w*t
2 楼
这个是什么问题？
就是突然的reset........
就是突然的reset........
s*y
3 楼
我们需要在一个器官里在不同时期来KO 一个基因，
不知道有哪个cre line 是比较好用的？
我曾经听说过CreER， 就是那个把cre 和Estrogen receptor fuse在一起的
那个，可是我问了一个做过这个的人。他给了非常糟糕的评价，说是他们
做不出来。
请问大家有没有做过类似的事情？有什么更好的推荐么？或者诱导的时候
有什么要注意的事项？
不知道有哪个cre line 是比较好用的？
我曾经听说过CreER， 就是那个把cre 和Estrogen receptor fuse在一起的
那个，可是我问了一个做过这个的人。他给了非常糟糕的评价，说是他们
做不出来。
请问大家有没有做过类似的事情？有什么更好的推荐么？或者诱导的时候
有什么要注意的事项？
a*9
4 楼
算荣誉, 算不上牛B, 入选的多是拿过CAREER的.
p*t
5 楼
这个更像overheat
【在 w******t 的大作中提到】
: 这个是什么问题？
: 就是突然的reset........
【在 w******t 的大作中提到】
: 这个是什么问题？
: 就是突然的reset........
G*e
6 楼
不清楚tissue specific的cre－er，有挺多paper介绍，但是whole body的是可以work
的，不过我觉得不complete，但是有些phenotype是不需要complete的KO，非要提高KO
效率可以试一下用f/-，我没有试过，或者多打几次TAM，可能更容易变成null。
我对whole body的Cre－er的一个concern是cell autonomous的问题无法address，我认
为要做就要一开始用tissue specific，可以说你要做哪个tissue吗？
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们需要在一个器官里在不同时期来KO 一个基因，
: 不知道有哪个cre line 是比较好用的？
: 我曾经听说过CreER， 就是那个把cre 和Estrogen receptor fuse在一起的
: 那个，可是我问了一个做过这个的人。他给了非常糟糕的评价，说是他们
: 做不出来。
: 请问大家有没有做过类似的事情？有什么更好的推荐么？或者诱导的时候
: 有什么要注意的事项？
的，不过我觉得不complete，但是有些phenotype是不需要complete的KO，非要提高KO
效率可以试一下用f/-，我没有试过，或者多打几次TAM，可能更容易变成null。
我对whole body的Cre－er的一个concern是cell autonomous的问题无法address，我认
为要做就要一开始用tissue specific，可以说你要做哪个tissue吗？
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们需要在一个器官里在不同时期来KO 一个基因，
: 不知道有哪个cre line 是比较好用的？
: 我曾经听说过CreER， 就是那个把cre 和Estrogen receptor fuse在一起的
: 那个，可是我问了一个做过这个的人。他给了非常糟糕的评价，说是他们
: 做不出来。
: 请问大家有没有做过类似的事情？有什么更好的推荐么？或者诱导的时候
: 有什么要注意的事项？
L*s
7 楼
那也没啥了不起的...还有个education的symposium，啥意思？
【在 a***9 的大作中提到】
: 算荣誉, 算不上牛B, 入选的多是拿过CAREER的.
【在 a***9 的大作中提到】
: 算荣誉, 算不上牛B, 入选的多是拿过CAREER的.
h*b
8 楼
八成主板或者电源问题。
s*y
9 楼
嗯，你说的那个f/- 这个方法听起来是不错的点子。
我可以试试，因为我们的杂合体本身是正常的。
具体哪个tissue在这里不好透露，否则老板会以泄密罪处决我的。呵呵。
work
KO
【在 G********e 的大作中提到】
: 不清楚tissue specific的cre－er，有挺多paper介绍，但是whole body的是可以work
: 的，不过我觉得不complete，但是有些phenotype是不需要complete的KO，非要提高KO
: 效率可以试一下用f/-，我没有试过，或者多打几次TAM，可能更容易变成null。
: 我对whole body的Cre－er的一个concern是cell autonomous的问题无法address，我认
: 为要做就要一开始用tissue specific，可以说你要做哪个tissue吗？
我可以试试，因为我们的杂合体本身是正常的。
具体哪个tissue在这里不好透露，否则老板会以泄密罪处决我的。呵呵。
work
KO
【在 G********e 的大作中提到】
: 不清楚tissue specific的cre－er，有挺多paper介绍，但是whole body的是可以work
: 的，不过我觉得不complete，但是有些phenotype是不需要complete的KO，非要提高KO
: 效率可以试一下用f/-，我没有试过，或者多打几次TAM，可能更容易变成null。
: 我对whole body的Cre－er的一个concern是cell autonomous的问题无法address，我认
: 为要做就要一开始用tissue specific，可以说你要做哪个tissue吗？
a*9
10 楼
不清楚这个...
【在 L***s 的大作中提到】
: 那也没啥了不起的...还有个education的symposium，啥意思？
【在 L***s 的大作中提到】
: 那也没啥了不起的...还有个education的symposium，啥意思？
n*s
11 楼
装了新的硬件？
我前段时间装了一个无线网卡，什么问题都没有，但是用一会儿就freeze。一开始怀疑
内存或者主板，
因为拔掉内存之后，freeze的时间会靠后一点。最后换了一个无线网卡的driver就好了
。很诡异
【在 w******t 的大作中提到】
: 这个是什么问题？
: 就是突然的reset........
我前段时间装了一个无线网卡，什么问题都没有，但是用一会儿就freeze。一开始怀疑
内存或者主板，
因为拔掉内存之后，freeze的时间会靠后一点。最后换了一个无线网卡的driver就好了
。很诡异
【在 w******t 的大作中提到】
: 这个是什么问题？
: 就是突然的reset........
i*n
12 楼
tetO-Cre可以吗？然后结合tissue-specific rtTA,这样够保险了，只是麻烦。
m*1
13 楼
牛B only if you do not have it.
w*t
14 楼
哦...是DELL的机器，风扇巨响，我就要了一套MOBO+CPU自己装上了
现在风扇安静了，但是总重启..
【在 n*****s 的大作中提到】
: 装了新的硬件？
: 我前段时间装了一个无线网卡，什么问题都没有，但是用一会儿就freeze。一开始怀疑
: 内存或者主板，
: 因为拔掉内存之后，freeze的时间会靠后一点。最后换了一个无线网卡的driver就好了
: 。很诡异
现在风扇安静了，但是总重启..
【在 n*****s 的大作中提到】
: 装了新的硬件？
: 我前段时间装了一个无线网卡，什么问题都没有，但是用一会儿就freeze。一开始怀疑
: 内存或者主板，
: 因为拔掉内存之后，freeze的时间会靠后一点。最后换了一个无线网卡的driver就好了
: 。很诡异
m*5
15 楼
疯了吧，这样他要把三个allele配到一起，一窝里有一只就了不起了，万一挂了，或者
phenotype不够明显要重复
【在 i*****n 的大作中提到】
: tetO-Cre可以吗？然后结合tissue-specific rtTA,这样够保险了，只是麻烦。
phenotype不够明显要重复
【在 i*****n 的大作中提到】
: tetO-Cre可以吗？然后结合tissue-specific rtTA,这样够保险了，只是麻烦。
L*s
16 楼
啥意思？
【在 m****1 的大作中提到】
: 牛B only if you do not have it.
【在 m****1 的大作中提到】
: 牛B only if you do not have it.
a*e
17 楼
dell的mobo么
dell机器电源一般
你到哪一步重起
【在 w******t 的大作中提到】
: 哦...是DELL的机器，风扇巨响，我就要了一套MOBO+CPU自己装上了
: 现在风扇安静了，但是总重启..
dell机器电源一般
你到哪一步重起
【在 w******t 的大作中提到】
: 哦...是DELL的机器，风扇巨响，我就要了一套MOBO+CPU自己装上了
: 现在风扇安静了，但是总重启..
w*e
18 楼
这么做的PAPER已经越来越多了
听正常的，有时候何之三个ALLELES？
【在 m******5 的大作中提到】
: 疯了吧，这样他要把三个allele配到一起，一窝里有一只就了不起了，万一挂了，或者
: phenotype不够明显要重复
听正常的，有时候何之三个ALLELES？
【在 m******5 的大作中提到】
: 疯了吧，这样他要把三个allele配到一起，一窝里有一只就了不起了，万一挂了，或者
: phenotype不够明显要重复
s*g
19 楼
就是说你如果搞到了，也就觉得不nb了
就比如我拿到phd之前觉得拿到phd的都很nb一样
【在 L***s 的大作中提到】
: 啥意思？
就比如我拿到phd之前觉得拿到phd的都很nb一样
【在 L***s 的大作中提到】
: 啥意思？
w*t
20 楼
用着用着in win7,不知道什么时候就死...random的
【在 a***e 的大作中提到】
: dell的mobo么
: dell机器电源一般
: 你到哪一步重起
【在 a***e 的大作中提到】
: dell的mobo么
: dell机器电源一般
: 你到哪一步重起
w*e
21 楼
其实CAG-CREER或者ROSA26-CREER
就能满足你的要求。
你只需要关注你要的组织就可以了
而且MOSAIC的KO 还能在同一个区域找到INTERNAL CONTROL的细胞
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们需要在一个器官里在不同时期来KO 一个基因，
: 不知道有哪个cre line 是比较好用的？
: 我曾经听说过CreER， 就是那个把cre 和Estrogen receptor fuse在一起的
: 那个，可是我问了一个做过这个的人。他给了非常糟糕的评价，说是他们
: 做不出来。
: 请问大家有没有做过类似的事情？有什么更好的推荐么？或者诱导的时候
: 有什么要注意的事项？
就能满足你的要求。
你只需要关注你要的组织就可以了
而且MOSAIC的KO 还能在同一个区域找到INTERNAL CONTROL的细胞
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们需要在一个器官里在不同时期来KO 一个基因，
: 不知道有哪个cre line 是比较好用的？
: 我曾经听说过CreER， 就是那个把cre 和Estrogen receptor fuse在一起的
: 那个，可是我问了一个做过这个的人。他给了非常糟糕的评价，说是他们
: 做不出来。
: 请问大家有没有做过类似的事情？有什么更好的推荐么？或者诱导的时候
: 有什么要注意的事项？
w*t
22 楼
解决了。。。第二块硬盘的SATA接口connector掉了一小块塑料，插不紧
那个connector只要稍微一碰，机器就reset...
【在 a***e 的大作中提到】
: dell的mobo么
: dell机器电源一般
: 你到哪一步重起
那个connector只要稍微一碰，机器就reset...
【在 a***e 的大作中提到】
: dell的mobo么
: dell机器电源一般
: 你到哪一步重起
m*5
23 楼
有什么trick可以加大产量么？
【在 w*e 的大作中提到】
: 这么做的PAPER已经越来越多了
: 听正常的，有时候何之三个ALLELES？
【在 w*e 的大作中提到】
: 这么做的PAPER已经越来越多了
: 听正常的，有时候何之三个ALLELES？
z*u
24 楼
ERT2 。。据说比ER 好。更强效，更特异。
tamoxifen induce的问题在于不会彻底，比如K14-Cre ERT2 在身体不同部位皮肤的诱导效
率就不一样。从30%到 60不等。所以这个诱导后更像是生成一个mosaic.当然了，有人要的就是这种mosaic KO效果。反正KO效果是dosage dependant的。另外
tamoxifen有毒性。剂量需要optimize。我目前做的一个Cre-ERT2 就遇到这个麻烦，在E18
.5打标准剂量Tamoxifen后所有embryo都会在出生后一天内死掉。
tamoxifen induce的问题在于不会彻底，比如K14-Cre ERT2 在身体不同部位皮肤的诱导效
率就不一样。从30%到 60不等。所以这个诱导后更像是生成一个mosaic.当然了，有人要的就是这种mosaic KO效果。反正KO效果是dosage dependant的。另外
tamoxifen有毒性。剂量需要optimize。我目前做的一个Cre-ERT2 就遇到这个麻烦，在E18
.5打标准剂量Tamoxifen后所有embryo都会在出生后一天内死掉。
z*u
25 楼
要做诱导还可以做doxycyclin诱导tTA或者rtTA啊。
比如这样一个
XXX-rtTA;tetO-Cre；XXXfl/fl
虽然是triple transgenic..但是理论讲，在没有诱导
前是没有phenotype, 完全vital的。所以一旦拿到了triple transgenic strain就可以
拿非诱导的mice来keep line以及generate new pups.效率会高很多。我现在在做的耗子就是triple transgenic.如果算上里面的R26R-LacZ reporter那其实是tetra-transgenic.
生成第一个triple transgnic strain需要大概半年时间。
做CMV-Cre全身诱导的问题一来是缺乏tissue specificity.二来那个未必在全身都会有同样的效率。我记得好像CMV-CreER在liver 和lung的效率就不好。反正实在没法了才来这个。
诱导系统目前就doxycyclin和ERT俩了。Jax lab都有。没事上JaxLab网站浏览他们的各种mouse lines很有意思的。
比如这样一个
XXX-rtTA;tetO-Cre；XXXfl/fl
虽然是triple transgenic..但是理论讲，在没有诱导
前是没有phenotype, 完全vital的。所以一旦拿到了triple transgenic strain就可以
拿非诱导的mice来keep line以及generate new pups.效率会高很多。我现在在做的耗子就是triple transgenic.如果算上里面的R26R-LacZ reporter那其实是tetra-transgenic.
生成第一个triple transgnic strain需要大概半年时间。
做CMV-Cre全身诱导的问题一来是缺乏tissue specificity.二来那个未必在全身都会有同样的效率。我记得好像CMV-CreER在liver 和lung的效率就不好。反正实在没法了才来这个。
诱导系统目前就doxycyclin和ERT俩了。Jax lab都有。没事上JaxLab网站浏览他们的各种mouse lines很有意思的。
D*y
26 楼
我用过两种inducible KO
1. CreERT2 (就是第二代的CreER). Cre driven by tissue specific promoter.
我研究骨头。打了tamoxifen （我用oral gavage)10天后就有phenotype。但是
tamoxifen有些副作用，比如增加bone mass.所以需要optimize dosage.另外我用打了
tamoxifende wt mice 作为control,这样可以排除tamoxifen effect.
2. 我用过Tet-Off system. 需要三只老鼠：tissue specific-tTA; TetO-cre,加上你
的conditional 老鼠。喂老鼠doxycyline-containing water or food 直到你想要表达
基因的时候。
3. Teto-ON system:tissue specific-rtTA; TetO-cre,加上你的conditional 老鼠。
喂老鼠doxycyline-containing water or food to induce gene expression。
我做adult inducible knockout。这3种方法都用过，都work.但是tet-off 有点leak（
我研究的是bone).
另外对于第二和第三种方法，你可以查查jax lab,有些tissue specific-tTA (or rtTA
) 和 TetO-cre 是放在一个BAC transgene 上，这样可以提高得到target 老鼠的比例。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们需要在一个器官里在不同时期来KO 一个基因，
: 不知道有哪个cre line 是比较好用的？
: 我曾经听说过CreER， 就是那个把cre 和Estrogen receptor fuse在一起的
: 那个，可是我问了一个做过这个的人。他给了非常糟糕的评价，说是他们
: 做不出来。
: 请问大家有没有做过类似的事情？有什么更好的推荐么？或者诱导的时候
: 有什么要注意的事项？
1. CreERT2 (就是第二代的CreER). Cre driven by tissue specific promoter.
我研究骨头。打了tamoxifen （我用oral gavage)10天后就有phenotype。但是
tamoxifen有些副作用，比如增加bone mass.所以需要optimize dosage.另外我用打了
tamoxifende wt mice 作为control,这样可以排除tamoxifen effect.
2. 我用过Tet-Off system. 需要三只老鼠：tissue specific-tTA; TetO-cre,加上你
的conditional 老鼠。喂老鼠doxycyline-containing water or food 直到你想要表达
基因的时候。
3. Teto-ON system:tissue specific-rtTA; TetO-cre,加上你的conditional 老鼠。
喂老鼠doxycyline-containing water or food to induce gene expression。
我做adult inducible knockout。这3种方法都用过，都work.但是tet-off 有点leak（
我研究的是bone).
另外对于第二和第三种方法，你可以查查jax lab,有些tissue specific-tTA (or rtTA
) 和 TetO-cre 是放在一个BAC transgene 上，这样可以提高得到target 老鼠的比例。
【在 s******y 的大作中提到】
: 我们需要在一个器官里在不同时期来KO 一个基因，
: 不知道有哪个cre line 是比较好用的？
: 我曾经听说过CreER， 就是那个把cre 和Estrogen receptor fuse在一起的
: 那个，可是我问了一个做过这个的人。他给了非常糟糕的评价，说是他们
: 做不出来。
: 请问大家有没有做过类似的事情？有什么更好的推荐么？或者诱导的时候
: 有什么要注意的事项？
D*a
27 楼
不能一棍子打死，现在同一个promoter-Cre的line有好几个实验室在做，每个实验室又
有好几个line，有一个或者几个line不管用很正常。
我们实验室用的一个cre ERT2就挺好的。我们隔壁实验室的cre用了三个没有一个好用
的。
tamoxifen induce彻底不彻底主要还是看tissu和cre的 line，我们在相关部位的KO达
到90%以上。
选line的关键就是知道自己具体想干什么，多看paper，认真比较不同的line。这最后
一句是老板说的。
有好几个line，有一个或者几个line不管用很正常。
我们实验室用的一个cre ERT2就挺好的。我们隔壁实验室的cre用了三个没有一个好用
的。
tamoxifen induce彻底不彻底主要还是看tissu和cre的 line，我们在相关部位的KO达
到90%以上。
选line的关键就是知道自己具体想干什么，多看paper，认真比较不同的line。这最后
一句是老板说的。
s*y
28 楼
你说的有一定道理。
但是这样在另外一方面会导致每只老鼠之间的状态有很大的variation,
碰到挑剔的审稿者就麻烦了。
【在 w*e 的大作中提到】
: 其实CAG-CREER或者ROSA26-CREER
: 就能满足你的要求。
: 你只需要关注你要的组织就可以了
: 而且MOSAIC的KO 还能在同一个区域找到INTERNAL CONTROL的细胞
但是这样在另外一方面会导致每只老鼠之间的状态有很大的variation,
碰到挑剔的审稿者就麻烦了。
【在 w*e 的大作中提到】
: 其实CAG-CREER或者ROSA26-CREER
: 就能满足你的要求。
: 你只需要关注你要的组织就可以了
: 而且MOSAIC的KO 还能在同一个区域找到INTERNAL CONTROL的细胞
s*y
29 楼
是的，tamoxifen 的一个很讨厌的地方就是本身毒性很强，放少了状态不明显
让你没法做统计，放多了就统统都死了让你也没法做统计。
诱导效
人要的就是这种mosaic KO效果。反正KO效果是dosage dependant的。另外
在E18
【在 z****u 的大作中提到】
: ERT2 。。据说比ER 好。更强效，更特异。
: tamoxifen induce的问题在于不会彻底，比如K14-Cre ERT2 在身体不同部位皮肤的诱导效
: 率就不一样。从30%到 60不等。所以这个诱导后更像是生成一个mosaic.当然了，有人要的就是这种mosaic KO效果。反正KO效果是dosage dependant的。另外
: tamoxifen有毒性。剂量需要optimize。我目前做的一个Cre-ERT2 就遇到这个麻烦，在E18
: .5打标准剂量Tamoxifen后所有embryo都会在出生后一天内死掉。
让你没法做统计，放多了就统统都死了让你也没法做统计。
诱导效
人要的就是这种mosaic KO效果。反正KO效果是dosage dependant的。另外
在E18
【在 z****u 的大作中提到】
: ERT2 。。据说比ER 好。更强效，更特异。
: tamoxifen induce的问题在于不会彻底，比如K14-Cre ERT2 在身体不同部位皮肤的诱导效
: 率就不一样。从30%到 60不等。所以这个诱导后更像是生成一个mosaic.当然了，有人要的就是这种mosaic KO效果。反正KO效果是dosage dependant的。另外
: tamoxifen有毒性。剂量需要optimize。我目前做的一个Cre-ERT2 就遇到这个麻烦，在E18
: .5打标准剂量Tamoxifen后所有embryo都会在出生后一天内死掉。
s*y
30 楼
谢谢！
【在 D***y 的大作中提到】
: 我用过两种inducible KO
: 1. CreERT2 (就是第二代的CreER). Cre driven by tissue specific promoter.
: 我研究骨头。打了tamoxifen （我用oral gavage)10天后就有phenotype。但是
: tamoxifen有些副作用，比如增加bone mass.所以需要optimize dosage.另外我用打了
: tamoxifende wt mice 作为control,这样可以排除tamoxifen effect.
: 2. 我用过Tet-Off system. 需要三只老鼠：tissue specific-tTA; TetO-cre,加上你
: 的conditional 老鼠。喂老鼠doxycyline-containing water or food 直到你想要表达
: 基因的时候。
: 3. Teto-ON system:tissue specific-rtTA; TetO-cre,加上你的conditional 老鼠。
: 喂老鼠doxycyline-containing water or food to induce gene expression。
【在 D***y 的大作中提到】
: 我用过两种inducible KO
: 1. CreERT2 (就是第二代的CreER). Cre driven by tissue specific promoter.
: 我研究骨头。打了tamoxifen （我用oral gavage)10天后就有phenotype。但是
: tamoxifen有些副作用，比如增加bone mass.所以需要optimize dosage.另外我用打了
: tamoxifende wt mice 作为control,这样可以排除tamoxifen effect.
: 2. 我用过Tet-Off system. 需要三只老鼠：tissue specific-tTA; TetO-cre,加上你
: 的conditional 老鼠。喂老鼠doxycyline-containing water or food 直到你想要表达
: 基因的时候。
: 3. Teto-ON system:tissue specific-rtTA; TetO-cre,加上你的conditional 老鼠。
: 喂老鼠doxycyline-containing water or food to induce gene expression。
Z*g
31 楼
How about AV or AAV Cre?
s*y
32 楼
病毒很难做到组织性特异啊
【在 Z**********g 的大作中提到】
: How about AV or AAV Cre?
【在 Z**********g 的大作中提到】
: How about AV or AAV Cre?
n*w
33 楼
看你用什么组织和什么promoter了吧。
【在 s******y 的大作中提到】
: 病毒很难做到组织性特异啊
【在 s******y 的大作中提到】
: 病毒很难做到组织性特异啊
D*a
34 楼
特定组织ko和全身ko(或者knock down，或者全身的部分细胞ko), 这个还是不一样的。
很多paper都证明很多变化甚至可以相反。
【在 s******y 的大作中提到】
: 你说的有一定道理。
: 但是这样在另外一方面会导致每只老鼠之间的状态有很大的variation,
: 碰到挑剔的审稿者就麻烦了。
很多paper都证明很多变化甚至可以相反。
【在 s******y 的大作中提到】
: 你说的有一定道理。
: 但是这样在另外一方面会导致每只老鼠之间的状态有很大的variation,
: 碰到挑剔的审稿者就麻烦了。
s*y
35 楼
是啊。问题就在于，如果我们把一些比较不吻合的现象推到cre表达不均匀的头上，
审稿者一般都不肯放过我们。
所以在计划试验的时候我必须尽量避免这种现象。
【在 D*a 的大作中提到】
: 特定组织ko和全身ko(或者knock down，或者全身的部分细胞ko), 这个还是不一样的。
: 很多paper都证明很多变化甚至可以相反。
审稿者一般都不肯放过我们。
所以在计划试验的时候我必须尽量避免这种现象。
【在 D*a 的大作中提到】
: 特定组织ko和全身ko(或者knock down，或者全身的部分细胞ko), 这个还是不一样的。
: 很多paper都证明很多变化甚至可以相反。
D*a
36 楼
你们要是有目标组织的话还是找组织特异性的吧。我觉得这样phenotype好分析，文章
也好写啊。
你还要做几个时间点啊？用不inducible的cre不行么？其实可以先上这个，做出来之后
如果效果好，可以再找inducible的cre 接着往下做啊。如果用tam诱导的话，摸条件就
要摸一阵子，然后如果你要做好几个age的老鼠，还要挨着试试cre的promoter有没有用
，还要考虑你的tam诱导的ko能不能到tissue的stem cell里面（也就是你的tissue更新
之后会不会KO的细胞被新的没KO的细胞换了。）你还有时间做这么多么？而且你打算要
带老鼠走的话，你还要重新取得那个给你们老鼠的人的许可，重新签协议。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: 是啊。问题就在于，如果我们把一些比较不吻合的现象推到cre表达不均匀的头上，
: 审稿者一般都不肯放过我们。
: 所以在计划试验的时候我必须尽量避免这种现象。
也好写啊。
你还要做几个时间点啊？用不inducible的cre不行么？其实可以先上这个，做出来之后
如果效果好，可以再找inducible的cre 接着往下做啊。如果用tam诱导的话，摸条件就
要摸一阵子，然后如果你要做好几个age的老鼠，还要挨着试试cre的promoter有没有用
，还要考虑你的tam诱导的ko能不能到tissue的stem cell里面（也就是你的tissue更新
之后会不会KO的细胞被新的没KO的细胞换了。）你还有时间做这么多么？而且你打算要
带老鼠走的话，你还要重新取得那个给你们老鼠的人的许可，重新签协议。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: 是啊。问题就在于，如果我们把一些比较不吻合的现象推到cre表达不均匀的头上，
: 审稿者一般都不肯放过我们。
: 所以在计划试验的时候我必须尽量避免这种现象。
G*e
37 楼
老鼠实验的variation难道不是经常很大的吗？
是不是大致的phenotypes相似，实验组明显和对照组有区别就可以说明问题了？
【在 s******y 的大作中提到】
: 你说的有一定道理。
: 但是这样在另外一方面会导致每只老鼠之间的状态有很大的variation,
: 碰到挑剔的审稿者就麻烦了。
是不是大致的phenotypes相似，实验组明显和对照组有区别就可以说明问题了？
【在 s******y 的大作中提到】
: 你说的有一定道理。
: 但是这样在另外一方面会导致每只老鼠之间的状态有很大的variation,
: 碰到挑剔的审稿者就麻烦了。
G*e
38 楼
用整体CreER会不会有Cell autonomous的问题
在某个器官看到的问题可能是secondary
比如说肾脏的萎缩，很有可能是心血管系统的问题引起，甚至有可能是胰岛病变引起血
糖异常影响的
不知道这样子做审稿人会不会放过
不知道用整体CreER做成年动物的例子多不多，我比较熟悉的是下面这个。
Cell Stem Cell
Article
Deletion of the Developmentally Essential
Gene ATR in Adult Mice Leads to Age-Related
Phenotypes and Stem Cell Loss
【在 w*e 的大作中提到】
: 其实CAG-CREER或者ROSA26-CREER
: 就能满足你的要求。
: 你只需要关注你要的组织就可以了
: 而且MOSAIC的KO 还能在同一个区域找到INTERNAL CONTROL的细胞
在某个器官看到的问题可能是secondary
比如说肾脏的萎缩，很有可能是心血管系统的问题引起，甚至有可能是胰岛病变引起血
糖异常影响的
不知道这样子做审稿人会不会放过
不知道用整体CreER做成年动物的例子多不多，我比较熟悉的是下面这个。
Cell Stem Cell
Article
Deletion of the Developmentally Essential
Gene ATR in Adult Mice Leads to Age-Related
Phenotypes and Stem Cell Loss
【在 w*e 的大作中提到】
: 其实CAG-CREER或者ROSA26-CREER
: 就能满足你的要求。
: 你只需要关注你要的组织就可以了
: 而且MOSAIC的KO 还能在同一个区域找到INTERNAL CONTROL的细胞
G*e
39 楼
请问能否举个例子，这个挺有意思的。
【在 D*a 的大作中提到】
: 特定组织ko和全身ko(或者knock down，或者全身的部分细胞ko), 这个还是不一样的。
: 很多paper都证明很多变化甚至可以相反。
【在 D*a 的大作中提到】
: 特定组织ko和全身ko(或者knock down，或者全身的部分细胞ko), 这个还是不一样的。
: 很多paper都证明很多变化甚至可以相反。
G*e
40 楼
那能否请问你是想做adult，还是embryonic stage的？
【在 s******y 的大作中提到】
: 嗯，你说的那个f/- 这个方法听起来是不错的点子。
: 我可以试试，因为我们的杂合体本身是正常的。
: 具体哪个tissue在这里不好透露，否则老板会以泄密罪处决我的。呵呵。
:
: work
: KO
【在 s******y 的大作中提到】
: 嗯，你说的那个f/- 这个方法听起来是不错的点子。
: 我可以试试，因为我们的杂合体本身是正常的。
: 具体哪个tissue在这里不好透露，否则老板会以泄密罪处决我的。呵呵。
:
: work
: KO
G*e
41 楼
你说的这个KO被WT细胞take over的情况，可不可以用多次tam注射来解决，比如一个月
一次？
【在 D*a 的大作中提到】
: 你们要是有目标组织的话还是找组织特异性的吧。我觉得这样phenotype好分析，文章
: 也好写啊。
: 你还要做几个时间点啊？用不inducible的cre不行么？其实可以先上这个，做出来之后
: 如果效果好，可以再找inducible的cre 接着往下做啊。如果用tam诱导的话，摸条件就
: 要摸一阵子，然后如果你要做好几个age的老鼠，还要挨着试试cre的promoter有没有用
: ，还要考虑你的tam诱导的ko能不能到tissue的stem cell里面（也就是你的tissue更新
: 之后会不会KO的细胞被新的没KO的细胞换了。）你还有时间做这么多么？而且你打算要
: 带老鼠走的话，你还要重新取得那个给你们老鼠的人的许可，重新签协议。。。
一次？
【在 D*a 的大作中提到】
: 你们要是有目标组织的话还是找组织特异性的吧。我觉得这样phenotype好分析，文章
: 也好写啊。
: 你还要做几个时间点啊？用不inducible的cre不行么？其实可以先上这个，做出来之后
: 如果效果好，可以再找inducible的cre 接着往下做啊。如果用tam诱导的话，摸条件就
: 要摸一阵子，然后如果你要做好几个age的老鼠，还要挨着试试cre的promoter有没有用
: ，还要考虑你的tam诱导的ko能不能到tissue的stem cell里面（也就是你的tissue更新
: 之后会不会KO的细胞被新的没KO的细胞换了。）你还有时间做这么多么？而且你打算要
: 带老鼠走的话，你还要重新取得那个给你们老鼠的人的许可，重新签协议。。。
s*y
42 楼
Adult, adult, adult... 555555
【在 G********e 的大作中提到】
: 那能否请问你是想做adult，还是embryonic stage的？
【在 G********e 的大作中提到】
: 那能否请问你是想做adult，还是embryonic stage的？
D*a
43 楼
酱紫呀
那看来也没有别的办法了。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: Adult, adult, adult... 555555
那看来也没有别的办法了。。。
【在 s******y 的大作中提到】
: Adult, adult, adult... 555555
D*a
44 楼
那就毒死拉，我们这里注射五天，注射的时候体重就下降，注射完过几天才恢复正常。
我上面说的那个ko的，就是比如很多的hormone，如果敲掉receptor，在全身ko/
knockdown，和在某个外周器官敲，和在brain里面ko，很多phenotype都不一样。具体
到paper我还得找找。
【在 G********e 的大作中提到】
: 你说的这个KO被WT细胞take over的情况，可不可以用多次tam注射来解决，比如一个月
: 一次？
我上面说的那个ko的，就是比如很多的hormone，如果敲掉receptor，在全身ko/
knockdown，和在某个外周器官敲，和在brain里面ko，很多phenotype都不一样。具体
到paper我还得找找。
【在 G********e 的大作中提到】
: 你说的这个KO被WT细胞take over的情况，可不可以用多次tam注射来解决，比如一个月
: 一次？
D*a
45 楼
关键是你要不说器官的话这里也没人能给你参考了，不过你都被人肉出来了，估计你说了器官你整个课题就能猜到了呵呵。只有靠你自己搜paper了，像上面那篇有paper搞现象的，这种就比较可信一点。我们也看到过几篇paper用的一个cre有leak的。我们还想跟那个做cre 的要更多的数据，因为我们在做类似的东西，怀疑那些phenotype的来源。人家回信客气了几句就没有下文了。可以理解，呵呵～
k*u
46 楼
要也没用, 有人是给你不好用line的, 这种东西你要了一般就容易是跟人家直接抢
project的. Tet on off 哪个有case就一个work,反正能confirm,有phenotype就行.
说了器官你整个课题就能猜到了呵呵。只有靠你自己搜paper了，像上面那篇有paper搞
现象的，这种就比较可信一点。我们也看到过几篇paper用的一个cre有leak的。我们还
想跟那个做cre 的要更多的
【在 D*a 的大作中提到】
: 关键是你要不说器官的话这里也没人能给你参考了，不过你都被人肉出来了，估计你说了器官你整个课题就能猜到了呵呵。只有靠你自己搜paper了，像上面那篇有paper搞现象的，这种就比较可信一点。我们也看到过几篇paper用的一个cre有leak的。我们还想跟那个做cre 的要更多的数据，因为我们在做类似的东西，怀疑那些phenotype的来源。人家回信客气了几句就没有下文了。可以理解，呵呵～
project的. Tet on off 哪个有case就一个work,反正能confirm,有phenotype就行.
说了器官你整个课题就能猜到了呵呵。只有靠你自己搜paper了，像上面那篇有paper搞
现象的，这种就比较可信一点。我们也看到过几篇paper用的一个cre有leak的。我们还
想跟那个做cre 的要更多的
【在 D*a 的大作中提到】
: 关键是你要不说器官的话这里也没人能给你参考了，不过你都被人肉出来了，估计你说了器官你整个课题就能猜到了呵呵。只有靠你自己搜paper了，像上面那篇有paper搞现象的，这种就比较可信一点。我们也看到过几篇paper用的一个cre有leak的。我们还想跟那个做cre 的要更多的数据，因为我们在做类似的东西，怀疑那些phenotype的来源。人家回信客气了几句就没有下文了。可以理解，呵呵～
i*n
47 楼
什么疯了啊，谁说三只一起做breeding的？
【在 m******5 的大作中提到】
: 疯了吧，这样他要把三个allele配到一起，一窝里有一只就了不起了，万一挂了，或者
: phenotype不够明显要重复
w*e
48 楼
在我们的组织里，我发现有VARIATION，但是不是那么大。
而且有很多高质量的JOURNAL，比如SCIENCE， GENE AND DEVELOPMENT，就接受很多类
似的文章
【在 s******y 的大作中提到】
: 你说的有一定道理。
: 但是这样在另外一方面会导致每只老鼠之间的状态有很大的variation,
: 碰到挑剔的审稿者就麻烦了。
而且有很多高质量的JOURNAL，比如SCIENCE， GENE AND DEVELOPMENT，就接受很多类
似的文章
【在 s******y 的大作中提到】
: 你说的有一定道理。
: 但是这样在另外一方面会导致每只老鼠之间的状态有很大的variation,
: 碰到挑剔的审稿者就麻烦了。
w*e
49 楼
你说的很有道理
但是
这个要看怎么说了，如果按照这个ARGUE，以前的GERMLINE KO 老鼠的研究统统都要怀疑
【在 G********e 的大作中提到】
: 用整体CreER会不会有Cell autonomous的问题
: 在某个器官看到的问题可能是secondary
: 比如说肾脏的萎缩，很有可能是心血管系统的问题引起，甚至有可能是胰岛病变引起血
: 糖异常影响的
: 不知道这样子做审稿人会不会放过
: 不知道用整体CreER做成年动物的例子多不多，我比较熟悉的是下面这个。
: Cell Stem Cell
: Article
: Deletion of the Developmentally Essential
: Gene ATR in Adult Mice Leads to Age-Related
但是
这个要看怎么说了，如果按照这个ARGUE，以前的GERMLINE KO 老鼠的研究统统都要怀疑
【在 G********e 的大作中提到】
: 用整体CreER会不会有Cell autonomous的问题
: 在某个器官看到的问题可能是secondary
: 比如说肾脏的萎缩，很有可能是心血管系统的问题引起，甚至有可能是胰岛病变引起血
: 糖异常影响的
: 不知道这样子做审稿人会不会放过
: 不知道用整体CreER做成年动物的例子多不多，我比较熟悉的是下面这个。
: Cell Stem Cell
: Article
: Deletion of the Developmentally Essential
: Gene ATR in Adult Mice Leads to Age-Related
D*a
50 楼
所以现在大家都玩conditional ko了呀
怀疑
【在 w*e 的大作中提到】
: 你说的很有道理
: 但是
: 这个要看怎么说了，如果按照这个ARGUE，以前的GERMLINE KO 老鼠的研究统统都要怀疑
怀疑
【在 w*e 的大作中提到】
: 你说的很有道理
: 但是
: 这个要看怎么说了，如果按照这个ARGUE，以前的GERMLINE KO 老鼠的研究统统都要怀疑
G*e
51 楼
我干过几次，实验组是几次注射三四个月后陆续死掉了，对照组除了男的睾丸变大，别
的没发现异常。
【在 D*a 的大作中提到】
: 那就毒死拉，我们这里注射五天，注射的时候体重就下降，注射完过几天才恢复正常。
: 我上面说的那个ko的，就是比如很多的hormone，如果敲掉receptor，在全身ko/
: knockdown，和在某个外周器官敲，和在brain里面ko，很多phenotype都不一样。具体
: 到paper我还得找找。
的没发现异常。
【在 D*a 的大作中提到】
: 那就毒死拉，我们这里注射五天，注射的时候体重就下降，注射完过几天才恢复正常。
: 我上面说的那个ko的，就是比如很多的hormone，如果敲掉receptor，在全身ko/
: knockdown，和在某个外周器官敲，和在brain里面ko，很多phenotype都不一样。具体
: 到paper我还得找找。
相关阅读
lipofectamine 2000放到-20度还能用吗paper helpI need a help我是名校的差生求flowjo的下载地址，XP系统，谢了。求助：活性保持问题manuscript editing worklaboratory assistant jobGlory Days of Big Pharma Won't Be Coming Back (soon) (转载)paper helpPaper help那位大侠能推荐作reviewer的机会啊？我赛，2010年美国最佳职业生物学家居然排第四paper help!转基因大米是不是可以针对人种的基因进行特别作用求教 system biology这是学生物的宿命吗？不用IPHONE，真的不好意思了别嘲笑我，请问T80 buffer是什么？求 paper，包子孝敬