c*n
2 楼
今天早上5：30 左右收到email，是绿卡的RFE。 还没有收到信件，不知道要求补缴什么
材料。感觉材料都挺全的呀。。
求bless，顺利拿到绿卡后发包子！
TSC
PD:03/2008
RD:12/2011
EAD/AP: 1/30/2012
RFE：2/27/2012
材料。感觉材料都挺全的呀。。
求bless，顺利拿到绿卡后发包子！
TSC
PD:03/2008
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EAD/AP: 1/30/2012
RFE：2/27/2012
i*0
3 楼
用embryoid body做了一批实验,先在ES细胞里面转了一些gene, 是cmv的vector, G418
的seletion,然后挑克隆,虽然没有看到GFP的信号,但是我还是冒险试了一下EB的培养,
结果发现EB的表型和预期的一样,但是用WB检测的时候,看不到融合蛋白的表达.老板看
了不是很相信,非要做出wb,检测到蛋白,才能说明gene 的功能和你的EB表型的关系.我
搞的那个很郁闷呀, 构建, 转了8个gene呀,3个多月的工作呀,伤不起呀.
要是能检测到蛋白,这个project都差不多可以close了.
的seletion,然后挑克隆,虽然没有看到GFP的信号,但是我还是冒险试了一下EB的培养,
结果发现EB的表型和预期的一样,但是用WB检测的时候,看不到融合蛋白的表达.老板看
了不是很相信,非要做出wb,检测到蛋白,才能说明gene 的功能和你的EB表型的关系.我
搞的那个很郁闷呀, 构建, 转了8个gene呀,3个多月的工作呀,伤不起呀.
要是能检测到蛋白,这个project都差不多可以close了.
f*i
4 楼
这个得和你自己的公司联系，反正我可以自己改，也不要什么fee
N*r
5 楼
Ｂｌｅｓｓ
看来是开始处理１月交的申请了。
看来是开始处理１月交的申请了。
y*8
6 楼
CMV promoter sometimes is too strong, rather than too week, to avoid
silencing during the process of stable line selection.
A conditional or inducible promoter would be better.
silencing during the process of stable line selection.
A conditional or inducible promoter would be better.
p*n
7 楼
我可以自己改，很方便
c*l
8 楼
Bless
i*0
9 楼
some promotor choice suggestions?
x*u
10 楼
bless
y*8
11 楼
You might want to use Tet-On or Tet-Off system, if conveniently available.
You could also diminish silencing by addition of insulator sequences to your
promoter.
You could also diminish silencing by addition of insulator sequences to your
promoter.
A*7
12 楼
bless
r*e
13 楼
说过很多遍了,cmv 在es cell中不行。
用EF1alpha promoter.
G418
【在 i*********0 的大作中提到】
: 用embryoid body做了一批实验,先在ES细胞里面转了一些gene, 是cmv的vector, G418
: 的seletion,然后挑克隆,虽然没有看到GFP的信号,但是我还是冒险试了一下EB的培养,
: 结果发现EB的表型和预期的一样,但是用WB检测的时候,看不到融合蛋白的表达.老板看
: 了不是很相信,非要做出wb,检测到蛋白,才能说明gene 的功能和你的EB表型的关系.我
: 搞的那个很郁闷呀, 构建, 转了8个gene呀,3个多月的工作呀,伤不起呀.
: 要是能检测到蛋白,这个project都差不多可以close了.
用EF1alpha promoter.
G418
【在 i*********0 的大作中提到】
: 用embryoid body做了一批实验,先在ES细胞里面转了一些gene, 是cmv的vector, G418
: 的seletion,然后挑克隆,虽然没有看到GFP的信号,但是我还是冒险试了一下EB的培养,
: 结果发现EB的表型和预期的一样,但是用WB检测的时候,看不到融合蛋白的表达.老板看
: 了不是很相信,非要做出wb,检测到蛋白,才能说明gene 的功能和你的EB表型的关系.我
: 搞的那个很郁闷呀, 构建, 转了8个gene呀,3个多月的工作呀,伤不起呀.
: 要是能检测到蛋白,这个project都差不多可以close了.
a*1
14 楼
bless
【在 c********n 的大作中提到】
: 今天早上5：30 左右收到email，是绿卡的RFE。 还没有收到信件，不知道要求补缴什么
: 材料。感觉材料都挺全的呀。。
: 求bless，顺利拿到绿卡后发包子！
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【在 c********n 的大作中提到】
: 今天早上5：30 左右收到email，是绿卡的RFE。 还没有收到信件，不知道要求补缴什么
: 材料。感觉材料都挺全的呀。。
: 求bless，顺利拿到绿卡后发包子！
: TSC
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s*s
15 楼
记得有paper说CMV在ES里面表达N天以后越来越弱，最后几乎被silence掉了。
G418
【在 i*********0 的大作中提到】
: 用embryoid body做了一批实验,先在ES细胞里面转了一些gene, 是cmv的vector, G418
: 的seletion,然后挑克隆,虽然没有看到GFP的信号,但是我还是冒险试了一下EB的培养,
: 结果发现EB的表型和预期的一样,但是用WB检测的时候,看不到融合蛋白的表达.老板看
: 了不是很相信,非要做出wb,检测到蛋白,才能说明gene 的功能和你的EB表型的关系.我
: 搞的那个很郁闷呀, 构建, 转了8个gene呀,3个多月的工作呀,伤不起呀.
: 要是能检测到蛋白,这个project都差不多可以close了.
G418
【在 i*********0 的大作中提到】
: 用embryoid body做了一批实验,先在ES细胞里面转了一些gene, 是cmv的vector, G418
: 的seletion,然后挑克隆,虽然没有看到GFP的信号,但是我还是冒险试了一下EB的培养,
: 结果发现EB的表型和预期的一样,但是用WB检测的时候,看不到融合蛋白的表达.老板看
: 了不是很相信,非要做出wb,检测到蛋白,才能说明gene 的功能和你的EB表型的关系.我
: 搞的那个很郁闷呀, 构建, 转了8个gene呀,3个多月的工作呀,伤不起呀.
: 要是能检测到蛋白,这个project都差不多可以close了.
R*r
16 楼
bless
m*5
17 楼
http://www.nature.com/ncb/journal/v10/n3/full/ncb1696.html
this is one of
the most important paper about mesp1, done by cmv
【在 i*********0 的大作中提到】
: 用embryoid body做了一批实验,先在ES细胞里面转了一些gene, 是cmv的vector, G418
: 的seletion,然后挑克隆,虽然没有看到GFP的信号,但是我还是冒险试了一下EB的培养,
: 结果发现EB的表型和预期的一样,但是用WB检测的时候,看不到融合蛋白的表达.老板看
: 了不是很相信,非要做出wb,检测到蛋白,才能说明gene 的功能和你的EB表型的关系.我
: 搞的那个很郁闷呀, 构建, 转了8个gene呀,3个多月的工作呀,伤不起呀.
: 要是能检测到蛋白,这个project都差不多可以close了.
this is one of
the most important paper about mesp1, done by cmv
【在 i*********0 的大作中提到】
: 用embryoid body做了一批实验,先在ES细胞里面转了一些gene, 是cmv的vector, G418
: 的seletion,然后挑克隆,虽然没有看到GFP的信号,但是我还是冒险试了一下EB的培养,
: 结果发现EB的表型和预期的一样,但是用WB检测的时候,看不到融合蛋白的表达.老板看
: 了不是很相信,非要做出wb,检测到蛋白,才能说明gene 的功能和你的EB表型的关系.我
: 搞的那个很郁闷呀, 构建, 转了8个gene呀,3个多月的工作呀,伤不起呀.
: 要是能检测到蛋白,这个project都差不多可以close了.
b*n
18 楼
Bless, birth certificate?
m*5
19 楼
yes, this is actually an advantage of using cmv. if the expression is too
strong, the phenotype might not have anything to do with what happened in
vivo
【在 s******s 的大作中提到】
: 记得有paper说CMV在ES里面表达N天以后越来越弱，最后几乎被silence掉了。
:
: G418
strong, the phenotype might not have anything to do with what happened in
vivo
【在 s******s 的大作中提到】
: 记得有paper说CMV在ES里面表达N天以后越来越弱，最后几乎被silence掉了。
:
: G418
m*c
20 楼
bless
【在 c********n 的大作中提到】
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【在 c********n 的大作中提到】
: 今天早上5：30 左右收到email，是绿卡的RFE。 还没有收到信件，不知道要求补缴什么
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m*z
21 楼
你有在ES细胞里用过tet-on system吗？用的什么promoter？
your
【在 y******8 的大作中提到】
: You might want to use Tet-On or Tet-Off system, if conveniently available.
: You could also diminish silencing by addition of insulator sequences to your
: promoter.
your
【在 y******8 的大作中提到】
: You might want to use Tet-On or Tet-Off system, if conveniently available.
: You could also diminish silencing by addition of insulator sequences to your
: promoter.
f*l
22 楼
bless
y*8
23 楼
Not an expert on ES cell. But I think a tet-on line should be available
somewhere.
【在 m*****z 的大作中提到】
: 你有在ES细胞里用过tet-on system吗？用的什么promoter？
:
: your
somewhere.
【在 m*****z 的大作中提到】
: 你有在ES细胞里用过tet-on system吗？用的什么promoter？
:
: your
c*s
24 楼
bless
C*X
25 楼
bless
j*4
26 楼
BIG BLESS
t*9
27 楼
bless.
USCIS是经常没事找事
如果是BC 或者其他已经提供的东西， 把已经给的东西再给一次就行了
【在 c********n 的大作中提到】
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USCIS是经常没事找事
如果是BC 或者其他已经提供的东西， 把已经给的东西再给一次就行了
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c*t
28 楼
Bless
今天早上5：30 左右收到email，是绿卡的RFE。 还没有收到信件，不是要求补缴什么
材料。感觉材料都挺全的呀。。求bless，顺利拿到绿卡后发包子！TSCPD:03/200.....
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B*o
29 楼
Bless
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x*a
30 楼
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n*t
31 楼
Bless
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32 楼
Good luck!
什么
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什么
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a*a
33 楼
bless
什么
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什么
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a*s
34 楼
bless
e*d
35 楼
bless
什么
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l*e
36 楼
bless
w*h
37 楼
bless
h*a
38 楼
bless
y*y
39 楼
bless
m*e
40 楼
bless
c*t
41 楼
祝福
z*e
42 楼
bless
j*y
43 楼
bless
z*o
44 楼
bless
x*n
45 楼
祝福顺利
b*5
46 楼
bless
p*l
47 楼
祝福
L*g
48 楼
相似命运同祝福...
什么
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什么
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L*g
49 楼
相似命运同祝福...
什么
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bless!
z*q
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s*l
53 楼
排
c*d
54 楼
bless
l*i
55 楼
bless
m*u
56 楼
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h*n
57 楼
bless
g*k
58 楼
Bless!
什么
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m*o
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祝福
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p*u
61 楼
bless!
m*t
62 楼
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z*8
63 楼
bless
T*e
64 楼
bless
什么
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【在 c********n 的大作中提到】
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: 材料。感觉材料都挺全的呀。。
: 求bless，顺利拿到绿卡后发包子！
: TSC
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x*u
65 楼
祝福祝福
s*r
66 楼
big bless
什么
【在 c********n 的大作中提到】
: 今天早上5：30 左右收到email，是绿卡的RFE。 还没有收到信件，不知道要求补缴什么
: 材料。感觉材料都挺全的呀。。
: 求bless，顺利拿到绿卡后发包子！
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什么
【在 c********n 的大作中提到】
: 今天早上5：30 左右收到email，是绿卡的RFE。 还没有收到信件，不知道要求补缴什么
: 材料。感觉材料都挺全的呀。。
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b*w
67 楼
bless
l*e
68 楼
bless
g*i
69 楼
祝福你们。我们同样情况，祝福我们。
什么
【在 c********n 的大作中提到】
: 今天早上5：30 左右收到email，是绿卡的RFE。 还没有收到信件，不知道要求补缴什么
: 材料。感觉材料都挺全的呀。。
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什么
【在 c********n 的大作中提到】
: 今天早上5：30 左右收到email，是绿卡的RFE。 还没有收到信件，不知道要求补缴什么
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h*i
70 楼
big bless
m*6
71 楼
bless
r*0
72 楼
bless
m*h
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bless
m*7
74 楼
bless!
g*3
75 楼
Bless!
什么
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什么
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: 材料。感觉材料都挺全的呀。。
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D*e
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bless!
什么
【在 c********n 的大作中提到】
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: 材料。感觉材料都挺全的呀。。
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什么
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c*s
77 楼
Bless
w*3
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bless.
s*a
79 楼
bless
什么
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什么
【在 c********n 的大作中提到】
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K*y
80 楼
BlesS
G*y
81 楼
bless
什么
【在 c********n 的大作中提到】
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什么
【在 c********n 的大作中提到】
: 今天早上5：30 左右收到email，是绿卡的RFE。 还没有收到信件，不知道要求补缴什么
: 材料。感觉材料都挺全的呀。。
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v*0
82 楼
Big Bless!!!
G*D
83 楼
bless
什么
【在 c********n 的大作中提到】
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什么
【在 c********n 的大作中提到】
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S*8
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快了，祝福，恭喜！快发包子！
什么
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l*n
85 楼
bless
l*f
86 楼
Bless
C*s
87 楼
Bless!
z*g
88 楼
big bless
c*n
89 楼
bless
z*b
90 楼
bless
w*6
91 楼
Bless!
什么
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b*y
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Bless!
v*n
93 楼
bless
u*y
94 楼
bless
n*y
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bless
p*l
96 楼
bless
b*t
97 楼
bless~~~
什么
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Bless
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【在 c********n 的大作中提到】
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f*3
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s*m
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bless
g*y
104 楼
bless
l*y
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bless!!
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x*a
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bless!
h*7
107 楼
bless
k*3
108 楼
bless
A*n
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bless
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zan
I*i
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bless, green soon.
x*m
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bless
h*n
113 楼
bless
l*d
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祝福！希望一切顺利！
什么
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115 楼
bless
什么
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【在 c********n 的大作中提到】
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bless you and me.
I filed before you, still initial.
I filed before you, still initial.
m*r
117 楼
BLESS........
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