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请教关于recombineering筛选的问题:如同中彩票
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请教关于recombineering筛选的问题:如同中彩票# Biology - 生物学
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「太不可思议了!」柏卡西医师以其惯有的柔和声调重复道:「这真是太不可思议了!
我见过许多人去世,但没有像这样子的。」他指的是我的阿姨,也是我的养母拉咪黛维
。 确是如此,母亲生病和去世的过程真是不可思议。 在她七十五岁那年,大约过世前
十五天左右,她和伊莱琦黛维(即葛印卡老师夫人)闲聊的时候,提到下腹部已经疼痛
了好几个月。 虽然她可以忍受,并且保持平等心,但偶然间提起这回事。
我立刻打电话给我们的家庭医师,也是我的至交柏卡西医师。 事实上,柏卡西医师早
已俨然是家中的一分子了。 他替母亲做了检查,然后将我拉到一旁说:「很有可能是
肝癌。从症状看来,这样的诊断应该是没错,只是如果真的是肝癌,那种痛苦是难以忍
受的,病人会难过得哀号痛哭。没有人可以默默忍受这种癌症的痛苦好几个月,却不告
诉别人。但是你母亲看起来这么平静,我想我得进一步检查看看。」
两天之后,柏卡西医师和仰光的名医明贤上校一起来为母亲检查。 检查以后,明贤医
师也说:「照情况来看是癌症末期,但是病人这么平静,一点也不痛苦的样子,实在很
难让人相信她得的是癌症。我们得再做进一步的检验才能判断。」
他们离开之后,伊莱琦黛维问母亲:「那种疼痛是什么感觉?」母亲的回答出乎大家意
料之外:「比女人生产的剧痛还要厉害得多。但是哭又有什么用呢?我用平等心来观察
我身上的疼痛。想想,乌巴庆老师不就是这样教我们的吗?」
母亲是一位了不起的内观禅修者。 在我的恩师乌巴庆老师的静坐中心,每个月只举办
一次十日课程,从每月的第一个星期五开始。 母亲大约六、七年前开始接触内观,自
从那时候开始,她就没有错过任何一次的课程。 最近她参加了一个特别的三十日课程
,平等心得到高度的发展,以致于能够不为病痛所苦。
经过许多检验之后,两位医师都确定是癌症,而且已经是末期了。 他们认为母亲已去
日无多,任何的治疗不仅无效,只会徒增痛苦。 不过,他们继续为母亲做癌症末期的
安宁疗护。
母亲过世当天的凌晨三点钟,她觉得自己的时候快到了,就请护士帮忙通知她的孩子。
大家全都聚集到她的房间,我立刻打电话给柏卡西医师,他还未就寝,因为两个钟头
前他才出诊去看一个临终的病人。 虽然如此,他还是立刻赶来我家。 我也打电话给乌
巴庆老师,非常感恩的是,老师和萨雅玛师母也赶到了我家。
柏卡西医师检查了一下,但已测不到母亲的脉搏。 母亲只剩下最后几分钟了。 就在她
去世之前,她说:「我想坐起来。」柏卡西医师阻止她,并说:「最好是躺着。如果坐
起来,疼痛会加剧。」但是母亲坚持。 我心想这是母亲最后的心愿,于是就扶着她,
让她可以如愿坐起身。 出乎大家意料之外,母亲竟然勉强盘起腿开始静坐! 法的力量
真是伟大!
前一刻母亲的脉搏已经微弱到测不出来,而这一刻她却盘腿静坐起来! 为了加强她禅
修的决心,我用缅甸话对她说:「Taima,anaissa,anaissa–姨妈,无常,无常。」她
举起右手,摸着头顶说道:「是啊!儿子!无常,无常! 」然后她缓缓把手放下,看
看我,看看柏卡西医师,看看乌巴庆老师和师母,向上凝望,寂然而逝。
这样一幕逝世的景象震撼了柏卡西医师。 当时大约是凌晨四点二十分。 根据印度传统
,我们将母亲的遗体从床上移至地板上。 我们必须等其他人都到齐之后,才能开始举
行葬礼。 住在仰光的亲戚,还有其他乡亲,大约可在八点半以前到达。 这期间,柏卡
西医师和我们一起待在旁边的一间静坐室,大家不停地谈论著这不寻常的过程。
我们准备前往火葬场时已经接近八点半了。 遗体需要先沐浴、换上新的衣服,才能放
到棺架上。 伊莱琦黛维到母亲的房间为她沐浴更衣,但却立刻回来,并且说了令众人
大吃一惊的话:母亲还活着! 柏卡西医师说:「这怎么可能呢?」伊莱琦黛维解释道
,母亲的身体依旧柔软温暖,完全不像已经过世了。
大家跟着柏卡西医师回到母亲的房间。 他仔细地检查了母亲的身体,并说母亲是已经
过世了,但是她整个身体依旧温暖。 她的脸色极为平静安祥,散发出神圣的光辉,看
来就像是熟睡一般。 而柏卡西医师就是在这个时候发出赞叹之语:「太不可思议了!
」虽然毫无疑问地母亲已经去世了,但是这奇特的现象该如何解释呢? 我也无法形容。
举行了葬礼之后我们返家。 因为全家人都是内观修行者,所以没有一个人哭泣。 我大
部分时间都在静坐,以维持一个法的气氛。 傍晚之前,城里所有的内观修行人都聚集
在一起共修一小时,乌巴庆老师以及师母也参加了。 集体共修一小时后,其他不是内
观修行者的亲友也来了。 在乌巴庆老师的同意下,我讲了一个钟头的法的开示。 听完
开示之后,柏卡西医师立刻上前对我说,他想参加课程,他问我:「请告诉我下一次课
程什么时候开始。」课程大约是在十五天后开始。 我向他保证,我会在事前提醒他。
第二天的傍晚同样有一场法的开示。 开示之后,柏卡西医师再度上前对我说:「下一
次课程还要等好一阵子,我希望可以尽快参加课程。」乌巴庆老师恰巧站在旁边,他看
到柏卡西医师强烈的求法之心,于是同意立刻为他办一次课程。 我们感到很意外,乌
巴庆老师竟然会为了一个人办一次课程。 老师并指示我隔天和柏卡西医师一同前往内
观中心。
隔天柏卡西医师到了内观中心,我也准时抵达。 另有两个人也参加了课程。 在传授了
观息法以后,我返回家中,而乌巴庆老师则去上班。 一如往常,乌巴庆老师在傍晚时
分回到内观中心,之后到我家来带领集体静坐。 开示之后他告诉我,柏卡西医师进步
地非常快,我听了满心欢喜。
第二天早晨我接到乌巴庆老师的召唤:「你的朋友累积了许多波罗蜜!仅仅练习了一天
的观息法,他已经可以学习内观了!马上过来,我必须要立刻传授他内观。」我赶去中
心参加给柏卡西医师的内观传授,之后才回家。 乌巴庆老师在傍晚时再度来家中静坐
并开示。 老师非常高兴,他说柏卡西医师在一天的内观练习之后,已经达到bhanga全
身消融的境界,现在已经进入非常深的层次。
第三天早上老师又打电话给我:「赶快过来,你的朋友进展神速,他似乎有累世的波罗
蜜,已经达到接近涅槃的境界了。我现在必须传授他一些必要的指导。」我非常的快乐
,立刻赶往内观中心,坐在乌巴庆老师的旁边。 柏卡西医师接受了进一步的指导,并
且立刻体证了涅槃,也就是超越感官的境界。 我的喜悦真是难以言传。 乌巴庆老师也
非常高兴,他仔细地检查了柏卡西医师,发现所有迹象都显示这是涅槃的境界。 我欣
喜万分,我的挚友已经进入解脱之流,成为须陀洹,一个神圣的人。
我和柏卡西医师初识于1947年二次大战之后在仰光的一次会议之中,并且很快地成为莫
逆之交。 我感到很幸运,因为我在社交场合中认识的朋友都是善良的人,而且我和他
们都相处融洽。 但是在所有的朋友之中,柏卡西医师和我最亲近。 我们曾经在许多工
作岗位密切合作。 战后,我们重建了「全缅印度文学社」,在全国各地设有分社,每
个星期并且在仰光举办印度文学讨论会。 为了「印度文学社」初级、中级、以及高级
的研究,我们办了多所印度文大学,许多学生参与研究的工作。 我们并且进行缅甸文
学与印度文学的交流;著作并出版印度文教科书;成立了「印-缅文化中心」,透过该
中心筹办了许多文化活动。 经由共同的努力,我们还办了一所孤儿院,并负责该院的
管理。 我们一起为公益活动付出心力,而现在我们有机会可以一同为内观尽力。
柏卡西医师也治疗过我的偏头痛。 当药石罔效时,他开始为我注射吗啡,但他担心我
会对吗啡上瘾,所以不时催促我出国去治疗。 他说:「即使治不好偏头痛,至少找个
办法不再依赖吗啡。国外一定可以找到其他有效的止痛方法。」由于他的建议,我遍访
各国寻找处方,但是最后却失望而回。 柏卡西医师对此感同身受。 因此,当我参加内
观课程且因而解除了偏头痛之苦,他也同感欣慰。
但是当我一再地参加课程,并且开始天天静坐、参加内观中心每周日的集体共修时,他
开始担心我会改信佛教成为一个无神论者。 他时常善巧地试着劝退我,我向他解释:
「我深受AryaSamaj(编者按:印度教的改革运动)的影响,绝对不会盲目信仰任何宗教
。我很客观地以亲身体验实相的方式检查了佛陀的教导,发现它毫无瑕疵。这么多世纪
以来,错误的刻板印象使得印度人无缘接触佛陀完美的教导,我自己就是这种错误宣传
的牺牲品。我很讶异这属于印度的纯净、无价的方法,竟然在它的起源地失传了。」我
不知道我当时的话对他有多少影响,但在我母亲过世之后,他累世的波罗蜜被唤醒,使
他最终对这个方法奉献心力。
1969年我回到印度,并且开始举办内观课程,但是柏卡西医师在缅甸多待了几年。 即
使经历了一些极端痛苦的事情,他的心也不曾为之动摇。 他甚至没有对总统—他的大
学同学—揭露某些政府官员对他的不义行为。 他始终充满了慈悲及平等心,因为内观
是他心中的堡垒。 过去的他天性就是平静安稳;如今内观的修练让他的平等心更加稳
固。 数年之后,他也到了印度,并且开始参与内观的推动。
柏卡西医师是缅甸的名医,但由于乐善好施的天性,使他开业行医都是以服务为宗旨。
他不收固定的医药费,无论病人付得出多少钱,他都欣然接受。 对于许多穷困的病人
,他更是分文不收,免费替他们治病。 这是他与生俱来的特质。 来到印度之后,只要
他到了德里,就会到AryaSamaj诊所义诊,一天两小时。 其他时间就尽心尽力为内观服
务。 即使高龄八十七岁,他仍四处旅行,以无比的热诚带领课程,比起年轻人来有过
之而无不及。 他同时数度出国带领课程。
最近他再度前往美国指导许多课程。 他的行程包括洛杉矶、堪萨斯市、然后到
DhammaKunja(近西雅图)、以及DhammaSiri(近达拉斯)带领课程。 然而他到洛杉矶时却
中风了。 当他被送到医院,他神智清楚地对主治医师解释自己的情况,但说到一半就
陷入昏迷。 他在加护病房中昏迷了数日。 那时我正在东南亚之行的途中,我到达新加
坡收到他病危的消息,就立刻打电话联络并为他修慈悲观。 但是根据和他在一起的女
婿梭尼博士说,没有任何生理上的征兆显示慈悲观对他产生了效果。 他说:「他的大
脑完全没有运作,所以也没有那个感官在运作。」我听了心中一片黯然。 但就在逝世
前几分钟,他似乎恢复了听觉。 当时法的开示的录音带不停地播放着。 他的儿子拉吉
夫博士说,在最后的片刻,他的双眼微微张开,嘴唇稍稍动了一下,眼睛似乎凝视着上
方,然后呼吸开始变得缓慢,一分钟九次。 他的呼吸慢慢减缓,直到平静地呼出最后
一口气。 他的脸上散发出神圣的光辉。 由此我们可以知道,他的神智一直都很清楚,
只是他可能想要移动身体,却无法做到。 临终前,法的力量生起,他睁开眼睛、移动
嘴唇,来证明内在的神智是醒着的。
当我结束长程的东南亚七国之行回到孟买,在厚厚一叠等着我阅读的文件中,有一封他
在8月26日所写的信。 信中提到洛杉矶之行,详叙他所带领的课程,并请我为他修慈悲
观。
他为法所做的服务非常有成效。 许多内观中心都热切盼望他能去带领课程,美国的学
生也非常期待他的到来。 但就在为法服务的旅途中,他撒手人寰,证入更高的境界,
人们只有引领期盼了。 读了他的信之后,我深深叹了一口气,脑海中自动浮现出这句
话:世界正在专注聆听你所说的故事,而你说着说着却睡着了!
世界内观家庭的人数与日俱增,但是我的正法兄弟却日渐凋零。 直接受教于乌巴庆老
师的现在还有几人? 我的这位正法兄弟圆满了他的使命:「让我为法服务直到生命的
尽头。」
我深深感恩能有这么一位正法兄弟。
柏卡西医师为所有内观禅修者以及内观老师们树立的典范,将会成为后世的名灯。 他
给我们的启示将为众生带来利益、带来快乐。 印度将会恢复它昔日的光辉与尊严,为
全世界带来最大的福祉。
无比清新的宁静
有一次我去北印度进行法的旅途,在欧‧柏卡西医师(Dr Om Prakashji)的德里
居处住了二天。 他让出他的卧房给我们,自己则睡到隔壁房间。 隔天早上,我和他一
起在他卧房的床上静坐。 一小时静坐快结束时,突然从他那儿散发出一阵无以伦比涅
槃般的宁静,充满着整个房间。 静坐结束后,他谦卑地说:「今天能与您一起静坐,
真是有福,我体验到无比清新的宁静。」我回答:「您最清楚您自己的体验,然而在经
验到您涅槃般的宁静后,我才真是有福啊!」
《再会正法兄弟--纪念柏卡西医师(1912-1998)》 葛印卡老师讲
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s*a
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又来请教大家关于recombineering的问题了。因为重组是一个小概率事件(就算在重组
酶存在的情况下),所以就需要有筛选的策略。最简便高效的方法可以导入一个loxP-
Neo-loxP用于positive selection,最后可以利用cre重组酶去掉Neo。缺点是会留下一
个loxP位点,也不利于在该位点进行进一步的遗传操作。
鉴于此,我们决定采用positive/negative selection的方法进行recombineering。2种
常用方法包括galK筛选和rpsL-Kana筛选。我目前采用的是rpsL-Kana方法,Kana 使细
菌对Kanamycin有抗性,rpsL是细菌对streptomycin敏感。第一步recombineering
select “kana resistance”;第二步reombineering counter-select rpsL。
经过第一步,克隆PCR鉴定可以有95%正确率,即基本上所有克隆都带有重组的rpsL-
Kana。但是第二步(将rpsL-Kana替换为insert),获得阳性克隆如同中彩票一样,概
率很低。筛200-300的克隆也得不到一个阳性的(另外一个PhD的课题,同样的系统)。
这个成功率与文献报道的1%-29%(平均约15%)相差太远。与第一步相比,第二步的阳
性率低的一个合理解释是一些非特异的分子内重组等也会导致loss of rpsL-Kana
cassette,从而是细菌对streptomycin不敏感,成为背景。因此我做了这样的实验:将
第一步得到的阳性克隆(带有rpsL-Kana,理论上对streptomycin敏感),用含有不同
浓度(200ug/ml-2.5mg/ml)streptomycin的LB培养,高达2.5mg/ml的streptomycin也不
能抑制细菌生长(和没有streptomycin的一样)。
现在我就不能理解为什么在没有诱导重组蛋白表达的情况下这些rpsL-Kana克隆都对
streptomycin不敏感呢。各位有经验的同仁能否指点一下在下该怎么办呢?
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随喜赞叹!

【在 r****r 的大作中提到】
: 「太不可思议了!」柏卡西医师以其惯有的柔和声调重复道:「这真是太不可思议了!
: 我见过许多人去世,但没有像这样子的。」他指的是我的阿姨,也是我的养母拉咪黛维
: 。 确是如此,母亲生病和去世的过程真是不可思议。 在她七十五岁那年,大约过世前
: 十五天左右,她和伊莱琦黛维(即葛印卡老师夫人)闲聊的时候,提到下腹部已经疼痛
: 了好几个月。 虽然她可以忍受,并且保持平等心,但偶然间提起这回事。
: 我立刻打电话给我们的家庭医师,也是我的至交柏卡西医师。 事实上,柏卡西医师早
: 已俨然是家中的一分子了。 他替母亲做了检查,然后将我拉到一旁说:「很有可能是
: 肝癌。从症状看来,这样的诊断应该是没错,只是如果真的是肝癌,那种痛苦是难以忍
: 受的,病人会难过得哀号痛哭。没有人可以默默忍受这种癌症的痛苦好几个月,却不告
: 诉别人。但是你母亲看起来这么平静,我想我得进一步检查看看。」

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x*u
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Check your strain background. Do a negative control without rpsL-Kana and
see if your strain is still resistant to streptomycin. I guess your strain
is already carrying some genetic element which make them not sensitive to
stretomycin.
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S*U
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sadhu!sadhu!sadhu!
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R*t
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You can read this recent paper:
http://www.nature.com/nmeth/journal/vaop/ncurrent/full/nmeth.18

【在 s******a 的大作中提到】
: 又来请教大家关于recombineering的问题了。因为重组是一个小概率事件(就算在重组
: 酶存在的情况下),所以就需要有筛选的策略。最简便高效的方法可以导入一个loxP-
: Neo-loxP用于positive selection,最后可以利用cre重组酶去掉Neo。缺点是会留下一
: 个loxP位点,也不利于在该位点进行进一步的遗传操作。
: 鉴于此,我们决定采用positive/negative selection的方法进行recombineering。2种
: 常用方法包括galK筛选和rpsL-Kana筛选。我目前采用的是rpsL-Kana方法,Kana 使细
: 菌对Kanamycin有抗性,rpsL是细菌对streptomycin敏感。第一步recombineering
: select “kana resistance”;第二步reombineering counter-select rpsL。
: 经过第一步,克隆PCR鉴定可以有95%正确率,即基本上所有克隆都带有重组的rpsL-
: Kana。但是第二步(将rpsL-Kana替换为insert),获得阳性克隆如同中彩票一样,概

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「太不可思议了!」柏卡西医师以其惯有的柔和声调重复道:「这真是太不可思议了!
我见过许多人去世,但没有像这样子的。」他指的是我的阿姨,也是我的养母拉咪黛维
。 确是如此,母亲生病和去世的过程真是不可思议。 在她七十五岁那年,大约过世前
十五天左右,她和伊莱琦黛维(即葛印卡老师夫人)闲聊的时候,提到下腹部已经疼痛
了好几个月。 虽然她可以忍受,并且保持平等心,但偶然间提起这回事。
我立刻打电话给我们的家庭医师,也是我的至交柏卡西医师。 事实上,柏卡西医师早
已俨然是家中的一分子了。 他替母亲做了检查,然后将我拉到一旁说:「很有可能是
肝癌。从症状看来,这样的诊断应该是没错,只是如果真的是肝癌,那种痛苦是难以忍
受的,病人会难过得哀号痛哭。没有人可以默默忍受这种癌症的痛苦好几个月,却不告
诉别人。但是你母亲看起来这么平静,我想我得进一步检查看看。」
两天之后,柏卡西医师和仰光的名医明贤上校一起来为母亲检查。 检查以后,明贤医
师也说:「照情况来看是癌症末期,但是病人这么平静,一点也不痛苦的样子,实在很
难让人相信她得的是癌症。我们得再做进一步的检验才能判断。」
他们离开之后,伊莱琦黛维问母亲:「那种疼痛是什么感觉?」母亲的回答出乎大家意
料之外:「比女人生产的剧痛还要厉害得多。但是哭又有什么用呢?我用平等心来观察
我身上的疼痛。想想,乌巴庆老师不就是这样教我们的吗?」
母亲是一位了不起的内观禅修者。 在我的恩师乌巴庆老师的静坐中心,每个月只举办
一次十日课程,从每月的第一个星期五开始。 母亲大约六、七年前开始接触内观,自
从那时候开始,她就没有错过任何一次的课程。 最近她参加了一个特别的三十日课程
,平等心得到高度的发展,以致于能够不为病痛所苦。
经过许多检验之后,两位医师都确定是癌症,而且已经是末期了。 他们认为母亲已去
日无多,任何的治疗不仅无效,只会徒增痛苦。 不过,他们继续为母亲做癌症末期的
安宁疗护。
母亲过世当天的凌晨三点钟,她觉得自己的时候快到了,就请护士帮忙通知她的孩子。
大家全都聚集到她的房间,我立刻打电话给柏卡西医师,他还未就寝,因为两个钟头
前他才出诊去看一个临终的病人。 虽然如此,他还是立刻赶来我家。 我也打电话给乌
巴庆老师,非常感恩的是,老师和萨雅玛师母也赶到了我家。
柏卡西医师检查了一下,但已测不到母亲的脉搏。 母亲只剩下最后几分钟了。 就在她
去世之前,她说:「我想坐起来。」柏卡西医师阻止她,并说:「最好是躺着。如果坐
起来,疼痛会加剧。」但是母亲坚持。 我心想这是母亲最后的心愿,于是就扶着她,
让她可以如愿坐起身。 出乎大家意料之外,母亲竟然勉强盘起腿开始静坐! 法的力量
真是伟大!
前一刻母亲的脉搏已经微弱到测不出来,而这一刻她却盘腿静坐起来! 为了加强她禅
修的决心,我用缅甸话对她说:「Taima,anaissa,anaissa–姨妈,无常,无常。」她
举起右手,摸着头顶说道:「是啊!儿子!无常,无常! 」然后她缓缓把手放下,看
看我,看看柏卡西医师,看看乌巴庆老师和师母,向上凝望,寂然而逝。
这样一幕逝世的景象震撼了柏卡西医师。 当时大约是凌晨四点二十分。 根据印度传统
,我们将母亲的遗体从床上移至地板上。 我们必须等其他人都到齐之后,才能开始举
行葬礼。 住在仰光的亲戚,还有其他乡亲,大约可在八点半以前到达。 这期间,柏卡
西医师和我们一起待在旁边的一间静坐室,大家不停地谈论著这不寻常的过程。
我们准备前往火葬场时已经接近八点半了。 遗体需要先沐浴、换上新的衣服,才能放
到棺架上。 伊莱琦黛维到母亲的房间为她沐浴更衣,但却立刻回来,并且说了令众人
大吃一惊的话:母亲还活着! 柏卡西医师说:「这怎么可能呢?」伊莱琦黛维解释道
,母亲的身体依旧柔软温暖,完全不像已经过世了。
大家跟着柏卡西医师回到母亲的房间。 他仔细地检查了母亲的身体,并说母亲是已经
过世了,但是她整个身体依旧温暖。 她的脸色极为平静安祥,散发出神圣的光辉,看
来就像是熟睡一般。 而柏卡西医师就是在这个时候发出赞叹之语:「太不可思议了!
」虽然毫无疑问地母亲已经去世了,但是这奇特的现象该如何解释呢? 我也无法形容。
举行了葬礼之后我们返家。 因为全家人都是内观修行者,所以没有一个人哭泣。 我大
部分时间都在静坐,以维持一个法的气氛。 傍晚之前,城里所有的内观修行人都聚集
在一起共修一小时,乌巴庆老师以及师母也参加了。 集体共修一小时后,其他不是内
观修行者的亲友也来了。 在乌巴庆老师的同意下,我讲了一个钟头的法的开示。 听完
开示之后,柏卡西医师立刻上前对我说,他想参加课程,他问我:「请告诉我下一次课
程什么时候开始。」课程大约是在十五天后开始。 我向他保证,我会在事前提醒他。
第二天的傍晚同样有一场法的开示。 开示之后,柏卡西医师再度上前对我说:「下一
次课程还要等好一阵子,我希望可以尽快参加课程。」乌巴庆老师恰巧站在旁边,他看
到柏卡西医师强烈的求法之心,于是同意立刻为他办一次课程。 我们感到很意外,乌
巴庆老师竟然会为了一个人办一次课程。 老师并指示我隔天和柏卡西医师一同前往内
观中心。
隔天柏卡西医师到了内观中心,我也准时抵达。 另有两个人也参加了课程。 在传授了
观息法以后,我返回家中,而乌巴庆老师则去上班。 一如往常,乌巴庆老师在傍晚时
分回到内观中心,之后到我家来带领集体静坐。 开示之后他告诉我,柏卡西医师进步
地非常快,我听了满心欢喜。
第二天早晨我接到乌巴庆老师的召唤:「你的朋友累积了许多波罗蜜!仅仅练习了一天
的观息法,他已经可以学习内观了!马上过来,我必须要立刻传授他内观。」我赶去中
心参加给柏卡西医师的内观传授,之后才回家。 乌巴庆老师在傍晚时再度来家中静坐
并开示。 老师非常高兴,他说柏卡西医师在一天的内观练习之后,已经达到bhanga全
身消融的境界,现在已经进入非常深的层次。
第三天早上老师又打电话给我:「赶快过来,你的朋友进展神速,他似乎有累世的波罗
蜜,已经达到接近涅槃的境界了。我现在必须传授他一些必要的指导。」我非常的快乐
,立刻赶往内观中心,坐在乌巴庆老师的旁边。 柏卡西医师接受了进一步的指导,并
且立刻体证了涅槃,也就是超越感官的境界。 我的喜悦真是难以言传。 乌巴庆老师也
非常高兴,他仔细地检查了柏卡西医师,发现所有迹象都显示这是涅槃的境界。 我欣
喜万分,我的挚友已经进入解脱之流,成为须陀洹,一个神圣的人。
我和柏卡西医师初识于1947年二次大战之后在仰光的一次会议之中,并且很快地成为莫
逆之交。 我感到很幸运,因为我在社交场合中认识的朋友都是善良的人,而且我和他
们都相处融洽。 但是在所有的朋友之中,柏卡西医师和我最亲近。 我们曾经在许多工
作岗位密切合作。 战后,我们重建了「全缅印度文学社」,在全国各地设有分社,每
个星期并且在仰光举办印度文学讨论会。 为了「印度文学社」初级、中级、以及高级
的研究,我们办了多所印度文大学,许多学生参与研究的工作。 我们并且进行缅甸文
学与印度文学的交流;著作并出版印度文教科书;成立了「印-缅文化中心」,透过该
中心筹办了许多文化活动。 经由共同的努力,我们还办了一所孤儿院,并负责该院的
管理。 我们一起为公益活动付出心力,而现在我们有机会可以一同为内观尽力。
柏卡西医师也治疗过我的偏头痛。 当药石罔效时,他开始为我注射吗啡,但他担心我
会对吗啡上瘾,所以不时催促我出国去治疗。 他说:「即使治不好偏头痛,至少找个
办法不再依赖吗啡。国外一定可以找到其他有效的止痛方法。」由于他的建议,我遍访
各国寻找处方,但是最后却失望而回。 柏卡西医师对此感同身受。 因此,当我参加内
观课程且因而解除了偏头痛之苦,他也同感欣慰。
但是当我一再地参加课程,并且开始天天静坐、参加内观中心每周日的集体共修时,他
开始担心我会改信佛教成为一个无神论者。 他时常善巧地试着劝退我,我向他解释:
「我深受AryaSamaj(编者按:印度教的改革运动)的影响,绝对不会盲目信仰任何宗教
。我很客观地以亲身体验实相的方式检查了佛陀的教导,发现它毫无瑕疵。这么多世纪
以来,错误的刻板印象使得印度人无缘接触佛陀完美的教导,我自己就是这种错误宣传
的牺牲品。我很讶异这属于印度的纯净、无价的方法,竟然在它的起源地失传了。」我
不知道我当时的话对他有多少影响,但在我母亲过世之后,他累世的波罗蜜被唤醒,使
他最终对这个方法奉献心力。
1969年我回到印度,并且开始举办内观课程,但是柏卡西医师在缅甸多待了几年。 即
使经历了一些极端痛苦的事情,他的心也不曾为之动摇。 他甚至没有对总统—他的大
学同学—揭露某些政府官员对他的不义行为。 他始终充满了慈悲及平等心,因为内观
是他心中的堡垒。 过去的他天性就是平静安稳;如今内观的修练让他的平等心更加稳
固。 数年之后,他也到了印度,并且开始参与内观的推动。
柏卡西医师是缅甸的名医,但由于乐善好施的天性,使他开业行医都是以服务为宗旨。
他不收固定的医药费,无论病人付得出多少钱,他都欣然接受。 对于许多穷困的病人
,他更是分文不收,免费替他们治病。 这是他与生俱来的特质。 来到印度之后,只要
他到了德里,就会到AryaSamaj诊所义诊,一天两小时。 其他时间就尽心尽力为内观服
务。 即使高龄八十七岁,他仍四处旅行,以无比的热诚带领课程,比起年轻人来有过
之而无不及。 他同时数度出国带领课程。
最近他再度前往美国指导许多课程。 他的行程包括洛杉矶、堪萨斯市、然后到
DhammaKunja(近西雅图)、以及DhammaSiri(近达拉斯)带领课程。 然而他到洛杉矶时却
中风了。 当他被送到医院,他神智清楚地对主治医师解释自己的情况,但说到一半就
陷入昏迷。 他在加护病房中昏迷了数日。 那时我正在东南亚之行的途中,我到达新加
坡收到他病危的消息,就立刻打电话联络并为他修慈悲观。 但是根据和他在一起的女
婿梭尼博士说,没有任何生理上的征兆显示慈悲观对他产生了效果。 他说:「他的大
脑完全没有运作,所以也没有那个感官在运作。」我听了心中一片黯然。 但就在逝世
前几分钟,他似乎恢复了听觉。 当时法的开示的录音带不停地播放着。 他的儿子拉吉
夫博士说,在最后的片刻,他的双眼微微张开,嘴唇稍稍动了一下,眼睛似乎凝视着上
方,然后呼吸开始变得缓慢,一分钟九次。 他的呼吸慢慢减缓,直到平静地呼出最后
一口气。 他的脸上散发出神圣的光辉。 由此我们可以知道,他的神智一直都很清楚,
只是他可能想要移动身体,却无法做到。 临终前,法的力量生起,他睁开眼睛、移动
嘴唇,来证明内在的神智是醒着的。
当我结束长程的东南亚七国之行回到孟买,在厚厚一叠等着我阅读的文件中,有一封他
在8月26日所写的信。 信中提到洛杉矶之行,详叙他所带领的课程,并请我为他修慈悲
观。
他为法所做的服务非常有成效。 许多内观中心都热切盼望他能去带领课程,美国的学
生也非常期待他的到来。 但就在为法服务的旅途中,他撒手人寰,证入更高的境界,
人们只有引领期盼了。 读了他的信之后,我深深叹了一口气,脑海中自动浮现出这句
话:世界正在专注聆听你所说的故事,而你说着说着却睡着了!
世界内观家庭的人数与日俱增,但是我的正法兄弟却日渐凋零。 直接受教于乌巴庆老
师的现在还有几人? 我的这位正法兄弟圆满了他的使命:「让我为法服务直到生命的
尽头。」
我深深感恩能有这么一位正法兄弟。
柏卡西医师为所有内观禅修者以及内观老师们树立的典范,将会成为后世的名灯。 他
给我们的启示将为众生带来利益、带来快乐。 印度将会恢复它昔日的光辉与尊严,为
全世界带来最大的福祉。
无比清新的宁静
有一次我去北印度进行法的旅途,在欧‧柏卡西医师(Dr Om Prakashji)的德里
居处住了二天。 他让出他的卧房给我们,自己则睡到隔壁房间。 隔天早上,我和他一
起在他卧房的床上静坐。 一小时静坐快结束时,突然从他那儿散发出一阵无以伦比涅
槃般的宁静,充满着整个房间。 静坐结束后,他谦卑地说:「今天能与您一起静坐,
真是有福,我体验到无比清新的宁静。」我回答:「您最清楚您自己的体验,然而在经
验到您涅槃般的宁静后,我才真是有福啊!」
《再会正法兄弟--纪念柏卡西医师(1912-1998)》 葛印卡老师讲
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f*2
9
随喜赞叹!

【在 r****r 的大作中提到】
: 「太不可思议了!」柏卡西医师以其惯有的柔和声调重复道:「这真是太不可思议了!
: 我见过许多人去世,但没有像这样子的。」他指的是我的阿姨,也是我的养母拉咪黛维
: 。 确是如此,母亲生病和去世的过程真是不可思议。 在她七十五岁那年,大约过世前
: 十五天左右,她和伊莱琦黛维(即葛印卡老师夫人)闲聊的时候,提到下腹部已经疼痛
: 了好几个月。 虽然她可以忍受,并且保持平等心,但偶然间提起这回事。
: 我立刻打电话给我们的家庭医师,也是我的至交柏卡西医师。 事实上,柏卡西医师早
: 已俨然是家中的一分子了。 他替母亲做了检查,然后将我拉到一旁说:「很有可能是
: 肝癌。从症状看来,这样的诊断应该是没错,只是如果真的是肝癌,那种痛苦是难以忍
: 受的,病人会难过得哀号痛哭。没有人可以默默忍受这种癌症的痛苦好几个月,却不告
: 诉别人。但是你母亲看起来这么平静,我想我得进一步检查看看。」

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S*U
11
sadhu!sadhu!sadhu!
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s*a
12
我用的是SW102, 估计不同genetic background的strain对streptomycin的敏感性也不
同。 早先报道rpsL-kana筛选的paper他们用1mg/ml;但是genebridge公司
recombineering kit用rpsL-neo,他们用50ug/ml。怎么有这么大的差别呢。
我后来测了一下OD,2.5mg/ml streptomycin只能使OD600降低20%左右。
streptomycin不能完全抑制细菌生长,但是到底多大溶度才合适进行counter-
selection呢?

【在 x********u 的大作中提到】
: Check your strain background. Do a negative control without rpsL-Kana and
: see if your strain is still resistant to streptomycin. I guess your strain
: is already carrying some genetic element which make them not sensitive to
: stretomycin.

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r*r
13
"这是个属于符号(Symbols)、概念(Concepts)、形像(Forms)、抽象(
Abstraction)和智能化(Intellectualisation)事物的时代。
当然,每个时代都有其符号和形像等,因为这是尘世所需。符号(与言辞有关的或无关
的)是用来帮助沟通的,而形像是周围事物的形状和图像在人们心里面的反映记录。
然而,这个时代的紧急和迫切的要求是:想更加刻意地和深入地去利用这些符号和图像
等。随着世界的扩大,人与人沟通的日益频繁,以及信息器材的发展,符号等对人心的
影响亦日渐深远,而为大众传媒服务的各式各样的艺术形像和技巧,亦会以愈来愈多的
各种形像和图像呈现在现代人的面前。
......
这是个耽于肉欲的时代,它以能满足人们不断增加的欲求而自豪;愈能满足感官欲求的
生活便被说成是「好」的生活;令「好」字隐含着某种特殊的意义。在历史上,如此地
广泛追求高度的肉欲,是从未有过的。
......
修习内观禅,需要努力排除概念(Pannati),深入洞察(Penetrate)诸法实相(
Paramattha),以获取解脱智能(Panna)。所以,正当禅修方法的主要特色,应是其
能当下直接深入洞察诸法实相的能力。"
http://www.mitbbs.com/article_t/Wisdom/31629125.html
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x*u
14
Try 2*IC50

【在 s******a 的大作中提到】
: 我用的是SW102, 估计不同genetic background的strain对streptomycin的敏感性也不
: 同。 早先报道rpsL-kana筛选的paper他们用1mg/ml;但是genebridge公司
: recombineering kit用rpsL-neo,他们用50ug/ml。怎么有这么大的差别呢。
: 我后来测了一下OD,2.5mg/ml streptomycin只能使OD600降低20%左右。
: streptomycin不能完全抑制细菌生长,但是到底多大溶度才合适进行counter-
: selection呢?

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r*r
15
"这是个属于符号(Symbols)、概念(Concepts)、形像(Forms)、抽象(
Abstraction)和智能化(Intellectualisation)事物的时代。
当然,每个时代都有其符号和形像等,因为这是尘世所需。符号(与言辞有关的或无关
的)是用来帮助沟通的,而形像是周围事物的形状和图像在人们心里面的反映记录。
然而,这个时代的紧急和迫切的要求是:想更加刻意地和深入地去利用这些符号和图像
等。随着世界的扩大,人与人沟通的日益频繁,以及信息器材的发展,符号等对人心的
影响亦日渐深远,而为大众传媒服务的各式各样的艺术形像和技巧,亦会以愈来愈多的
各种形像和图像呈现在现代人的面前。
......
这是个耽于肉欲的时代,它以能满足人们不断增加的欲求而自豪;愈能满足感官欲求的
生活便被说成是「好」的生活;令「好」字隐含着某种特殊的意义。在历史上,如此地
广泛追求高度的肉欲,是从未有过的。
......
修习内观禅,需要努力排除概念(Pannati),深入洞察(Penetrate)诸法实相(
Paramattha),以获取解脱智能(Panna)。所以,正当禅修方法的主要特色,应是其
能当下直接深入洞察诸法实相的能力。"
http://www.mitbbs.com/article_t/Wisdom/31629125.html
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s*a
16
上次最高溶度2.5mg/ml,抑制20%。今天又做了一个1.25-20mg/ml范围的,明天应该知
道大概的IC50.

【在 x********u 的大作中提到】
: Try 2*IC50
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r*r
17
柏卡西医师在一天的内观练习之后,已经达到bhanga全
身消融的境界,现在已经进入非常深的层次。
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s*a
18
上次最高溶度2.5mg/ml,抑制20%。今天又做了一个1.25-20mg/ml范围的,明天应该知
道大概的IC50.

【在 x********u 的大作中提到】
: Try 2*IC50
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A*2
19
feels like the strain is resistant to strep even with rpsL
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s*a
20
You mean SW102 generally, or the one I am using?

【在 A********2 的大作中提到】
: feels like the strain is resistant to strep even with rpsL
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A*2
21
Sorry that I am not very familiar with rpsL counter selection but just feel
a bit strange that the resistance level is so high in the scale of mg/ml
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