穷人的劳斯莱斯——五年western经验谈（转） - 未名空间MITBBS历史存档

穷人的劳斯莱斯——五年western经验谈（转）# Biology - 生物学

B*e2012-03-03 08:03

1 楼

【以下文字转载自 WaterWorld 讨论区】
发信人: dinglvyuan (滴溜圆), 信区: WaterWorld
标题: 说说我知道的几年前差点出的命案吧
发信站: BBS 未名空间站 (Mon May 24 13:45:30 2010, 美东)
这个事情本来已经淡忘许久了，今天和老同学聊天，突然提起了这个事情，说出来和各
位男生探讨一下。
我们当时是在一个研究所里读master，不大，每年找10多个人，男女比例差不多。我们
那年正好是5：5.其中四个男生（A-D)一个宿舍。比较小，上下层的那种床。
锅碗瓢盆总是碰碰撞撞的，女生之间的磕磕绊绊确实不足为道，让人惊心的男生之间的
小矛盾引发的大事件。
起因好像就是其中一个A有神经衰弱。B学习不好（调剂过来的，好像属于委托培养的那
种），C,D和A学习很好。B经常10点才会寝室，B很有意见，因为他一般是10点之前睡觉
。C,D无所谓，虽然A这个要求让他们也不痛快。
B家庭压力可能很大，学业上也比较近，所以晚上经常说梦话，磨牙（？）。A被折磨，
于是常常抱怨。同时B晚上睡觉的时候爱听english提高听力，A不满因为B的英

b*n2012-03-03 08:03

2 楼

1. 抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的
抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗
体质量可以，但是选用 Santa的单抗还是有风险，估计这也是业界共识了吧。
进口抗体国内分装包装我也用过不少，呵呵，毕竟是穷人（420元/100微升），大概好
抗体的比例约为50%，如果能做出来，也存在一个问题，就是抗体大多只能用一次。我
曾经把Santa的原装抗体和分装抗体做过比对（抗体品种，货号等完全一致），在都能
做出来的前提下，原装抗体能重复使用的次数要多出许多。具体原因我已经揣测了好几
年，不敢说出来，我一直在想是不是冬天西瓜切成牙和整个卖，也会有所不同。揣测归
揣测，假如只为了发论文毕业走人，可以考虑选用进口分装的多克隆抗体。
国产抗体比较知名的就几家，但质量确实不敢恭维。western blot能做出来的确实不多
，而且杂带多，背景不干净。我们周边的实验室大多买国产抗体做免疫组化，怎么说呢
，应付硕士论文够了。
我也帮别人自制过抗体，再用抗原亲和纯化。效价非常不错，夸张的时候1：10000都能
做出条带，唯一的麻烦是兔子太骚（骚臭），不知道这是不是“兔女郎”名号的来由。
如果读书非常悠闲，老板又特别想拥有手工作坊的情况下，可以自己伺候折腾兔子来玩
玩，刚开始的时候还是蛮有成就感的。只是单凭抗原表达和制备多抗，是不是可以写
成论文毕业，估计因校而异了。
2.Western Blot设备
目前最好的垂直槽和转移槽还是Biorad（伯乐），尤其是MINI3好用,MINI4可以一次跑
四块胶，但通常用不上，由此造成垂直缓冲液的浪费，而且 MINI4用绿色塑料夹住玻璃
板来组成内槽，容易漏液，塑料夹应该是有疲劳寿命的，估计日子一长，弹性就会改变
，所以如果你们实验室刚买了MINI4，赶紧用，遭殃的肯定是某一级的师弟师妹们。
Biorad的一套系统得两万多，西部能玩得起伯乐的还真不多。好在咱中国人聪明，上海
天能的外观和构造和伯乐的MINI3几乎一模一样，而且可以通用，不带电泳仪是5千多
一套，挺好用的。唯一的不足是塑料寿命不如伯乐，胶架容易断裂。不过仔细算算，三
套天能也就是一套伯乐的价格，值了。北京六一的垂直槽很转移槽很好用，但垂直槽配
胶不方便，玻板太厚，散热不好，但能用，六一的电泳仪（电源）还是很好用的。
3. Western Blot实验条件
Western Blot实验条件我基本是按ABCAM公司经典教材做的，按以下的网址下载下来就
可以了（http://www.abcam.com/ps/pdf/protocols/WB-beginner.pdf）。具体的试剂配方我是按宝生物试剂册的附录部分配制。丙烯酰胺和甲叉我是从北京华美买的德国biomol原装货，配出来的胶可以提在手里玩，弹性非常好，价格比sigma的便宜许多，1公斤好像是480多人民币，够实验室用好长时间，现在我们实验室做双向电泳都用biomol的胶，很好用。Marker我现在用fermantas 的SM1811,2微升就很清晰了，兰州的代理是上海生工。
要强调的是垂直电泳缓冲液千万不能回收用，具体愿因你只需上网查查SDS-PAGE的原理
就知道了。转移电泳缓冲液可以回收再用两次。
转膜我通常是快转两百200毫安/2小时，慢转80毫安/12小时。快转是一定得做冰水浴，
就是把槽子泡在冰水混合液里。
封闭我通常用BD的脱脂奶粉，不归，260元500克，也是从北京华美买的。
ECL我用pierce的，500毫升1650元，比国产的还便宜好用。
胶片是柯达的，以前用过乐凯的，不如柯达。
我很少用丽春红或考马斯染膜或染胶，总觉得是脱裤子放屁的事。
4. Western Blot实验关键
Western Blot操作步骤多，每一步的失误都会造成全盘失败，综合而言，抗体仍然是决
定成败的关键，如果抗体很滥，就是神仙也没招。其中内参抗体很重要，因为内参抗
体的选择关系到全盘实验的考评。Actin，Tubulin，GAPDH我都用过，Actin，Tubulin
的缺点是有时候会出现复带，比较稳定的还是GAPDH。如果用心看看cell，nature，
science上的文章，大多用GAPDH做内参。进口的，国内分装的，国产的，我都用过。进
口的最强的1:10000都能做出条带（Upstate，现在被Minipore招安了），国内分装的
也好用，但就是不好回收重复使用，国产的一般只能用一次。我要特别强调的是，实
验室里最贵的抗体实际上是内参抗体，因为只要Western Blot开工，每次都得用内参抗
体，而一般目的蛋白的抗体也就用几次，重复三次就了事。但内参抗体是不折不扣的耗
材，严格意义上将，每跑一次胶，就得杂一次内参，使用频率最高决定了内参是最花
钱的抗体。我也自己制备过内参抗体，但好像因为种属同源性太高，背景总是不干净。
进口的好，太贵；国产的只能使用一次，年终算账，不比进口的便宜。我自己的体会
是多抗制备并不是技术含量极高的事，为什么国内企业高的早不了，低的造不好呢？现
在我用的是杭州贤至的 GAPDH兔多抗，200微升420元钱，我在蛋白上样量12微升/孔的
情况下，按1:2000稀释比，条带非常清晰，没有杂带，是我目前用过的最好的国产抗
体，我估计按1:4000照样能做出来，因为按按1:2000稀释做，在暗室里点上ECL后肉眼
清楚地看到荧光条带。抗体我在不加叠氮化钠的情况下4 度过夜杂交，可回收重复使用
5到6次。最早我是2008年在丁香通上看到了杭州贤至（当时名叫杭州松华）发布的广告
，我就怂恿实验室主管买了2支，很好用，现在实验室都没有用完；2009年我的一个
朋友做western，我推荐他又买了1支，做出来的效果确实好，2009年底我到了新的实验
室，western的全套我在新实验室重新建立，啥都采购齐了，可就是买不到杭州松华的
内参抗体，我上网再也找不到这个公司的网页了，没办法，只好一直噌朋友的内参抗体
用。我有个陋习，就是实验中用顺了用稳定了试剂轻易不愿意更换品牌。还好，今年7
月份我终于找到了当年的通讯记录，一联系才知道他们改名叫杭州贤至生物科技有限公
司了，呵呵，改了个名，害我找了大半年。第三次买到的GAPDH内参抗体，还是好用，
1:2000，条带清晰，回收重复用，照样work，截止目前，我的新导师对我采购的一堆
试剂还没有不满意的，嘿嘿！草根出生，我也照样有我穷人的劳斯莱斯。
5.关于奶粉，膜的选择和显影定影
奶粉看似简单，其实很重要，如果要凑合，可以到超市买光明的脱脂奶粉。奶粉质量不
好，会最终导致显影要么漆黑一片，要么啥都没。fluka的很好，可惜因为疯牛病的原
因，现在海关禁止进口美国牛制品。我现在用的bd的，很好很稳定，如果回收使用，
500可以用很长时间。细菌达到一定极限后，会导致tbst 里的奶粉变质，表现为发绿发
臭，一种肉眼可察觉的淡淡的绿，一种鼻子凑过去能嗅出的臭，这时候就得扔了。
nc膜，pvdf膜我都用过，现在我已经固定下来用密理博的0.45微米的pvdf膜。pvdf膜的
好处是蛋白载量大，韧性好。唯一的麻烦是事先得用甲醇泡几分钟，目的好像是为了
增强膜的正电荷。甲醇泡完后，得在转移缓冲液里泡一两分钟。国内用nc膜的人多一些
，主要是因为nc膜有分装的小片，忽悠老板买一张膜就100元钱，老板肯定乐意，若是
说膜得花上千元，老板就有可能长时间的思考，然后过些日子再答复你。所以大多数人
会采取前一种方式，当然得告诉老板好几次，膜就100元钱。我第一次用到pvdf膜是和
好几个实验室合资买了一卷，我出了475元，类似于打的拼车的方式。现在pvdf膜国内
大概是 1600元到1700元一卷，33厘米*375厘米，够好几个人用好长时间了，膜假货不
多，至少我没有见过。我们几个拼车的穷弟兄拿着尺子分赃的时候才发现本地供货商
给我们送的货少了80厘米，嘿嘿，穷鬼撵着杀叫鬼，我们花钱容易吗！所以交涉，再交
涉，直到他把我们的血汗膜返还才罢休。现在我基本是从北京的欣津科和华美买，大
概1700元一卷，完完整整。
0.45微米的pvdf膜我用5%的脱脂奶粉（溶于tbst中）室温封闭1小时，0.22微米的用8%
的脱脂奶粉。bsa我很少用，主要是bsa会出现封闭不均匀的情况。我也很少用0.22微
米的膜，原因是背景不干净，再者无论是封闭时间还是洗膜时间都得延长。标准教程上
推荐20kd以下的分子用0.22 微米的膜，我杂过最小的分子是cleaved-caspase3,12ka，
按我在一楼的转膜条件，在0.45微米的膜上清清楚楚。我在上海的师弟他们转 7ka的分
子也用0.45微米的，没出过事。废话一句，我师弟的实验室可是国家重点，那个富呀，
让我闭上眼想想吧，那可是屎壳郎掉到了化粪池的感觉。
一抗我一般4度摇床过夜，洗膜3此，每次5分钟。要注意的是，如果一抗里添加了叠氮
化钠，务必洗膜5次，每次10分钟，因为叠氮化钠会灭活二抗偶联的辣根过氧化物酶（
hrp）活性。二抗我用的是中杉金桥分装的，120元一支，通常1:5000，室温1小时，然
后洗膜三次，每次5分钟。
奶粉，一抗，二抗，我都回收，从开始到现在，一直如此。因为我不敢忘记自己贼的出
身。我的一抗是国外的一位老师送给实验室的，刚开始的半年我啥都做不出来，以至
于导师在平安夜领我到教堂祈祷。上海的师弟知道后，每次裁膜的时候给我一小片一小
片日积月累了一些，二抗只拿到了10微升，我怕实验室的人发现，一直是熬夜做
western。可最终还是因为我自己嘴不牢靠，导致东窗事发，师弟险些被开除，事情败
露的那天，师弟在长途电话的那边哭，我在这边哭，写着写着，我的眼泪又一次的盈
眶而出，说不出的辛酸与悲凉，师弟说他承担一切责任，让我装作不知道，那天晚上，
我给他的导师写了一封长信，只求能保住师弟。老天保佑，他导师让师弟写检查认错
。那以后，我再也没有让师弟为我偷过东西，我不能再为自己的理想让朋友付出代价。
虽然现在实验室的老板比较大方，我依然坚持着回收试剂的习惯，我始终不能忘记自
己western blot的开始。
一般8.3*4.3厘米的膜，大概要400微升的ecl混合液。加ecl我一般就在灯光下，或者白
天把窗帘拉上。加好ecl，覆上保鲜膜后，我才端着暗盒进暗室，暗室里我的暗室红灯
始终开着，没有那么可怕。在暗室里，我一般是剪4张同样尺寸的胶片，叠在一起，压
在膜上方，暗盒一扣，就干别的事情去了。5个小时或过夜，我再把胶片显影，显影我
起初很注意技巧，但现在基本上是在显影液里放10分钟，捞出来放到水盘里涮一涮，然
后在定影液里放十分钟。我一般总能找到一张理想的胶片，因为胶片叠加到一起后，
层层屏蔽，从而逐渐递减荧光强度，我试过多次，即便是荧光强度最强的内参，也至多
能达到最上面的第四层胶片。所以显定影后，肯定有曝光过度的胶片，但也肯定有趋
势，背景，强度恰到好处的一张，嘿嘿，傻瓜做法。
傻瓜做法看似呆笨，实则不然。我在很长的一段时间里，都是读秒，或三分钟，或15分
钟，或半小时，或1小时取出胶片显影，眼睛紧紧盯着，一看到条带就捞出来定影。如
果不理想，再压胶片，再等，再取再投再捞，活脱脱是个“猴埋儿”。西北人传说小猴
夭折了，母猴把小猴埋到土里面，一会又挖出来，再埋进去，又挖出来…反复无止。
显定影时如果采取猴埋儿式的技巧，是最费胶片，最费时间，最费心力的做法。所以我
是傻瓜就用傻瓜的办法。
我用过好几个品牌的国产ecl，和进口的ecl也做过对照。国产的一半是a液b液总共50毫
升180元钱，单价3.6元/毫升，一般肉眼可见的荧光强度可持续1个小时，pierce和
milipore的可以持续3小时。milipore的麻烦之处在于由a液b液c液三组成分组成，费枪
头，费脑子。现在我固定使用pierce的super ecl，1650元500毫升，折算下来是3.3元
/毫升。上海吉泰是代理。好像分子克隆上写出了ecl的配方，技术含量并不高，
胶片我用过医院放射科的，乐凯的，柯达的，柯达现在小胶片（小暗盒尺寸）好像是
130元/50张，乐凯的是其价格的一半。乐凯的缺点在于胶片容易出现划痕，有莫名奇
妙的背景，虽然瑕不掩瑜，但还是让人不爽，再就是感光不如柯达的灵敏。这些我都比
对过。如果细心地把二者胶片厚度比比，也可看出差距。我就此请教过甘肃的乐凯总
代理，他说根源出在牛身上。
显影液定影液我一直用乐凯的，便宜，量又足，谁用谁说好。进口的从未染指，连想都
没想过，呵呵，我内心里还是极其渴望支持国货的，爱之深，恨之切啊！
6.总结
从2005年第一次见到抗体到现在，我已经做western blot实验整整五年了。五年里，太
多的磨难，太多的惊喜，太多的感触，太多的代价。现在我做博士后，我指导的学生也
能一次就上手，虽然他们也会出错，但我很少责备他们，因为我知道自己的路途也并
不顺利，如果过度的责难他们，会让他们失去信心，而且更严重的是会导致他们遮遮掩
掩，我从来不怕实验做不出来结果，就怕查不出失败的原因。
我喜欢western blot技术，甚至偏爱或痴迷。最夸张的时候是一天连跑带转了八张膜，
实验最不顺利的那两个月我天天就睡在实验室里，有时候三天三夜不睡觉。我不知道自
己借了多少钱从丁香园的二手资源版淘过别人用剩的抗体，至今我穿的最贵的裤子也
就80元钱，但花1000元买抗体我从来没有觉得破费。好在我的家人和朋友们理解我，
支持我，让我能逐步实现自己的愿望。五年里，从器具，试剂，仪器，甚至如何用滤纸
，我都形成了自己独有的体系和诀窍，我的一切东东都有品牌，这些品牌组合起来就
是穷人的劳斯莱斯。
回想过去，内心仍然会浸没到悲凉与辛酸中。最难受的时候是做p21抗体，整整半年，
从丁香园淘了五个品牌的抗体，都做不出来。最后逼着导师买cst的抗体，还是不出，
那时候正好是2008年雪灾，抗体在公路上走了半个月，我收到抗体是大年初二，兴奋地
上样，转膜，还是没有，当时我感觉自己就好像浸没在冰窖里。宿舍里暖气不好，第
二天我起床时，房子里的洗脸水都已结冰，和我的心绪一模一样。好在上海吉泰是一级
代理，让我投诉，cst美国总部发回来他们的蛋白阳性对照品，再试，p21出来了，技
术支持是个印度人，一眼就看出来我没有用超声波裂解。我们实验室没有这个东东，我
怎么就想不到问题就出在这呢！从投诉到解决问题又是两个月。因为western，造成我
博士延期一年半，害得师弟差点被开除，这也是我主动和导师关系疏远的开始。
但我还是痴迷western，在我心里，western blot技术本身就是穷人的劳斯莱斯。跑一
次胶，我一次可以在两张膜上裁切出13种分子，我想不出还有哪项技术能一次实现如此
之多的指标。Western 稳定，直观，看着胶片上那粗细浓淡变化的条带，就好像自己置
身细胞内部，看着那些分子组合跳舞。我内心里一直非常感激当年馈赠抗体的那位老师
，是他让我踏上了信号转导的道路，也是因为western，我一度和他几乎决裂。在做
western之前，我看文献几乎只看review，因为我看不懂实验性论文的图片，也正是做
western，我才开始真正的踏上科研道路。我逐渐能看懂IP,CO-IP,EMSA,CHIP，我有了
更多的梦想与愿望。五年中，我最得意的是陪着western blto的发明人乔治斯塔克(
George R. Stark)院士去敦煌玩,老头年过70，动过心脏手术不久，仍然坚持赤脚爬上
陡峭的鸣沙山。我们登顶歇气时，老头一声不吭地又从山顶一步步走下去，从半山腰
挖什么东西，等他再上来，我们才看清楚，他手里拿着两个游客随地扔弃的矿泉水瓶子
。老头一直把那两个国货拎到了山下的垃圾箱里。这是老头给我最深刻的记忆，境当
谋高远，一个人的精神境界决定了他专业道路的高远。
从western实验我总结出，实验上根本省不下来钱，一个环节的烂货就会导致全盘失败
。对于实验设计而言，也是如此，一个步骤的bug会导致整个实验立题和评估的逻辑混
乱。如果要追求性价比，也就是如何发挥穷人的劳斯莱斯的最大收益，那从一开始就要
按秋后算账的原则选择试剂，要算总账；如果要让实验顺顺利利，那就得注意每一个
环节，步步为营，细节决定成败。

c*o2012-03-03 08:03

3 楼

摘要？

【在 B********e 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 WaterWorld 讨论区】
: 发信人: dinglvyuan (滴溜圆), 信区: WaterWorld
: 标题: 说说我知道的几年前差点出的命案吧
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon May 24 13:45:30 2010, 美东)
: 这个事情本来已经淡忘许久了，今天和老同学聊天，突然提起了这个事情，说出来和各
: 位男生探讨一下。
: 我们当时是在一个研究所里读master，不大，每年找10多个人，男女比例差不多。我们
: 那年正好是5：5.其中四个男生（A-D)一个宿舍。比较小，上下层的那种床。
: 锅碗瓢盆总是碰碰撞撞的，女生之间的磕磕绊绊确实不足为道，让人惊心的男生之间的
: 小矛盾引发的大事件。

F*K2012-03-03 08:03

4 楼

Where are you now?

【在 b******n 的大作中提到】

: 1. 抗体的选择
: 对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
: 简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
: 的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
: 体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
: 进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
: 而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的
: 抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
: 有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
: 通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗

H*72012-03-03 08:03

5 楼

又是A啊B啊代数帖

h*o2012-03-03 08:03

6 楼

呵呵,写得不错
不过好多都不适用了
比如abcam的抗体质量好,价格高,只对了一半,而且是后一半......

H*72012-03-03 08:03

7 楼

C(AXB)D

【在 c*******o 的大作中提到】

: 摘要？

I*y2012-03-03 08:03

8 楼

家常便饭似的的WB没想到在国内还有这么多讲究，真是长见识了

【在 b******n 的大作中提到】

: 1. 抗体的选择
: 对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
: 简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
: 的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
: 体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
: 进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
: 而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的
: 抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
: 有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
: 通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗

R*a2012-03-03 08:03

9 楼

研究所？难道是台湾？

【在 B********e 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 WaterWorld 讨论区】
: 发信人: dinglvyuan (滴溜圆), 信区: WaterWorld
: 标题: 说说我知道的几年前差点出的命案吧
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon May 24 13:45:30 2010, 美东)
: 这个事情本来已经淡忘许久了，今天和老同学聊天，突然提起了这个事情，说出来和各
: 位男生探讨一下。
: 我们当时是在一个研究所里读master，不大，每年找10多个人，男女比例差不多。我们
: 那年正好是5：5.其中四个男生（A-D)一个宿舍。比较小，上下层的那种床。
: 锅碗瓢盆总是碰碰撞撞的，女生之间的磕磕绊绊确实不足为道，让人惊心的男生之间的
: 小矛盾引发的大事件。

b*n2012-03-03 08:03

10 楼

呵呵，没在国内做过研究吧？
在国内做研究最头痛的就是国产和进口试剂的使用问题
给老板省钱用国产的，做不出来老板不待见你
用进口的吧，价格肯定不便宜，如果因为种种原因没做出来那可是亚历山大
以后再想要试剂就别想了
这都是研究之外的事情，所以美国的研究环境还是很纯的
Sunnyday以前回忆苦日子蹭枪头，有钱了定很多tip被枪头盒环绕感觉很幸福
那他是没经历过枪头也要煮洗灭菌回收的时光吧

【在 I*****y 的大作中提到】

: 家常便饭似的的WB没想到在国内还有这么多讲究，真是长见识了

z*n2012-03-03 08:03

11 楼

中科院？

【在 R***a 的大作中提到】

: 研究所？难道是台湾？

s*s2012-03-03 08:03

12 楼

//nod nod, 国内原来实验室就是煮洗枪头，然后高压灭菌。
灭菌锅就是一个大号高压锅，温度控制就靠边上看着，是放四个
煤气灯还是移掉两个。冬天还行，夏天烘得一头汗。
当年基本上枪头就两种，大包散装自己装盒高压灭菌的属于高
档武器，做DNA才能用；普通实验通通都用回收洗过的；有一次做
RNA，老板良心发现买了一盒全新p200，我捧在手里热泪盈眶啊。

【在 b******n 的大作中提到】

: 呵呵，没在国内做过研究吧？
: 在国内做研究最头痛的就是国产和进口试剂的使用问题
: 给老板省钱用国产的，做不出来老板不待见你
: 用进口的吧，价格肯定不便宜，如果因为种种原因没做出来那可是亚历山大
: 以后再想要试剂就别想了
: 这都是研究之外的事情，所以美国的研究环境还是很纯的
: Sunnyday以前回忆苦日子蹭枪头，有钱了定很多tip被枪头盒环绕感觉很幸福
: 那他是没经历过枪头也要煮洗灭菌回收的时光吧

H*72012-03-03 08:03

13 楼

中科院下面有一百多所呢

【在 R***a 的大作中提到】

: 研究所？难道是台湾？

d*m2012-03-03 08:03

14 楼

同情啊。想当年在国内老板实验室那个有钱，全新的进口枪头一箱一箱的往实验室吧，
提RNA从来不用担心污染，啥都是全新的。
做生物实验就是烧钱。

【在 s******s 的大作中提到】

: //nod nod, 国内原来实验室就是煮洗枪头，然后高压灭菌。
: 灭菌锅就是一个大号高压锅，温度控制就靠边上看着，是放四个
: 煤气灯还是移掉两个。冬天还行，夏天烘得一头汗。
: 当年基本上枪头就两种，大包散装自己装盒高压灭菌的属于高
: 档武器，做DNA才能用；普通实验通通都用回收洗过的；有一次做
: RNA，老板良心发现买了一盒全新p200，我捧在手里热泪盈眶啊。

s*d2012-03-03 08:03

15 楼

B有的傻，A有点缺，最后掐上了。。。。
傻B和缺A最后在美国又重聚了，等待下一次掐？

【在 c*******o 的大作中提到】

: 摘要？

p*m2012-03-03 08:03

16 楼

kao 这个太艰苦了。。

【在 s******s 的大作中提到】

: //nod nod, 国内原来实验室就是煮洗枪头，然后高压灭菌。
: 灭菌锅就是一个大号高压锅，温度控制就靠边上看着，是放四个
: 煤气灯还是移掉两个。冬天还行，夏天烘得一头汗。
: 当年基本上枪头就两种，大包散装自己装盒高压灭菌的属于高
: 档武器，做DNA才能用；普通实验通通都用回收洗过的；有一次做
: RNA，老板良心发现买了一盒全新p200，我捧在手里热泪盈眶啊。

S*r2012-03-03 08:03

17 楼

C曾经是我的恋人 ...

【在 B********e 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 WaterWorld 讨论区】
: 发信人: dinglvyuan (滴溜圆), 信区: WaterWorld
: 标题: 说说我知道的几年前差点出的命案吧
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon May 24 13:45:30 2010, 美东)
: 这个事情本来已经淡忘许久了，今天和老同学聊天，突然提起了这个事情，说出来和各
: 位男生探讨一下。
: 我们当时是在一个研究所里读master，不大，每年找10多个人，男女比例差不多。我们
: 那年正好是5：5.其中四个男生（A-D)一个宿舍。比较小，上下层的那种床。
: 锅碗瓢盆总是碰碰撞撞的，女生之间的磕磕绊绊确实不足为道，让人惊心的男生之间的
: 小矛盾引发的大事件。

h*o2012-03-03 08:03

18 楼

这个还行吧
2002左右的大部分实验室都这样
我见过第一批长江学者实验室都是回收枪头的,本科生进实验室先洗一个学期的枪头
我当时的实验室是一个很小的实验室,所有的东西都是自己配的,耗材都是从海门的小作
坊买的, 养细胞的瓶子都是重复使用,用洗液泡,泡完再洗
洗液也是自己配.....蹭一下裤子就是一个洞.....
media也是自己配,然后再滤
血清分装成一毫升的管子...

g*12012-03-03 08:03

19 楼

"C曾经是我的恋人，昨天给我发了邀请参加他的婚礼"

【在 c*******o 的大作中提到】

: 摘要？

p*m2012-03-03 08:03

20 楼

不至于吧我是03年进的实验室，当时那层楼的实验室都需要本科生装枪头，但是没听
说谁要洗枪头哈呵呵

【在 h*******o 的大作中提到】

: 这个还行吧
: 2002左右的大部分实验室都这样
: 我见过第一批长江学者实验室都是回收枪头的,本科生进实验室先洗一个学期的枪头
: 我当时的实验室是一个很小的实验室,所有的东西都是自己配的,耗材都是从海门的小作
: 坊买的, 养细胞的瓶子都是重复使用,用洗液泡,泡完再洗
: 洗液也是自己配.....蹭一下裤子就是一个洞.....
: media也是自己配,然后再滤
: 血清分装成一毫升的管子...

F*e2012-03-03 08:03

21 楼

再给增加几个条件：惨叫的养猫，唯一未婚的养狗，国内那个养鸡。
问谁养蛇。

决。
步。

【在 B********e 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 WaterWorld 讨论区】
: 发信人: dinglvyuan (滴溜圆), 信区: WaterWorld
: 标题: 说说我知道的几年前差点出的命案吧
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon May 24 13:45:30 2010, 美东)
: 这个事情本来已经淡忘许久了，今天和老同学聊天，突然提起了这个事情，说出来和各
: 位男生探讨一下。
: 我们当时是在一个研究所里读master，不大，每年找10多个人，男女比例差不多。我们
: 那年正好是5：5.其中四个男生（A-D)一个宿舍。比较小，上下层的那种床。
: 锅碗瓢盆总是碰碰撞撞的，女生之间的磕磕绊绊确实不足为道，让人惊心的男生之间的
: 小矛盾引发的大事件。

h*o2012-03-03 08:03

22 楼

200和20的不用
1ml,5ml的都洗,后来改成5ml的要洗了, 而且还是在长江学者的实验室
一般实验室还好,枪头不用洗
移液管就不用说了......

【在 p*****m 的大作中提到】

: 不至于吧我是03年进的实验室，当时那层楼的实验室都需要本科生装枪头，但是没听
: 说谁要洗枪头哈呵呵

c*o2012-03-03 08:03

23 楼

参加还是参与？

"C曾经是我的恋人，昨天给我发了邀请参加他的婚礼"

【在 g*******1 的大作中提到】

: "C曾经是我的恋人，昨天给我发了邀请参加他的婚礼"

l*12012-03-03 08:03

24 楼

人民币美元欧元混战的最终获得利益最大方将主宰以后的生物实验烧钱这一功能
区的主要CNS (Central Neuron system).

【在 d********m 的大作中提到】

: 同情啊。想当年在国内老板实验室那个有钱，全新的进口枪头一箱一箱的往实验室吧，
: 提RNA从来不用担心污染，啥都是全新的。
: 做生物实验就是烧钱。

k*e2012-03-03 08:03

25 楼

A要B滚，B不想离开，A要B来，B已经滚远。

【在 c*******o 的大作中提到】

: 摘要？

p*u2012-03-03 08:03

26 楼

不是吧，这不是我师兄嘛～～～实验室辗转，搬家，困苦～～～那几年就是这样过来的
，很多瓶瓶罐罐都是我这个师兄捡来的。p21把我师兄折腾死了！！！

【在 b******n 的大作中提到】

: 1. 抗体的选择
: 对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
: 简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
: 的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
: 体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
: 进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
: 而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的
: 抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
: 有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
: 通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗

c*o2012-03-03 08:03

27 楼

太杯具了。。。

A要B滚，B不想离开，A要B来，B已经滚远。

【在 k****e 的大作中提到】

: A要B滚，B不想离开，A要B来，B已经滚远。

b*n2012-03-03 08:03

28 楼

国内回收枪头的事我听说过，不过现在钱多了条件好了，山寨厂商也能生产廉价枪头了
，回收枪头的应该很少见了。

【在 b******n 的大作中提到】

: 呵呵，没在国内做过研究吧？
: 在国内做研究最头痛的就是国产和进口试剂的使用问题
: 给老板省钱用国产的，做不出来老板不待见你
: 用进口的吧，价格肯定不便宜，如果因为种种原因没做出来那可是亚历山大
: 以后再想要试剂就别想了
: 这都是研究之外的事情，所以美国的研究环境还是很纯的
: Sunnyday以前回忆苦日子蹭枪头，有钱了定很多tip被枪头盒环绕感觉很幸福
: 那他是没经历过枪头也要煮洗灭菌回收的时光吧

m*d2012-03-03 08:03

29 楼

作者推公式推晕了，明明是B>A, 却写成了A>A
"A让B滚，之后C/D就听到一声惨叫。然后C,D就看见灯亮了，A站在灯下说你们赶紧叫救
护车吧，之后回头冲A的床方向说，我不干这个已经很多年了。在之后就悠闲踱了几步。
警车救护车同时到达的，按照C的说法，当时B上警车故意从容不迫地样子，用D的话说
，似乎想让别人看到他胜似闲庭散步。"

【在 B********e 的大作中提到】

: 【以下文字转载自 WaterWorld 讨论区】
: 发信人: dinglvyuan (滴溜圆), 信区: WaterWorld
: 标题: 说说我知道的几年前差点出的命案吧
: 发信站: BBS 未名空间站 (Mon May 24 13:45:30 2010, 美东)
: 这个事情本来已经淡忘许久了，今天和老同学聊天，突然提起了这个事情，说出来和各
: 位男生探讨一下。
: 我们当时是在一个研究所里读master，不大，每年找10多个人，男女比例差不多。我们
: 那年正好是5：5.其中四个男生（A-D)一个宿舍。比较小，上下层的那种床。
: 锅碗瓢盆总是碰碰撞撞的，女生之间的磕磕绊绊确实不足为道，让人惊心的男生之间的
: 小矛盾引发的大事件。

b*n2012-03-03 08:03

30 楼

深有感触
山寨产品倒是能用，但是质量总是游走在合格与不合格的边缘。

【在 h*******o 的大作中提到】

: 200和20的不用
: 1ml,5ml的都洗,后来改成5ml的要洗了, 而且还是在长江学者的实验室
: 一般实验室还好,枪头不用洗
: 移液管就不用说了......

B*e2012-03-03 08:03

31 楼

这里的A，B也错了。
起因好像就是其中一个A有神经衰弱。B学习不好（调剂过来的，好像属于委托培养的那
种），C,D和A学习很好。B经常10点才会寝室，B很有意见，因为他一般是10点之前睡觉
。C,D无所谓，虽然A这个要求让他们也不痛快。

【在 m*****d 的大作中提到】

: 作者推公式推晕了，明明是B>A, 却写成了A>A
: "A让B滚，之后C/D就听到一声惨叫。然后C,D就看见灯亮了，A站在灯下说你们赶紧叫救
: 护车吧，之后回头冲A的床方向说，我不干这个已经很多年了。在之后就悠闲踱了几步。
: 警车救护车同时到达的，按照C的说法，当时B上警车故意从容不迫地样子，用D的话说
: ，似乎想让别人看到他胜似闲庭散步。"

S*s2012-03-03 08:03

32 楼

有这样的精神，什么实验都能做出来

【在 b******n 的大作中提到】

: 1. 抗体的选择
: 对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
: 简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
: 的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
: 体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
: 进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
: 而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的
: 抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
: 有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
: 通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗

l*e2012-03-03 08:03

33 楼

满篇的笑点，需要耐心看完

D*a2012-03-03 08:03

34 楼

我当年混了两个实验室，一个微生物实验室，就是枪头回收，另一个做DNA的，有幸不
用洗枪头了。。。前一个实验室是自己找的大四之前跟在实验室里泡着学点东西，因此
对我打击极大，才决心绝对不在国内念硕士了。。。

s*d2012-03-03 08:03

35 楼

作者是A?
明显用错了好几次A/B
这后遗症挺明显的

l*12012-03-03 08:03

36 楼

me even bachelor degree is not from mainland china even it was Top three
during 1990s in Hou-Qing but me quit it then go to abroad from family reason.

【在 D*a 的大作中提到】

: 我当年混了两个实验室，一个微生物实验室，就是枪头回收，另一个做DNA的，有幸不
: 用洗枪头了。。。前一个实验室是自己找的大四之前跟在实验室里泡着学点东西，因此
: 对我打击极大，才决心绝对不在国内念硕士了。。。

T*i2012-03-03 08:03

37 楼

天，这是什么时候的事？我总听说过内生物口多有钱。这也太。。。西部还是缺少国家
的关怀。
我现在做western，一律买Invitrogen 的pre－made Novex 胶。不过我不是天天做。抗
体那个好买那个，根本不管价钱。我的原则是用最好的试剂，出最好的结果。有的时候
，真不能省钱。

【在 b******n 的大作中提到】

: 1. 抗体的选择
: 对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
: 简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
: 的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
: 体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
: 进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
: 而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的
: 抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
: 有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
: 通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗

d*m2012-03-03 08:03

38 楼

正解，做实验是半点钱也省不来的。LZ如果在个有钱的实验室，就不会把青春浪费在这
种琐事上了

【在 T****i 的大作中提到】

: 天，这是什么时候的事？我总听说过内生物口多有钱。这也太。。。西部还是缺少国家
: 的关怀。
: 我现在做western，一律买Invitrogen 的pre－made Novex 胶。不过我不是天天做。抗
: 体那个好买那个，根本不管价钱。我的原则是用最好的试剂，出最好的结果。有的时候
: ，真不能省钱。

c*z2012-03-03 08:03

39 楼

hand~~
想起当年实验室买个蓝盖瓶都不让
自己抽滤media
那瓶子都是我们去校医院输液室捡回来的盐水瓶

【在 s******s 的大作中提到】

: //nod nod, 国内原来实验室就是煮洗枪头，然后高压灭菌。
: 灭菌锅就是一个大号高压锅，温度控制就靠边上看着，是放四个
: 煤气灯还是移掉两个。冬天还行，夏天烘得一头汗。
: 当年基本上枪头就两种，大包散装自己装盒高压灭菌的属于高
: 档武器，做DNA才能用；普通实验通通都用回收洗过的；有一次做
: RNA，老板良心发现买了一盒全新p200，我捧在手里热泪盈眶啊。

g*r2012-03-03 08:03

40 楼

真是惨啊

【在 b******n 的大作中提到】

: 1. 抗体的选择
: 对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
: 简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
: 的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
: 体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
: 进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
: 而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的
: 抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
: 有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
: 通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗

b*s2012-03-03 08:03

41 楼

个人认为质量最可靠还是cell signaling 的抗体。
有没有人用过那个几小时内能把从SDS到2抗全部做出来的神机？效果如何？对蛋白的分
子量有没有限制？

【在 h*******o 的大作中提到】

: 呵呵,写得不错
: 不过好多都不适用了
: 比如abcam的抗体质量好,价格高,只对了一半,而且是后一半......

o*A2012-03-03 08:03

42 楼

科学家阿

T*i2012-03-03 08:03

43 楼

最惨的是 western 根本就不是高科技，还整的这么难，白白浪费了大好青春。还什么
熬几天几夜做，大年初二做。我看到那无语了。
上面跟帖还有说有这种精神什么实验都能做出来。我同意。只是如果不想法改善条件，
硬靠精神力量，难度更大的实验恐怕
得耗费一生的精力了。咱们中国人太喜欢强调精神的力量了，这也是为什么很多人强调
刻苦的原因。如果不从根本上改变思路，恐怕多少辈子下来，后人还得强调刻苦，强调
精神力量。
有看官肯定说，你怎么改善条件？钱不够，可以多想少做，想清楚了再做，只做最必要
的实验。长远来看，还得想法搞钱。或者干脆跳出去，到有钱的地方。在没钱的地方，
拼死拼活，也很难作出什么。所以根本就不应该去。反正，我Ph.D. 选实验室和找薄厚
的时候，第一项看有钱没钱。当然不是一定找最富的，但肯定不找几百刀都唧唧歪歪的
地方。不给报销面试费用的也不考虑。很多老板就是让自贱的薄厚给惯的。

【在 g*********r 的大作中提到】

: 真是惨啊

t*t2012-03-03 08:03

44 楼

orz...

【在 s******s 的大作中提到】

: //nod nod, 国内原来实验室就是煮洗枪头，然后高压灭菌。
: 灭菌锅就是一个大号高压锅，温度控制就靠边上看着，是放四个
: 煤气灯还是移掉两个。冬天还行，夏天烘得一头汗。
: 当年基本上枪头就两种，大包散装自己装盒高压灭菌的属于高
: 档武器，做DNA才能用；普通实验通通都用回收洗过的；有一次做
: RNA，老板良心发现买了一盒全新p200，我捧在手里热泪盈眶啊。

M*n2012-03-03 08:03

45 楼

wow, 好怀念历史啊。
还有以前Taq都是home-made

【在 s******s 的大作中提到】

: //nod nod, 国内原来实验室就是煮洗枪头，然后高压灭菌。
: 灭菌锅就是一个大号高压锅，温度控制就靠边上看着，是放四个
: 煤气灯还是移掉两个。冬天还行，夏天烘得一头汗。
: 当年基本上枪头就两种，大包散装自己装盒高压灭菌的属于高
: 档武器，做DNA才能用；普通实验通通都用回收洗过的；有一次做
: RNA，老板良心发现买了一盒全新p200，我捧在手里热泪盈眶啊。

b*n2012-03-03 08:03

46 楼

那配合home-made Taq的就是手动PCR循环了？

【在 M*****n 的大作中提到】

: wow, 好怀念历史啊。
: 还有以前Taq都是home-made

s*r2012-03-03 08:03

47 楼

佩服楼主的精神，但这篇文章让我读的悲从中来。WB应该算是生物实验中倒数第二简单
直白的了，倒数第一的是常规的subclone。
当时我在国内读硕士的时候也是一样，什么试剂都没有，自己配buffer，洗玻璃板，配
胶，那破玻璃板还漏，一上午有时候都配不好一块胶，用那种几百块钱的破抗体，买来
之后马上分装好，每个人分那么一丁点，自己的用完了要到处看人脸色借，自己配显影
液定影液，有时候要在暗室里等半个多小时才能看到条带。cloning也是一样，稍微稀
有点的酶都要去隔壁借个几微升回来，感受态细胞自己做，PCR也是连个kit都没有，提
质粒自己配buffer。
楼上有些人说的对，试剂钱是省不下来的。我整个硕士都在纠结这些trouble shooting
，各种做不出来跑不出来，老板指着鼻子说你们这些人分子生物学都是弱智。后来拿到
master赶紧跑路来美国读PhD,前几个月做这些都有心理阴影,洗膜曝光的时候都神经兮
兮的，生怕做不出来。结果WB和cloning怎么做怎么有，慢慢的才对自己恢复了信心。
现在看的那些细胞分子方面的paper，western都是一堆一堆的，cloning更是直接带过
在methods里面解释下。看到楼主把大好青春和精力放在这样基础实验的毫无意义的
trouble shooting上，真是想起了我在国内荒废的硕士三年。

g*r2012-03-03 08:03

48 楼

这种机制实际上是浪费下面人的生命，来节约上面人的金钱，为啥呢，因为他也弄不来钱
这是恶性循环
当初我们都是用precast的gel, 各种抗体直接买最最可靠的，只有一抗还重复用个十次
永最快，最可重复的可靠地办法把实验做出来才是最重要的
做好实验，得到好的结果，老板去骗更多钱，这是良性循环

【在 T****i 的大作中提到】

: 最惨的是 western 根本就不是高科技，还整的这么难，白白浪费了大好青春。还什么
: 熬几天几夜做，大年初二做。我看到那无语了。
: 上面跟帖还有说有这种精神什么实验都能做出来。我同意。只是如果不想法改善条件，
: 硬靠精神力量，难度更大的实验恐怕
: 得耗费一生的精力了。咱们中国人太喜欢强调精神的力量了，这也是为什么很多人强调
: 刻苦的原因。如果不从根本上改变思路，恐怕多少辈子下来，后人还得强调刻苦，强调
: 精神力量。
: 有看官肯定说，你怎么改善条件？钱不够，可以多想少做，想清楚了再做，只做最必要
: 的实验。长远来看，还得想法搞钱。或者干脆跳出去，到有钱的地方。在没钱的地方，
: 拼死拼活，也很难作出什么。所以根本就不应该去。反正，我Ph.D. 选实验室和找薄厚

M*n2012-03-03 08:03

49 楼

I am not that old.
the manual PCR was done by the generation of my mentors.

【在 b*******n 的大作中提到】

: 那配合home-made Taq的就是手动PCR循环了？

p*e2012-03-03 08:03

50 楼

Ding!

p*e2012-03-03 08:03

51 楼

WB抗体最重要，其他都次要。话又说回来，在哪儿抗体不重要呢？ELISA, IP, Flow,
IHC, ChIP, ChIP-seq, Fluorescence Microscopy.......如果抗体好，手笨点，硬件
差点，都是能做出来的。如果抗体不行，上帝他老人家来了也没辙。
其实生物男很多时间都花在尝试不同的抗体，求老板买更多抗体，以及向抗体公司投诉
上了。
可是如何选抗体呢？哥根据自己的经验体会，给大家提点建议。
在美国有300多家卖抗体的公司，全世界范围就更多了。可是我们常接触的就那么几家
。我把他们分成两类："包罗万象型"和"少而精型"。
最著名的“包罗万象型”公司有三家：AbCam, Sigma和Santa Cruz。这三位的产品也太
全了，无论你需要什么抗体，他们都有。至于是否能用，那就再说了。我个人的经验
是：能用率大约有20％。所以我很奇怪楼主会觉得AbCam抗体质量好。这三位大哥中
SantaCruz还算好点，毕竟便宜得多，给的量又足。万一赶上你走运遇到一支好的抗体
，够你用到当正教授了。
据我所知，AbCam和Sigma都不生产抗体，所有抗体都是来自OEM。他们就是想做抗体
WalMart，对抗体厂商来者不拒，所以产品超级全，质量当然难以保证。但是他们两家
的态度都很好，只要你出示抗体不能用的证据，他们都会给你换或退（原来的产品可能
就拿下去了）。如果能用，他们鼓励你发图上去。所以我怀疑他们根本就没有抗体的质
控团队，我们这些傻消费者免费给他们做质控，还给他们付钱，瞧把他给精的。另外由
于产品来自五湖四海，动不动就是国际运输，难怪死贵死贵的，而且还慢得出奇（这两
家都在网上告诉你发货时间，从第二天到一个月后不等）。楼主好像提到内参抗体先是
从AbCam买，后来改从杭州买，觉得国产的也不差云云。说不定楼主用的就是同一个抗
体。
SantaCruz的抗体好象都是自己生产的。抗原一律是合成肽。他们在质控上下的功夫好
象不多，所以产品很多，但质量有很大的改进余地。
还有个此型的公司叫NovusBio，显然在学AbCam，只不过规模小n倍。人家AbCam 是
Walmart，它是H-Mart。
我用过的"少而精型"公司有三家：CST，RnD和Upstate （Millipore）。他们好象既自
己生产又OEM。他们的质控很好，所有的产品都有数据支持。尤其是CST，抗体大都可以
检测到天然水平。我的个人经验，这三家抗体可用率达到90％。只可惜抗体数量太少
。话又说回来，哪有那么多好抗体呢？美女少丑女少平庸女多，这是规律。
做为终端用户，选抗体的第一步当然是文献。引用越多，文章档次越高，越可靠。如果
发表在“中华牌”杂志上，是否可信，你要三思。
第二步从"少而精型"公司里找。不幸的是，如果你探索的是新的分子，他们十有八九没
有，只能去“包罗万象型”公司了。花钱给他么做“质控”是不可避免的了。
有时比较郁闷的是：WB做不出来，是抗体不行呢？还是样品里根本就没有这个蛋白呢？
这时可以试一试Origene的基因过表达细胞裂解液做为阳性对照。
实在不行，只能定制抗体了。
另外，流式抗体有点特殊。这些抗体（尤其是常用抗体）所来源的细胞株已经经过n多
年的检验，肯定没有问题。抗体的纯化和标记极其容易，是人都会做。所以流式抗体在
哪买都不应该有问题。没有必要一定从BD买。
以上只是我的一家之言，没有文献和数据支持。也没有故意褒扬或贬低哪家公司之意，
只是我做博后时的体会而已。如果各位信了我的话做不出实验哥概不负责。如果得罪了
那家公司，可别起诉我，诉我也没有，哥没钱。
好了，现在是广告时间：哥现在为一个叫SPEED BioSystems (www.speedbiosystems.
com)的公司打工。我们也有一些抗体，质量不错，如有兴趣可以到我们网站看看。尤其
是我们的Flow抗体，质量绝对没问题，价钱比较便宜，而且我们还可以进一步给很大折
扣，订货前跟我们联系要一个打折号。谢了。

v*a2012-03-03 08:03

52 楼

这些大而全或小而精的公司的产品我都用过，非常赞同你的观点～只是奇怪为什么你在
flow上才提到BD（不过我没做过flow），我觉得BD抗体是我用得最好，基本上100%work
的。

【在 p********e 的大作中提到】

: WB抗体最重要，其他都次要。话又说回来，在哪儿抗体不重要呢？ELISA, IP, Flow,
: IHC, ChIP, ChIP-seq, Fluorescence Microscopy.......如果抗体好，手笨点，硬件
: 差点，都是能做出来的。如果抗体不行，上帝他老人家来了也没辙。
: 其实生物男很多时间都花在尝试不同的抗体，求老板买更多抗体，以及向抗体公司投诉
: 上了。
: 可是如何选抗体呢？哥根据自己的经验体会，给大家提点建议。
: 在美国有300多家卖抗体的公司，全世界范围就更多了。可是我们常接触的就那么几家
: 。我把他们分成两类："包罗万象型"和"少而精型"。
: 最著名的“包罗万象型”公司有三家：AbCam, Sigma和Santa Cruz。这三位的产品也太
: 全了，无论你需要什么抗体，他们都有。至于是否能用，那就再说了。我个人的经验

h*o2012-03-03 08:03

53 楼

个人感觉
抗体质量分档次
第一档次: cell signaling (质量好,但是价格偏贵, 同样是100ul能用的次数少) , BD
biosciences, 以前的mito sciences (现在被abcam买了,所以比较悲剧)
一档半: millipore, proteintech (proteintech这个公司最近比较喜欢,抗体种类也
比较多,关键是价格便宜,而且质量很不错)
第二档: R&D systems, sigma
第三档:novus,　abcam
最差的是santa cruz
当然现在abcam和santa cruz也差不多了,价格还贵

l*g2012-03-03 08:03

54 楼

不咋地，做做tubulin这种还凑合，其他的基本就是个废。
一直扔在我桌子上积灰尘= =
不过我有个同学一直在用，也许是我手不好吧……

【在 b******s 的大作中提到】

: 个人认为质量最可靠还是cell signaling 的抗体。
: 有没有人用过那个几小时内能把从SDS到2抗全部做出来的神机？效果如何？对蛋白的分
: 子量有没有限制？

b*n2012-03-03 08:03

55 楼

那种三个水浴锅式的PCR仪还真见过
不过好歹也是自动的
home-made Taq也见过，那实验室的学生经常到别的实验室蹭taq酶
没办法，老板就两个要求，用home-made Taq和出结果
满足第一个条件容易，但是同时满足两个条件就难说了

【在 b*******n 的大作中提到】

: 那配合home-made Taq的就是手动PCR循环了？

g*52012-03-03 08:03

56 楼

nnd，santa cruz的抗体80%都是狗死一堆
abcam 抗体一半都不work。
CST cellsignaling？ good，most work
我认为好的抗体公司
proteintech， cellsignal, epitomics
一般的
RnD Abcam
差的
santa cruz

b*s2012-03-03 08:03

57 楼

我记得是Pierce的人在推销，请问能不能给个连接？我对这个系统还满好奇的，毕竟
做一个常规WB要1到2天。

【在 l******g 的大作中提到】

: 不咋地，做做tubulin这种还凑合，其他的基本就是个废。
: 一直扔在我桌子上积灰尘= =
: 不过我有个同学一直在用，也许是我手不好吧……

i*g2012-03-03 08:03

58 楼

写得比较有意思，但是不太实用，可能实验条件相差太大。precast gel比自己制的gel
效果要好很多，结果也容易重复。antibody要看运气的，呵呵。

1. 抗体的选择
对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的
抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗
体质量可以，但是选用 Santa的单抗还是有风险，估计这也是业界共识了吧。
进口抗体国内分装包装我也用过不少，呵呵，毕竟是穷人（420元/100微升），大概好
抗体的比例约为50%，如果能做出来，也存在一个问题，就是抗体大多只能用一次。我
曾经把Santa的原装抗体和分装抗体做过比对（抗体品种，货号等完全一致），在都能
做出来的前提下，原装抗体能重复使用的次数要多出许多。具体原因我已经揣测了好几
年，不敢说出来，我一直在想是不是冬天西瓜切成牙和整个卖，也会有所不同。揣测归
揣测，假如只为了发论文毕业走人，可以考虑选用进口分装的多克隆抗体。
国产抗体比较知名的就几家，但质量确实不敢恭维。western blot能做出来的确实不多
，而且杂带多，背景不干净。我们周边的实验室大多买国产抗体做免疫组化，怎么说呢
，应付硕士论文够了。
我也帮别人自制过抗体，再用抗原亲和纯化。效价非常不错，夸张的时候1：10000都能
做出条带，唯一的麻烦是兔子太骚（骚臭），不知道这是不是“兔女郎”名号的来由。
如果读书非常悠闲，老板又特别想拥有手工作坊的情况下，可以自己伺候折腾兔子来玩
玩，刚开始的时候还是蛮有成就感的。只是单凭抗原表达和制备多抗，是不是可以写
成论文毕业，估计因校而异了。
2.Western Blot设备
目前最好的垂直槽和转移槽还是Biorad（伯乐），尤其是MINI3好用,MINI4可以一次跑
四块胶，但通常用不上，由此造成垂直缓冲液的浪费，而且 MINI4用绿色塑料夹住玻璃
板来组成内槽，容易漏液，塑料夹应该是有疲劳寿命的，估计日子一长，弹性就会改变
，所以如果你们实验室刚买了MINI4，赶紧用，遭殃的肯定是某一级的师弟师妹们。
Biorad的一套系统得两万多，西部能玩得起伯乐的还真不多。好在咱中国人聪明，上海
天能的外观和构造和伯乐的MINI3几乎一模一样，而且可以通用，不带电泳仪是5千多
一套，挺好用的。唯一的不足是塑料寿命不如伯乐，胶架容易断裂。不过仔细算算，三
套天能也就是一套伯乐的价格，值了。北京六一的垂直槽很转移槽很好用，但垂直槽配
胶不方便，玻板太厚，散热不好，但能用，六一的电泳仪（电源）还是很好用的。
3. Western Blot实验条件
Western Blot实验条件我基本是按ABCAM公司经典教材做的，按以下的网址下载下来就
可以了（http://www.abcam.com/ps/pdf/protocols/WB-beginner.pdf）。具体的试剂配方我是按宝生物试剂册的附录部分配制。丙烯酰胺和甲叉我是从北京华美买的德国biomol原装货，配出来的胶可以提在手里玩，弹性非常好，价格比sigma的便宜许多，1公斤好像是480多人民币，够实验室用好长时间，现在我们实验室做双向电泳都用biomol的胶，很好用。Marker我现在用fermantas 的SM1811,2微升就很清晰了，兰州的代理是上海生工。
要强调的是垂直电泳缓冲液千万不能回收用，具体愿因你只需上网查查SDS-PAGE的原理
就知道了。转移电泳缓冲液可以回收再用两次。
转膜我通常是快转两百200毫安/2小时，慢转80毫安/12小时。快转是一定得做冰水浴，
就是把槽子泡在冰水混合液里。
封闭我通常用BD的脱脂奶粉，不归，260元500克，也是从北京华美买的。
ECL我用pierce的，500毫升1650元，比国产的还便宜好用。
胶片是柯达的，以前用过乐凯的，不如柯达。
我很少用丽春红或考马斯染膜或染胶，总觉得是脱裤子放屁的事。
4. Western Blot实验关键
Western Blot操作步骤多，每一步的失误都会造成全盘失败，综合而言，抗体仍然是决
定成败的关键，如果抗体很滥，就是神仙也没招。其中内参抗体很重要，因为内参抗
体的选择关系到全盘实验的考评。Actin，Tubulin，GAPDH我都用过，Actin，Tubulin
的缺点是有时候会出现复带，比较稳定的还是GAPDH。如果用心看看cell，nature，
science上的文章，大多用GAPDH做内参。进口的，国内分装的，国产的，我都用过。进
口的最强的1:10000都能做出条带（Upstate，现在被Minipore招安了），国内分装的
也好用，但就是不好回收重复使用，国产的一般只能用一次。我要特别强调的是，实
验室里最贵的抗体实际上是内参抗体，因为只要Western Blot开工，每次都得用内参抗
体，而一般目的蛋白的抗体也就用几次，重复三次就了事。但内参抗体是不折不扣的耗
材，严格意义上将，每跑一次胶，就得杂一次内参，使用频率最高决定了内参是最花
钱的抗体。我也自己制备过内参抗体，但好像因为种属同源性太高，背景总是不干净。
进口的好，太贵；国产的只能使用一次，年终算账，不比进口的便宜。我自己的体会
是多抗制备并不是技术含量极高的事，为什么国内企业高的早不了，低的造不好呢？现
在我用的是杭州贤至的 GAPDH兔多抗，200微升420元钱，我在蛋白上样量12微升/孔的
情况下，按1:2000稀释比，条带非常清晰，没有杂带，是我目前用过的最好的国产抗
体，我估计按1:4000照样能做出来，因为按按1:2000稀释做，在暗室里点上ECL后肉眼
清楚地看到荧光条带。抗体我在不加叠氮化钠的情况下4 度过夜杂交，可回收重复使用
5到6次。最早我是2008年在丁香通上看到了杭州贤至（当时名叫杭州松华）发布的广告
，我就怂恿实验室主管买了2支，很好用，现在实验室都没有用完；2009年我的一个
朋友做western，我推荐他又买了1支，做出来的效果确实好，2009年底我到了新的实验
室，western的全套我在新实验室重新建立，啥都采购齐了，可就是买不到杭州松华的
内参抗体，我上网再也找不到这个公司的网页了，没办法，只好一直噌朋友的内参抗体
用。我有个陋习，就是实验中用顺了用稳定了试剂轻易不愿意更换品牌。还好，今年7
月份我终于找到了当年的通讯记录，一联系才知道他们改名叫杭州贤至生物科技有限公
司了，呵呵，改了个名，害我找了大半年。第三次买到的GAPDH内参抗体，还是好用，
1:2000，条带清晰，回收重复用，照样work，截止目前，我的新导师对我采购的一堆
试剂还没有不满意的，嘿嘿！草根出生，我也照样有我穷人的劳斯莱斯。
5.关于奶粉，膜的选择和显影定影
奶粉看似简单，其实很重要，如果要凑合，可以到超市买光明的脱脂奶粉。奶粉质量不
好，会最终导致显影要么漆黑一片，要么啥都没。fluka的很好，可惜因为疯牛病的原
因，现在海关禁止进口美国牛制品。我现在用的bd的，很好很稳定，如果回收使用，
500可以用很长时间。细菌达到一定极限后，会导致tbst 里的奶粉变质，表现为发绿发
臭，一种肉眼可察觉的淡淡的绿，一种鼻子凑过去能嗅出的臭，这时候就得扔了。
nc膜，pvdf膜我都用过，现在我已经固定下来用密理博的0.45微米的pvdf膜。pvdf膜的
好处是蛋白载量大，韧性好。唯一的麻烦是事先得用甲醇泡几分钟，目的好像是为了
增强膜的正电荷。甲醇泡完后，得在转移缓冲液里泡一两分钟。国内用nc膜的人多一些
，主要是因为nc膜有分装的小片，忽悠老板买一张膜就100元钱，老板肯定乐意，若是
说膜得花上千元，老板就有可能长时间的思考，然后过些日子再答复你。所以大多数人
会采取前一种方式，当然得告诉老板好几次，膜就100元钱。我第一次用到pvdf膜是和
好几个实验室合资买了一卷，我出了475元，类似于打的拼车的方式。现在pvdf膜国内
大概是 1600元到1700元一卷，33厘米*375厘米，够好几个人用好长时间了，膜假货不
多，至少我没有见过。我们几个拼车的穷弟兄拿着尺子分赃的时候才发现本地供货商
给我们送的货少了80厘米，嘿嘿，穷鬼撵着杀叫鬼，我们花钱容易吗！所以交涉，再交
涉，直到他把我们的血汗膜返还才罢休。现在我基本是从北京的欣津科和华美买，大
概1700元一卷，完完整整。
0.45微米的pvdf膜我用5%的脱脂奶粉（溶于tbst中）室温封闭1小时，0.22微米的用8%
的脱脂奶粉。bsa我很少用，主要是bsa会出现封闭不均匀的情况。我也很少用0.22微
米的膜，原因是背景不干净，再者无论是封闭时间还是洗膜时间都得延长。标准教程上
推荐20kd以下的分子用0.22 微米的膜，我杂过最小的分子是cleaved-caspase3,12ka，
按我在一楼的转膜条件，在0.45微米的膜上清清楚楚。我在上海的师弟他们转 7ka的分
子也用0.45微米的，没出过事。废话一句，我师弟的实验室可是国家重点，那个富呀，
让我闭上眼想想吧，那可是屎壳郎掉到了化粪池的感觉。
一抗我一般4度摇床过夜，洗膜3此，每次5分钟。要注意的是，如果一抗里添加了叠氮
化钠，务必洗膜5次，每次10分钟，因为叠氮化钠会灭活二抗偶联的辣根过氧化物酶（
hrp）活性。二抗我用的是中杉金桥分装的，120元一支，通常1:5000，室温1小时，然
后洗膜三次，每次5分钟。
奶粉，一抗，二抗，我都回收，从开始到现在，一直如此。因为我不敢忘记自己贼的出
身。我的一抗是国外的一位老师送给实验室的，刚开始的半年我啥都做不出来，以至
于导师在平安夜领我到教堂祈祷。上海的师弟知道后，每次裁膜的时候给我一小片一小
片日积月累了一些，二抗只拿到了10微升，我怕实验室的人发现，一直是熬夜做
western。可最终还是因为我自己嘴不牢靠，导致东窗事发，师弟险些被开除，事情败
露的那天，师弟在长途电话的那边哭，我在这边哭，写着写着，我的眼泪又一次的盈
眶而出，说不出的辛酸与悲凉，师弟说他承担一切责任，让我装作不知道，那天晚上，
我给他的导师写了一封长信，只求能保住师弟。老天保佑，他导师让师弟写检查认错
。那以后，我再也没有让师弟为我偷过东西，我不能再为自己的理想让朋友付出代价。
虽然现在实验室的老板比较大方，我依然坚持着回收试剂的习惯，我始终不能忘记自
己western blot的开始。
一般8.3*4.3厘米的膜，大概要400微升的ecl混合液。加ecl我一般就在灯光下，或者白
天把窗帘拉上。加好ecl，覆上保鲜膜后，我才端着暗盒进暗室，暗室里我的暗室红灯
始终开着，没有那么可怕。在暗室里，我一般是剪4张同样尺寸的胶片，叠在一起，压
在膜上方，暗盒一扣，就干别的事情去了。5个小时或过夜，我再把胶片显影，显影我
起初很注意技巧，但现在基本上是在显影液里放10分钟，捞出来放到水盘里涮一涮，然
后在定影液里放十分钟。我一般总能找到一张理想的胶片，因为胶片叠加到一起后，
层层屏蔽，从而逐渐递减荧光强度，我试过多次，即便是荧光强度最强的内参，也至多
能达到最上面的第四层胶片。所以显定影后，肯定有曝光过度的胶片，但也肯定有趋
势，背景，强度恰到好处的一张，嘿嘿，傻瓜做法。
傻瓜做法看似呆笨，实则不然。我在很长的一段时间里，都是读秒，或三分钟，或15分
钟，或半小时，或1小时取出胶片显影，眼睛紧紧盯着，一看到条带就捞出来定影。如
果不理想，再压胶片，再等，再取再投再捞，活脱脱是个“猴埋儿”。西北人传说小猴
夭折了，母猴把小猴埋到土里面，一会又挖出来，再埋进去，又挖出来…反复无止。
显定影时如果采取猴埋儿式的技巧，是最费胶片，最费时间，最费心力的做法。所以我
是傻瓜就用傻瓜的办法。
我用过好几个品牌的国产ecl，和进口的ecl也做过对照。国产的一半是a液b液总共50毫
升180元钱，单价3.6元/毫升，一般肉眼可见的荧光强度可持续1个小时，pierce和
milipore的可以持续3小时。milipore的麻烦之处在于由a液b液c液三组成分组成，费枪
头，费脑子。现在我固定使用pierce的super ecl，1650元500毫升，折算下来是3.3元
/毫升。上海吉泰是代理。好像分子克隆上写出了ecl的配方，技术含量并不高，
胶片我用过医院放射科的，乐凯的，柯达的，柯达现在小胶片（小暗盒尺寸）好像是
130元/50张，乐凯的是其价格的一半。乐凯的缺点在于胶片容易出现划痕，有莫名奇
妙的背景，虽然瑕不掩瑜，但还是让人不爽，再就是感光不如柯达的灵敏。这些我都比
对过。如果细心地把二者胶片厚度比比，也可看出差距。我就此请教过甘肃的乐凯总
代理，他说根源出在牛身上。
显影液定影液我一直用乐凯的，便宜，量又足，谁用谁说好。进口的从未染指，连想都
没想过，呵呵，我内心里还是极其渴望支持国货的，爱之深，恨之切啊！
6.总结
从2005年第一次见到抗体到现在，我已经做western blot实验整整五年了。五年里，太
多的磨难，太多的惊喜，太多的感触，太多的代价。现在我做博士后，我指导的学生也
能一次就上手，虽然他们也会出错，但我很少责备他们，因为我知道自己的路途也并
不顺利，如果过度的责难他们，会让他们失去信心，而且更严重的是会导致他们遮遮掩
掩，我从来不怕实验做不出来结果，就怕查不出失败的原因。
我喜欢western blot技术，甚至偏爱或痴迷。最夸张的时候是一天连跑带转了八张膜，
实验最不顺利的那两个月我天天就睡在实验室里，有时候三天三夜不睡觉。我不知道自
己借了多少钱从丁香园的二手资源版淘过别人用剩的抗体，至今我穿的最贵的裤子也
就80元钱，但花1000元买抗体我从来没有觉得破费。好在我的家人和朋友们理解我，
支持我，让我能逐步实现自己的愿望。五年里，从器具，试剂，仪器，甚至如何用滤纸
，我都形成了自己独有的体系和诀窍，我的一切东东都有品牌，这些品牌组合起来就
是穷人的劳斯莱斯。
回想过去，内心仍然会浸没到悲凉与辛酸中。最难受的时候是做p21抗体，整整半年，
从丁香园淘了五个品牌的抗体，都做不出来。最后逼着导师买cst的抗体，还是不出，
那时候正好是2008年雪灾，抗体在公路上走了半个月，我收到抗体是大年初二，兴奋地
上样，转膜，还是没有，当时我感觉自己就好像浸没在冰窖里。宿舍里暖气不好，第
二天我起床时，房子里的洗脸水都已结冰，和我的心绪一模一样。好在上海吉泰是一级
代理，让我投诉，cst美国总部发回来他们的蛋白阳性对照品，再试，p21出来了，技
术支持是个印度人，一眼就看出来我没有用超声波裂解。我们实验室没有这个东东，我
怎么就想不到问题就出在这呢！从投诉到解决问题又是两个月。因为western，造成我
博士延期一年半，害得师弟差点被开除，这也是我主动和导师关系疏远的开始。
但我还是痴迷western，在我心里，western blot技术本身就是穷人的劳斯莱斯。跑一
次胶，我一次可以在两张膜上裁切出13种分子，我想不出还有哪项技术能一次实现如此
之多的指标。Western 稳定，直观，看着胶片上那粗细浓淡变化的条带，就好像自己置
身细胞内部，看着那些分子组合跳舞。我内心里一直非常感激当年馈赠抗体的那位老师
，是他让我踏上了信号转导的道路，也是因为western，我一度和他几乎决裂。在做
western之前，我看文献几乎只看review，因为我看不懂实验性论文的图片，也正是做
western，我才开始真正的踏上科研道路。我逐渐能看懂IP,CO-IP,EMSA,CHIP，我有了
更多的梦想与愿望。五年中，我最得意的是陪着western blto的发明人乔治斯塔克(
George R. Stark)院士去敦煌玩,老头年过70，动过心脏手术不久，仍然坚持赤脚爬上
陡峭的鸣沙山。我们登顶歇气时，老头一声不吭地又从山顶一步步走下去，从半山腰
挖什么东西，等他再上来，我们才看清楚，他手里拿着两个游客随地扔弃的矿泉水瓶子
。老头一直把那两个国货拎到了山下的垃圾箱里。这是老头给我最深刻的记忆，境当
谋高远，一个人的精神境界决定了他专业道路的高远。
从western实验我总结出，实验上根本省不下来钱，一个环节的烂货就会导致全盘失败
。对于实验设计而言，也是如此，一个步骤的bug会导致整个实验立题和评估的逻辑混
乱。如果要追求性价比，也就是如何发挥穷人的劳斯莱斯的最大收益，那从一开始就要
按秋后算账的原则选择试剂，要算总账；如果要让实验顺顺利利，那就得注意每一个
环节，步步为营，细节决定成败。

【在 b******n 的大作中提到】

: 1. 抗体的选择
: 对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
: 简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
: 的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
: 体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
: 进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
: 而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的
: 抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
: 有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
: 通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗

O*e2012-03-03 08:03

59 楼

不错。感谢分享你的宝贵经验！

【在 p********e 的大作中提到】

: WB抗体最重要，其他都次要。话又说回来，在哪儿抗体不重要呢？ELISA, IP, Flow,
: IHC, ChIP, ChIP-seq, Fluorescence Microscopy.......如果抗体好，手笨点，硬件
: 差点，都是能做出来的。如果抗体不行，上帝他老人家来了也没辙。
: 其实生物男很多时间都花在尝试不同的抗体，求老板买更多抗体，以及向抗体公司投诉
: 上了。
: 可是如何选抗体呢？哥根据自己的经验体会，给大家提点建议。
: 在美国有300多家卖抗体的公司，全世界范围就更多了。可是我们常接触的就那么几家
: 。我把他们分成两类："包罗万象型"和"少而精型"。
: 最著名的“包罗万象型”公司有三家：AbCam, Sigma和Santa Cruz。这三位的产品也太
: 全了，无论你需要什么抗体，他们都有。至于是否能用，那就再说了。我个人的经验

q*52012-03-03 08:03

60 楼

赞分享

l*12012-03-03 08:03

61 楼

按巴黎统筹规定
禁止出口后清的吧
全自动的western blot machine Made in Germany/France/USA
//www.referenceforbusiness.com/encyclopedia/Con-Cos/Coordinating-Committee-for-Multilateral-
Export-Controls-and-the-Wassenaar-Arrangement.html#b
証明和军用单位完全无关以前比如美国总领事馆以内用的除外
http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31590799.html
同主题阅读：有人用过或者知道自动的western blot machine 么？
[版面:生物学][首篇作者：sunnyday] , 2011年10月24日

【在 b******n 的大作中提到】

: 1. 抗体的选择
: 对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
: 简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
: 的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
: 体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
: 进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
: 而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的
: 抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
: 有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
: 通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗

B*s2012-03-03 08:03

62 楼

http://www.aliexpress.com/store/323852
实验耗材

B*s2012-03-03 08:03

63 楼

http://www.aliexpress.com/store/323852
实验耗材

y*k2012-03-03 08:03

64 楼

我说怎么看标题隐约有映像，进来一看原来有人挖坟...

T*r2012-03-03 08:03

65 楼

看了你和師弟那段，我都要眼淚汪汪了....
不容易啊，這精神，這友情，感動了
我要好好珍惜了

【在 b******n 的大作中提到】

: 1. 抗体的选择
: 对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
: 简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
: 的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
: 体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
: 进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
: 而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的
: 抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
: 有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
: 通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗

C*e2012-03-03 08:03

66 楼

好文，收藏了
原来就做个WB国内还有这么多trick

【在 b******n 的大作中提到】

: 1. 抗体的选择
: 对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
: 简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
: 的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
: 体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
: 进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
: 而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的
: 抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
: 有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
: 通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗

d*l2012-03-03 08:03

67 楼

我见过有人回手abcam抗体管，听说回中国装点东西卖. good luck

【在 b******n 的大作中提到】

: 1. 抗体的选择
: 对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很
: 简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区
: 的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗
: 体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。
: 进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），
: 而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的
: 抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没
: 有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是
: 通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗

b*n2012-03-03 08:03

68 楼

生活不容易，做点想做的事情更加不容易
有点事情一些人视为粪土般的cheap，另外一些人却要千方百计去追求

【在 C*******e 的大作中提到】

: 好文，收藏了
: 原来就做个WB国内还有这么多trick

w*n2012-03-03 08:03

69 楼

sigh 当年真心不容易。。。。

【在 s******s 的大作中提到】

: //nod nod, 国内原来实验室就是煮洗枪头，然后高压灭菌。
: 灭菌锅就是一个大号高压锅，温度控制就靠边上看着，是放四个
: 煤气灯还是移掉两个。冬天还行，夏天烘得一头汗。
: 当年基本上枪头就两种，大包散装自己装盒高压灭菌的属于高
: 档武器，做DNA才能用；普通实验通通都用回收洗过的；有一次做
: RNA，老板良心发现买了一盒全新p200，我捧在手里热泪盈眶啊。

s*g2012-03-03 08:03

70 楼

是啊,以前在国内枪头也要煮洗灭菌回收的

【在 b******n 的大作中提到】

: 呵呵，没在国内做过研究吧？
: 在国内做研究最头痛的就是国产和进口试剂的使用问题
: 给老板省钱用国产的，做不出来老板不待见你
: 用进口的吧，价格肯定不便宜，如果因为种种原因没做出来那可是亚历山大
: 以后再想要试剂就别想了
: 这都是研究之外的事情，所以美国的研究环境还是很纯的
: Sunnyday以前回忆苦日子蹭枪头，有钱了定很多tip被枪头盒环绕感觉很幸福
: 那他是没经历过枪头也要煮洗灭菌回收的时光吧

s*g2012-03-03 08:03

71 楼

cell signaling
upsate
Abcam
...
确实是抗体可以用好几次...我常干这事!

【在 b******s 的大作中提到】

: 个人认为质量最可靠还是cell signaling 的抗体。
: 有没有人用过那个几小时内能把从SDS到2抗全部做出来的神机？效果如何？对蛋白的分
: 子量有没有限制？

s*g2012-03-03 08:03

72 楼

在国内试剂/胶..都是自己配...到了美国不用了,把我乐的屁颠屁颠的!

【在 h*******o 的大作中提到】

: 这个还行吧
: 2002左右的大部分实验室都这样
: 我见过第一批长江学者实验室都是回收枪头的,本科生进实验室先洗一个学期的枪头
: 我当时的实验室是一个很小的实验室,所有的东西都是自己配的,耗材都是从海门的小作
: 坊买的, 养细胞的瓶子都是重复使用,用洗液泡,泡完再洗
: 洗液也是自己配.....蹭一下裤子就是一个洞.....
: media也是自己配,然后再滤
: 血清分装成一毫升的管子...

s*g2012-03-03 08:03

73 楼

BD的贵啊.我们也是flow上才提到BD.其他就CST了!

work

【在 v***a 的大作中提到】

: 这些大而全或小而精的公司的产品我都用过，非常赞同你的观点～只是奇怪为什么你在
: flow上才提到BD（不过我没做过flow），我觉得BD抗体是我用得最好，基本上100%work
: 的。

a*72012-03-03 08:03

74 楼

去年就看过一样的文章了，这又给翻出来了

M*n2012-03-03 08:03

75 楼

abcam的抗体太贵了，比人家的贵100刀。
现在不用了。

s*g2012-03-03 08:03

76 楼

"CST cellsignaling？ good，most work"
--CST mAB有的信号太强了,以至于药物处理和未处理的都看不出差异.不如Poly的好用.
大家买新出来的CST mAB要千万小心啊!而且现在经济不好,这种去找他们,屁都不放一个
.根本不给你换Poly的.POLY的就能看出差异!我们实验室至少有十种CST mAB把我们坑了!
Ex:
Caspase 3
LC3B
BCL2

【在 g*********5 的大作中提到】

: nnd，santa cruz的抗体80%都是狗死一堆
: abcam 抗体一半都不work。
: CST cellsignaling？ good，most work
: 我认为好的抗体公司
: proteintech， cellsignal, epitomics
: 一般的
: RnD Abcam
: 差的
: santa cruz