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IP的elution

IP的elution# Biology - 生物学

t*g2011-11-14 08:11

1 楼

请问大家做IP最后elution一步都用什么条件？我们实验室的protocol是用将最后一步
wash的buffer remove掉几乎没有，然后加15-20ul 5x SDS loading buffer在沸水里放
10分钟。这时间是不是太长了？温度是不是太高了？
好奇问一句，有不用高温加热的吗？听做proteomics的说，加热会产生抗体的片断，
干扰做mass spec。如果想elute出protein(s）做MS，该用什么elution 条件呢？

c*r2011-11-14 08:11

2 楼

1） crosslink your antibody with the beads
2) elute with 0.1M glycine(pH 2.5)

K*S2011-11-14 08:11

3 楼

depends on what do you want to do with MS, just ID the proteins or PTM
analysis.

【在 t****g 的大作中提到】

: 请问大家做IP最后elution一步都用什么条件？我们实验室的protocol是用将最后一步
: wash的buffer remove掉几乎没有，然后加15-20ul 5x SDS loading buffer在沸水里放
: 10分钟。这时间是不是太长了？温度是不是太高了？
: 好奇问一句，有不用高温加热的吗？听做proteomics的说，加热会产生抗体的片断，
: 干扰做mass spec。如果想elute出protein(s）做MS，该用什么elution 条件呢？