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flag tag 难以检测到
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flag tag 难以检测到# Biology - 生物学
w*9
1 楼
update:
自己figure out了， 到下面的网页查询：
https://i94.cbp.dhs.gov/I94/request.html
希望有需要的人可以用。
昨天父母B2入境，敲的章上没有写可以待多久啊，以前都会写几月几日的。这次父母2
本护照都没有，可以让父母待6个月吗？
就怕 比如入境官员在系统里写了待3个月，而我们待了6个月。
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f*e
2 楼
做了个flag-tag fusion protein，在293 transient transfection, 用蛋白本身的抗
体检测是一大坨，q-pcr 表达也是有几十倍的升高。
但是就是用M2 beads IP不下来或者极少。
然后用flag 抗体检测，居然多次检测不到。最后是在疯狂一下地翻了10倍的二抗量 膜
都要压爆了才压出来条带正确的带，大小正确，量也与基因本身的抗体显示的量对应。
这在本实验室在293瞬转检测中似乎从来没有遇到过。
难道是flag跟我的蛋白在一起就难以检测？ 甚至在denature gel中？
那在nature状态下更难结合？所以IP失败？
求教，
非常感谢
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t*y
4 楼
不同的蛋白表现不同。你这个蛋白是在哪里表达的？Flag在C末端还是N末端，如果是N
末端，是否存在信号肽，通常信号肽在表达过程中会被切除。还有一种情况是M2抗体对
位于N末端的Flag识别效率远远超过位于C末端的Flag，是否可以把Flag放到N末端。
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f*e
5 楼
flag在N端。
后面接着蛋白自己的M，但是既然可以检测到，所以flag还在啊。
谢谢
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f*e
6 楼
flag在N端。
后面接着蛋白自己的M，但是既然可以检测到，所以flag还在啊。
谢谢
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t*y
7 楼
如果蛋白N端有信号肽，Flag连着信号肽，信号肽的切除不是100%，但也是绝大多数，
如果碰到这种情况检测不到就很正常了。或者下次你用MG132来抑制蛋白降解。看看目
标蛋白的量是否上去。

【在 f*******e 的大作中提到】
: flag在N端。
: 后面接着蛋白自己的M，但是既然可以检测到，所以flag还在啊。
: 谢谢
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f*e
8 楼
信号肽的切除是蛋白酶体途径？ 我不懂这个
怎么看是否有信号肽，预测？或有特征氨基酸谱？
谢谢

【在 t******y 的大作中提到】
: 如果蛋白N端有信号肽，Flag连着信号肽，信号肽的切除不是100%，但也是绝大多数，
: 如果碰到这种情况检测不到就很正常了。或者下次你用MG132来抑制蛋白降解。看看目
: 标蛋白的量是否上去。
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f*e
9 楼
信号肽的切除是蛋白酶体途径？ 我不懂这个
怎么看是否有信号肽，预测？或有特征氨基酸谱？
谢谢

【在 t******y 的大作中提到】
: 如果蛋白N端有信号肽，Flag连着信号肽，信号肽的切除不是100%，但也是绝大多数，
: 如果碰到这种情况检测不到就很正常了。或者下次你用MG132来抑制蛋白降解。看看目
: 标蛋白的量是否上去。
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t*y
10 楼
一般在内质网，细胞表面表达的蛋白有信号肽。可以用signal peptide prediction软
件查询。通常信号肽都是一下疏水性的氨基酸组成，譬如大量的亮氨酸，L。
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