f*u
2 楼
所谓道，看看这个汉字就知道了，“首”在宇宙遨游就是道，首就是头，头游，而脚不
动。这是什么意思呢？道者，反之动，你要想得道，你必须打破常规，要进行逆练。世
人追求的东西你舍弃了，这样你自然就得道了。道是这样一首诗：
犹如天线开，
信息不断来，
目视不可见，
游化天地间。
得道的人就能沟通宇宙信息，利用宇宙信息，并将这些信息转化为人类所需要的东西。
动。这是什么意思呢？道者，反之动，你要想得道，你必须打破常规，要进行逆练。世
人追求的东西你舍弃了，这样你自然就得道了。道是这样一首诗：
犹如天线开，
信息不断来，
目视不可见，
游化天地间。
得道的人就能沟通宇宙信息，利用宇宙信息，并将这些信息转化为人类所需要的东西。
L*o
3 楼
以前从来没有研究过retina,实验室也刚涉及，只有我一个人开始摸石头过河。打算做
一些retina whole mount的染色，这几天刚刚试了试分离retina,分离倒是不难，可是
不知道怎么才能得到展平的retina？是分离后立刻对剪四刀，然后才whole mount吗？
还是whole mount之后才剪？剪完后，怎样才能平整的贴到载玻片上？我感觉轻轻一扯
就烂了，根本没法得到paper中展平漂亮的retina. 多谢指点！
一些retina whole mount的染色，这几天刚刚试了试分离retina,分离倒是不难，可是
不知道怎么才能得到展平的retina？是分离后立刻对剪四刀，然后才whole mount吗？
还是whole mount之后才剪？剪完后，怎样才能平整的贴到载玻片上？我感觉轻轻一扯
就烂了，根本没法得到paper中展平漂亮的retina. 多谢指点！
e*e
4 楼
If you are talking about junior research group leader, it is a very good
option. Independent, no teaching. It is like a tenure track AP position
without teaching load.
【在 d********g 的大作中提到】
: 和美国的ＡＰ同等么？还是说在大老板手下带几个人干活？位置稳定么？
: 多谢！
option. Independent, no teaching. It is like a tenure track AP position
without teaching load.
【在 d********g 的大作中提到】
: 和美国的ＡＰ同等么？还是说在大老板手下带几个人干活？位置稳定么？
: 多谢！
f*u
5 楼
要打破常规
参考我之前发的文章
参考我之前发的文章
z*u
6 楼
去jove去搜索protocol.
http://www.jove.com/video/2563/dissection-of-a-mouse-eye-for-a-
我就是在那里学会的。要剪成菊花瓣样子。多少都会有损坏的。
http://www.jove.com/video/2563/dissection-of-a-mouse-eye-for-a-
我就是在那里学会的。要剪成菊花瓣样子。多少都会有损坏的。
d*g
7 楼
just talked with my supervisor and he said usually the position is a fixed 6
years (at most) term and after that, you have to move to other places (in
Euro or other places, but probably can not come back to States..). And if
you got another position in Germany, it will be a permeant position (
associate or full professor level).
So it sounds it's worthy to try:) Thanks very much!
【在 e*******e 的大作中提到】
: If you are talking about junior research group leader, it is a very good
: option. Independent, no teaching. It is like a tenure track AP position
: without teaching load.
years (at most) term and after that, you have to move to other places (in
Euro or other places, but probably can not come back to States..). And if
you got another position in Germany, it will be a permeant position (
associate or full professor level).
So it sounds it's worthy to try:) Thanks very much!
【在 e*******e 的大作中提到】
: If you are talking about junior research group leader, it is a very good
: option. Independent, no teaching. It is like a tenure track AP position
: without teaching load.
B*e
8 楼
道
生活中的点滴既是道，
人世间的哀乐既是道，
无为既是道，
人间无处不是道。
道没有那么玄。也不必去追求那所谓的逆势得道。
好好过完这一生，所看到了，所听到的，所悟到的，均是道。
生活中的点滴既是道，
人世间的哀乐既是道，
无为既是道，
人间无处不是道。
道没有那么玄。也不必去追求那所谓的逆势得道。
好好过完这一生，所看到了，所听到的，所悟到的，均是道。
L*o
9 楼
多谢啊。我也看过这个video，可还是有些不明白。
这个video说的是分离retinal pigment epithelium，而一般paper上的retina whole
mount staining应该只是neural retina，而不包括后面的eye cup吧？如何才能把那层
网状的neural retina展平贴片呢？
【在 z****u 的大作中提到】
: 去jove去搜索protocol.
: http://www.jove.com/video/2563/dissection-of-a-mouse-eye-for-a-
: 我就是在那里学会的。要剪成菊花瓣样子。多少都会有损坏的。
这个video说的是分离retinal pigment epithelium，而一般paper上的retina whole
mount staining应该只是neural retina，而不包括后面的eye cup吧？如何才能把那层
网状的neural retina展平贴片呢？
【在 z****u 的大作中提到】
: 去jove去搜索protocol.
: http://www.jove.com/video/2563/dissection-of-a-mouse-eye-for-a-
: 我就是在那里学会的。要剪成菊花瓣样子。多少都会有损坏的。
C*r
10 楼
本来就是指道路，没有污七八糟的意思，路都是用头来走的？荒唐至极。
n*w
11 楼
你所有的染色都应该在EP管里进行。此时，retina仍然是杯状（已经从RPE分离了）。
下面你要在dissection scope下面进行，用transfer pipette (前面的尖头剪掉)将液
体吸得差不多，然后把EP管倒置，这个时候retina应该就在盖子里，然后用镊子小心地
将其夹出，放到scope下的slide上，这时，retina应该还是呈现杯状, ganglion cell
layer up.
然后你要做的就是剪4下（一般四下就够了）。随便找个地方先剪一下，这个时候张力
减小，有两个地方就应该贴到slide上了，然后在对称的地方再剪一下，这个时候，一
般整个retina都贴上去了。
然后你在这两个切口90度的地方在各剪一下，所以四个口一般足够了。
至于peripheral的地方要弄平，我习惯直接用镊子，但是鉴于每个人小心程度没有办法
衡量，你也可以用soft brush，小心的弄平。
有什么问题可以再问我。
下面你要在dissection scope下面进行，用transfer pipette (前面的尖头剪掉)将液
体吸得差不多，然后把EP管倒置，这个时候retina应该就在盖子里，然后用镊子小心地
将其夹出，放到scope下的slide上，这时，retina应该还是呈现杯状, ganglion cell
layer up.
然后你要做的就是剪4下（一般四下就够了）。随便找个地方先剪一下，这个时候张力
减小，有两个地方就应该贴到slide上了，然后在对称的地方再剪一下，这个时候，一
般整个retina都贴上去了。
然后你在这两个切口90度的地方在各剪一下，所以四个口一般足够了。
至于peripheral的地方要弄平，我习惯直接用镊子，但是鉴于每个人小心程度没有办法
衡量，你也可以用soft brush，小心的弄平。
有什么问题可以再问我。
f*u
12 楼
顺则凡 逆则仙
n*w
13 楼
可能语言描述不行，我就粗略地画了一下，希望能够帮助你理解。。。。。
cell
【在 n***w 的大作中提到】
: 你所有的染色都应该在EP管里进行。此时，retina仍然是杯状（已经从RPE分离了）。
: 下面你要在dissection scope下面进行，用transfer pipette (前面的尖头剪掉)将液
: 体吸得差不多，然后把EP管倒置，这个时候retina应该就在盖子里，然后用镊子小心地
: 将其夹出，放到scope下的slide上，这时，retina应该还是呈现杯状, ganglion cell
: layer up.
: 然后你要做的就是剪4下（一般四下就够了）。随便找个地方先剪一下，这个时候张力
: 减小，有两个地方就应该贴到slide上了，然后在对称的地方再剪一下，这个时候，一
: 般整个retina都贴上去了。
: 然后你在这两个切口90度的地方在各剪一下，所以四个口一般足够了。
: 至于peripheral的地方要弄平，我习惯直接用镊子，但是鉴于每个人小心程度没有办法
cell
【在 n***w 的大作中提到】
: 你所有的染色都应该在EP管里进行。此时，retina仍然是杯状（已经从RPE分离了）。
: 下面你要在dissection scope下面进行，用transfer pipette (前面的尖头剪掉)将液
: 体吸得差不多，然后把EP管倒置，这个时候retina应该就在盖子里，然后用镊子小心地
: 将其夹出，放到scope下的slide上，这时，retina应该还是呈现杯状, ganglion cell
: layer up.
: 然后你要做的就是剪4下（一般四下就够了）。随便找个地方先剪一下，这个时候张力
: 减小，有两个地方就应该贴到slide上了，然后在对称的地方再剪一下，这个时候，一
: 般整个retina都贴上去了。
: 然后你在这两个切口90度的地方在各剪一下，所以四个口一般足够了。
: 至于peripheral的地方要弄平，我习惯直接用镊子，但是鉴于每个人小心程度没有办法
f*e
14 楼
不错，是道路的意思，但这个道路的道确也和头有关。《说文解字》中说，道，所行道
也。从辵从首。一达谓之道。辵是脚走路的意思。那么，道就是从脚到头，从起始到达
目的，是道的本意。
【在 C*******r 的大作中提到】
: 本来就是指道路，没有污七八糟的意思，路都是用头来走的？荒唐至极。
也。从辵从首。一达谓之道。辵是脚走路的意思。那么，道就是从脚到头，从起始到达
目的，是道的本意。
【在 C*******r 的大作中提到】
: 本来就是指道路，没有污七八糟的意思，路都是用头来走的？荒唐至极。
m*5
15 楼
画得太Q了！
【在 n***w 的大作中提到】
: 可能语言描述不行，我就粗略地画了一下，希望能够帮助你理解。。。。。
:
: cell
【在 n***w 的大作中提到】
: 可能语言描述不行，我就粗略地画了一下，希望能够帮助你理解。。。。。
:
: cell
L*o
16 楼
Thanks a million! It's really helpful.
Another question about the fixation, do you recommend fix before the retina
separation or after? how long?
cell
【在 n***w 的大作中提到】
: 你所有的染色都应该在EP管里进行。此时，retina仍然是杯状（已经从RPE分离了）。
: 下面你要在dissection scope下面进行，用transfer pipette (前面的尖头剪掉)将液
: 体吸得差不多，然后把EP管倒置，这个时候retina应该就在盖子里，然后用镊子小心地
: 将其夹出，放到scope下的slide上，这时，retina应该还是呈现杯状, ganglion cell
: layer up.
: 然后你要做的就是剪4下（一般四下就够了）。随便找个地方先剪一下，这个时候张力
: 减小，有两个地方就应该贴到slide上了，然后在对称的地方再剪一下，这个时候，一
: 般整个retina都贴上去了。
: 然后你在这两个切口90度的地方在各剪一下，所以四个口一般足够了。
: 至于peripheral的地方要弄平，我习惯直接用镊子，但是鉴于每个人小心程度没有办法
Another question about the fixation, do you recommend fix before the retina
separation or after? how long?
cell
【在 n***w 的大作中提到】
: 你所有的染色都应该在EP管里进行。此时，retina仍然是杯状（已经从RPE分离了）。
: 下面你要在dissection scope下面进行，用transfer pipette (前面的尖头剪掉)将液
: 体吸得差不多，然后把EP管倒置，这个时候retina应该就在盖子里，然后用镊子小心地
: 将其夹出，放到scope下的slide上，这时，retina应该还是呈现杯状, ganglion cell
: layer up.
: 然后你要做的就是剪4下（一般四下就够了）。随便找个地方先剪一下，这个时候张力
: 减小，有两个地方就应该贴到slide上了，然后在对称的地方再剪一下，这个时候，一
: 般整个retina都贴上去了。
: 然后你在这两个切口90度的地方在各剪一下，所以四个口一般足够了。
: 至于peripheral的地方要弄平，我习惯直接用镊子，但是鉴于每个人小心程度没有办法
n*w
17 楼
我的standard protocol是：
1. enucleate the eyes
2. slit the cornea, put the eye in the fixative (usually 4% PFA), for 10min
3. remove cornea and lens and vitreous, and put the eyecup (retina+RPE+
sclera, etc) back to the fixative for about 30-40min. 1hour should also work
.
4. wash with PBS and dissect the retina from the eyecup.
5. put the retina to PBSTriton (1%) permeabilize
6. staining part
这个protocol适用于~95%的蛋白染色。
但是如果遇到一些比较tricky的东西，可能需要调整fixative，固定时间，
permeabilization等等。
我推荐分离之前fix，因为那样的话可以保证你的retina的morphology可以保持住，如
果直接分离，retina的杯状一团糟，最后做flatmount的时候要异常小心，即便如此，
也会有不少damage。
retina
【在 L*****o 的大作中提到】
: Thanks a million! It's really helpful.
: Another question about the fixation, do you recommend fix before the retina
: separation or after? how long?
:
: cell
1. enucleate the eyes
2. slit the cornea, put the eye in the fixative (usually 4% PFA), for 10min
3. remove cornea and lens and vitreous, and put the eyecup (retina+RPE+
sclera, etc) back to the fixative for about 30-40min. 1hour should also work
.
4. wash with PBS and dissect the retina from the eyecup.
5. put the retina to PBSTriton (1%) permeabilize
6. staining part
这个protocol适用于~95%的蛋白染色。
但是如果遇到一些比较tricky的东西，可能需要调整fixative，固定时间，
permeabilization等等。
我推荐分离之前fix，因为那样的话可以保证你的retina的morphology可以保持住，如
果直接分离，retina的杯状一团糟，最后做flatmount的时候要异常小心，即便如此，
也会有不少damage。
retina
【在 L*****o 的大作中提到】
: Thanks a million! It's really helpful.
: Another question about the fixation, do you recommend fix before the retina
: separation or after? how long?
:
: cell
L*o
18 楼
非常有用！实在太感谢了！！
10min
work
【在 n***w 的大作中提到】
: 我的standard protocol是：
: 1. enucleate the eyes
: 2. slit the cornea, put the eye in the fixative (usually 4% PFA), for 10min
: 3. remove cornea and lens and vitreous, and put the eyecup (retina+RPE+
: sclera, etc) back to the fixative for about 30-40min. 1hour should also work
: .
: 4. wash with PBS and dissect the retina from the eyecup.
: 5. put the retina to PBSTriton (1%) permeabilize
: 6. staining part
: 这个protocol适用于~95%的蛋白染色。
10min
work
【在 n***w 的大作中提到】
: 我的standard protocol是：
: 1. enucleate the eyes
: 2. slit the cornea, put the eye in the fixative (usually 4% PFA), for 10min
: 3. remove cornea and lens and vitreous, and put the eyecup (retina+RPE+
: sclera, etc) back to the fixative for about 30-40min. 1hour should also work
: .
: 4. wash with PBS and dissect the retina from the eyecup.
: 5. put the retina to PBSTriton (1%) permeabilize
: 6. staining part
: 这个protocol适用于~95%的蛋白染色。
l*1
19 楼
欧也跟着楼主赞一个
ntgxw不愧是US视网膜领域的德才兼备的人士。
Ps: 比那个蒼井空的所谓德艺双馨是一个太阳 一个月亮的light intensity 区别吧 啊
【在 L*****o 的大作中提到】
: 非常有用！实在太感谢了！！
:
: 10min
: work
ntgxw不愧是US视网膜领域的德才兼备的人士。
Ps: 比那个蒼井空的所谓德艺双馨是一个太阳 一个月亮的light intensity 区别吧 啊
【在 L*****o 的大作中提到】
: 非常有用！实在太感谢了！！
:
: 10min
: work
j*l
20 楼
ding ntgxw yi xia
g*5
21 楼
同赞。
希望苍老师前去慰问。
啊
【在 l**********1 的大作中提到】
: 欧也跟着楼主赞一个
: ntgxw不愧是US视网膜领域的德才兼备的人士。
: Ps: 比那个蒼井空的所谓德艺双馨是一个太阳 一个月亮的light intensity 区别吧 啊
希望苍老师前去慰问。
啊
【在 l**********1 的大作中提到】
: 欧也跟着楼主赞一个
: ntgxw不愧是US视网膜领域的德才兼备的人士。
: Ps: 比那个蒼井空的所谓德艺双馨是一个太阳 一个月亮的light intensity 区别吧 啊
l*1
22 楼
恩 干脆让她移居美国西海岸, 随了ntgxw大师了
作21世纪新新印象派5D 成像画作的模特儿 如何?
【在 g*********5 的大作中提到】
: 同赞。
: 希望苍老师前去慰问。
:
: 啊
作21世纪新新印象派5D 成像画作的模特儿 如何?
【在 g*********5 的大作中提到】
: 同赞。
: 希望苍老师前去慰问。
:
: 啊
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