v*a
2 楼
想在细胞中超量表达一个蛋白,在克隆过程中试过在这个蛋白的open reading frame头
尾设计引物,可是都没有成功的,感觉是引物设计得不好。后来就选了5'和3'的UTR区
域设计引物(离start codon和stop codon都有比较远的一段距离)。请问这样的引物可
以吗?会不会对蛋白表达产生什么影响?谢谢!
尾设计引物,可是都没有成功的,感觉是引物设计得不好。后来就选了5'和3'的UTR区
域设计引物(离start codon和stop codon都有比较远的一段距离)。请问这样的引物可
以吗?会不会对蛋白表达产生什么影响?谢谢!
c*7
3 楼
可以,容易。ebay上有卖unlock code。这里二手也有人卖。
j*x
5 楼
很多时候5'/3'UTR区域中包含调控序列,对蛋白表达究竟会产生什么影响很难预测。
如果用5'/3'UTR区域的引物能成功扩增,那就先克隆到载体中再用ORF头尾引物再扩增
一次(或者直接nested PCR),不费多少事,但是能省后面很多不必要的麻烦。
如果用5'/3'UTR区域的引物能成功扩增,那就先克隆到载体中再用ORF头尾引物再扩增
一次(或者直接nested PCR),不费多少事,但是能省后面很多不必要的麻烦。
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