说都很伤人面子，所以，只有
憋着了。我也采取过措施，一开始买了一盆绿植，没用，后来又买了一盆，还是没用。
这个方法放弃了。后来又想着把办公室门打开，但还是没有用。
所以，想问苍天，问各位大神，我该怎么办？而且那位同事穿运动鞋还不穿袜子，
你说能不严重吗？她没有想过去治疗吗？又不是不能够治。其实，我想了很好的一个办
法，跟她聊天，然后聊到这个，就说我以前也有脚气，用什么方子可以治疗，建议她去
试一下，当然我早就科普了很多治疗脚气的方法，就等时机成熟了。大家觉得这个方法
棒不棒！不行就再指导一下，让我长命百岁活下去吧！
d*i
3 楼
1. 用milk还是BSA？要reuse的话哪个配一抗比较好？
2. 4C还是-20C？
做WB用。
2. 4C还是-20C？
做WB用。
s*8
4 楼
快两周了。。
v*a
5 楼
bsa, 4C
a*n
6 楼
问问中信，有时候中信忘记通知了
【在 s*******8 的大作中提到】
: 快两周了。。
【在 s*******8 的大作中提到】
: 快两周了。。
Z*5
7 楼
有protocol说加点叠氮钠，4度保存。
我们一般是牛奶配好，直接-20冻存，一个月内用两三次问题不大。
我们一般是牛奶配好，直接-20冻存，一个月内用两三次问题不大。
l*8
8 楼
4／22or 23: origination scan（23日查的， 所以不知道22日是否有更新）。
4/24: 收到电邮和电话，通知领取护照。
我们比较幸运，从递交资料到领取护照just 7 working days, 4／16－4／24。
祝你们顺利！
4/24: 收到电邮和电话，通知领取护照。
我们比较幸运，从递交资料到领取护照just 7 working days, 4／16－4／24。
祝你们顺利！
n*w
9 楼
我是用bsa配的，直接－20，我半年前寸的抗体也能用。。。lol
【在 d****i 的大作中提到】
: 1. 用milk还是BSA？要reuse的话哪个配一抗比较好？
: 2. 4C还是-20C？
: 做WB用。
【在 d****i 的大作中提到】
: 1. 用milk还是BSA？要reuse的话哪个配一抗比较好？
: 2. 4C还是-20C？
: 做WB用。
h*o
10 楼
If you are gonna use the antibody frequently in a few weeks, use Superblock
T20 or P20 from pierce to dilute the antibody and put in 4oc, it works
perfectly for a couple of weeks.
For long term use with low frequency, let's say once a month for about half
year, -20oC is OK. But freeze-thaw cycle does kill antibody significantly.
T20 or P20 from pierce to dilute the antibody and put in 4oc, it works
perfectly for a couple of weeks.
For long term use with low frequency, let's say once a month for about half
year, -20oC is OK. But freeze-thaw cycle does kill antibody significantly.
B*e
11 楼
只放在PBST中，没有BSA和milk，-20中，可用很久。
【在 d****i 的大作中提到】
: 1. 用milk还是BSA？要reuse的话哪个配一抗比较好？
: 2. 4C还是-20C？
: 做WB用。
【在 d****i 的大作中提到】
: 1. 用milk还是BSA？要reuse的话哪个配一抗比较好？
: 2. 4C还是-20C？
: 做WB用。
b*8
12 楼
我们的b-actin，放在milk中reuse，存于-20度，一年都没有问题
f*n
13 楼
加点叠氮钠，4度保存
d*i
14 楼
非常感谢各位！
现在明确了：用BSA配在-20C最长可以放半年(根据 ntgxw 的经验)。
hellozero 说反复冻融肯定会降低抗体的效价。
问题：1. -20C保存的抗体反复冻融几次还可以用？
2. 有没有人用milk配制后方-20C冻存的？
我们实验室是用milk配制的抗体放4C一般一个月内还可以用。
我发帖子的目的是想尽可能充分利用一抗，当然不可能为了这个专门反复冻融去摸索，
也没必要，只是想看大家的经验。
再次谢谢各位！
现在明确了：用BSA配在-20C最长可以放半年(根据 ntgxw 的经验)。
hellozero 说反复冻融肯定会降低抗体的效价。
问题：1. -20C保存的抗体反复冻融几次还可以用？
2. 有没有人用milk配制后方-20C冻存的？
我们实验室是用milk配制的抗体放4C一般一个月内还可以用。
我发帖子的目的是想尽可能充分利用一抗，当然不可能为了这个专门反复冻融去摸索，
也没必要，只是想看大家的经验。
再次谢谢各位！
d*i
15 楼
谢谢！我们一直放4C。没敢放-20.
【在 Z******5 的大作中提到】
: 有protocol说加点叠氮钠，4度保存。
: 我们一般是牛奶配好，直接-20冻存，一个月内用两三次问题不大。
d*i
16 楼
一抗没有BSA/MILK孵育膜不太好吧，虽然前面有封闭，背景会高吗？
【在 B*****e 的大作中提到】
: 只放在PBST中，没有BSA和milk，-20中，可用很久。
d*i
17 楼
一年之内有没有反复冻融过？几次呢？谢谢！
【在 b**********8 的大作中提到】
: 我们的b-actin，放在milk中reuse，存于-20度，一年都没有问题
d*i
18 楼
据说叠氮钠据说对一抗和目的蛋白的结合有影响。
【在 f********n 的大作中提到】
: 加点叠氮钠，4度保存
C*m
19 楼
这么小的分子会有那么大的影响？
【在 d****i 的大作中提到】
:
: 据说叠氮钠据说对一抗和目的蛋白的结合有影响。
【在 d****i 的大作中提到】
:
: 据说叠氮钠据说对一抗和目的蛋白的结合有影响。
h*o
20 楼
sodium Azide at low concentration mainly interferes with the peroxide
reaction (HRP conjugated 2nd antibody). It should be fine to use at a very
low concentration.
After all, it is all up to the antibody. For b-actin, sure freeze and thaw
is fine.
For some delicate antibodies, it will be a big problem.
So for me, unless it is extremely hard to get the antibody, I woudn't reuse
for more than 5 times, usually 3 times.
【在 d****i 的大作中提到】
:
: 据说叠氮钠据说对一抗和目的蛋白的结合有影响。
reaction (HRP conjugated 2nd antibody). It should be fine to use at a very
low concentration.
After all, it is all up to the antibody. For b-actin, sure freeze and thaw
is fine.
For some delicate antibodies, it will be a big problem.
So for me, unless it is extremely hard to get the antibody, I woudn't reuse
for more than 5 times, usually 3 times.
【在 d****i 的大作中提到】
:
: 据说叠氮钠据说对一抗和目的蛋白的结合有影响。
d*i
21 楼
谢谢大家！学到了很多！
Z*5
22 楼
我前段时间加过一次，直接丢了二十几粒叠氮钠到10ml抗体/milk中，过了一个月后用
，砸出来的条带明显有问题。 如果要加叠氮钠的话，最好还是按照protocol给的浓度
加吧。
reuse
【在 h*******o 的大作中提到】
: sodium Azide at low concentration mainly interferes with the peroxide
: reaction (HRP conjugated 2nd antibody). It should be fine to use at a very
: low concentration.
: After all, it is all up to the antibody. For b-actin, sure freeze and thaw
: is fine.
: For some delicate antibodies, it will be a big problem.
: So for me, unless it is extremely hard to get the antibody, I woudn't reuse
: for more than 5 times, usually 3 times.
，砸出来的条带明显有问题。 如果要加叠氮钠的话，最好还是按照protocol给的浓度
加吧。
reuse
【在 h*******o 的大作中提到】
: sodium Azide at low concentration mainly interferes with the peroxide
: reaction (HRP conjugated 2nd antibody). It should be fine to use at a very
: low concentration.
: After all, it is all up to the antibody. For b-actin, sure freeze and thaw
: is fine.
: For some delicate antibodies, it will be a big problem.
: So for me, unless it is extremely hard to get the antibody, I woudn't reuse
: for more than 5 times, usually 3 times.
B*w
23 楼
一直加0.02%叠氮钠后放-20度，有些抗体能用一两年都没有问题
我们实验室的actin都用了2,3年了还挺好的，反复冻融了不知道多少次
我们实验室的actin都用了2,3年了还挺好的，反复冻融了不知道多少次
Y*Z
24 楼
bsa
-20
-20
g*5
25 楼
It depends.
some antibodies I put -20C and take out more than five times and work.
and usually rabbit antibodies are stable than mouse antibodies.
and if you use Licor system, azide is ok.
reuse
【在 h*******o 的大作中提到】
: sodium Azide at low concentration mainly interferes with the peroxide
: reaction (HRP conjugated 2nd antibody). It should be fine to use at a very
: low concentration.
: After all, it is all up to the antibody. For b-actin, sure freeze and thaw
: is fine.
: For some delicate antibodies, it will be a big problem.
: So for me, unless it is extremely hard to get the antibody, I woudn't reuse
: for more than 5 times, usually 3 times.
some antibodies I put -20C and take out more than five times and work.
and usually rabbit antibodies are stable than mouse antibodies.
and if you use Licor system, azide is ok.
reuse
【在 h*******o 的大作中提到】
: sodium Azide at low concentration mainly interferes with the peroxide
: reaction (HRP conjugated 2nd antibody). It should be fine to use at a very
: low concentration.
: After all, it is all up to the antibody. For b-actin, sure freeze and thaw
: is fine.
: For some delicate antibodies, it will be a big problem.
: So for me, unless it is extremely hard to get the antibody, I woudn't reuse
: for more than 5 times, usually 3 times.
s*g
26 楼
我们用cell signaling的比较多.它要求用BSA就用BSA,要求用MILK, 就用MILK.一般都
是放在-20度保存.反复冻融问题不大.至多到时候随心所欲,再稍微加点抗体进去就是了.
【在 d****i 的大作中提到】
: 1. 用milk还是BSA？要reuse的话哪个配一抗比较好？
: 2. 4C还是-20C？
: 做WB用。
是放在-20度保存.反复冻融问题不大.至多到时候随心所欲,再稍微加点抗体进去就是了.
【在 d****i 的大作中提到】
: 1. 用milk还是BSA？要reuse的话哪个配一抗比较好？
: 2. 4C还是-20C？
: 做WB用。
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