求教qPCR normalization gene 选择# Biology - 生物学
i*s
1 楼
本人小硕，工作两年。要求公司办绿卡，公司说办EB3.
记得EB2硕士以上，EB3学士以上，除了这个条件还有什么别的？ 似乎还有Prevailing
Wage的要求？
哪位指点一下，是否够得上办EB2 ?
记得EB2硕士以上，EB3学士以上，除了这个条件还有什么别的？ 似乎还有Prevailing
Wage的要求？
哪位指点一下，是否够得上办EB2 ?
L*s
2 楼
加上税，insurance等，一个月要付2342$
是不是太多了。。。
是不是太多了。。。
m*o
3 楼
用actin, GAPDH, TATA Binding protein(TBP), and 18s rRNA. Actin and tbp 显示
类似的降低，但是18s没变化。该选用那个来normalization呢？很多文章用18s，大家
用的时候是不是你的target gene 用1ulRT产物，而用18s的时候要稀释至少100倍呢，
不然Ct就在10，会不会因为量太高而显示不出该有的差异呢？作的是WT和knockout 老
鼠的liver，大家有没有什么好的建议？谢谢！
感觉选不好normalization， 做实验就好像有个定时炸弹在旁边一样不舒服。谢谢任何
建议！
类似的降低，但是18s没变化。该选用那个来normalization呢？很多文章用18s，大家
用的时候是不是你的target gene 用1ulRT产物，而用18s的时候要稀释至少100倍呢，
不然Ct就在10，会不会因为量太高而显示不出该有的差异呢？作的是WT和knockout 老
鼠的liver，大家有没有什么好的建议？谢谢！
感觉选不好normalization， 做实验就好像有个定时炸弹在旁边一样不舒服。谢谢任何
建议！
B*i
4 楼
还有就是你的职位必须是要求硕士能做或至少5年的经验的学士，不包括你在现在公司
的经验。
的经验。
l*r
5 楼
depends on your salary
k*o
6 楼
http://genomebiology.com/2002/3/7/research/0034/abstract
这个方法我觉得是目前为止很可取的一个。不过实际操作中，没有多少实验室这样做的
。
这个方法我觉得是目前为止很可取的一个。不过实际操作中，没有多少实验室这样做的
。
i*s
7 楼
职位要求没有问题。感觉我硕士学位应该能办EB2,我得找公司谈谈。
另，现在PERM, 劳工卡，140， 486等等每一步大概要等多久啊？
谢谢。
【在 B********i 的大作中提到】
: 还有就是你的职位必须是要求硕士能做或至少5年的经验的学士，不包括你在现在公司
: 的经验。
另，现在PERM, 劳工卡，140， 486等等每一步大概要等多久啊？
谢谢。
【在 B********i 的大作中提到】
: 还有就是你的职位必须是要求硕士能做或至少5年的经验的学士，不包括你在现在公司
: 的经验。
m*o
8 楼
十分感谢！文章有些难，需要数学背景，打算再用文章里的UBC和rps18检测。如果都和
actin有类似的降低，说明那个样品就是低。用18SRNA总是觉得量太高，无法真正
normalization。而且18s是rRNA。
actin有类似的降低，说明那个样品就是低。用18SRNA总是觉得量太高，无法真正
normalization。而且18s是rRNA。
B*i
9 楼
Perm takes 6-10 months without 审计dependent how luck you are，140 may take
3 months for whom has approved perm. We only apply for 485 rather than 486,
and no one knows how long it will take for 485 if you are EB2 or EB3.
【在 i**s 的大作中提到】
: 职位要求没有问题。感觉我硕士学位应该能办EB2,我得找公司谈谈。
: 另，现在PERM, 劳工卡，140， 486等等每一步大概要等多久啊？
: 谢谢。
3 months for whom has approved perm. We only apply for 485 rather than 486,
and no one knows how long it will take for 485 if you are EB2 or EB3.
【在 i**s 的大作中提到】
: 职位要求没有问题。感觉我硕士学位应该能办EB2,我得找公司谈谈。
: 另，现在PERM, 劳工卡，140， 486等等每一步大概要等多久啊？
: 谢谢。
A*y
10 楼
What's your primer linearity range? If you don't know what I am talking
about go read up on RT-PCR and disregard all your results. Ct=10 is not
that bad, a lot of highly expressed protein are around there.
about go read up on RT-PCR and disregard all your results. Ct=10 is not
that bad, a lot of highly expressed protein are around there.
n*0
11 楼
一般不都是推荐ct在15-35么？
【在 A******y 的大作中提到】
: What's your primer linearity range? If you don't know what I am talking
: about go read up on RT-PCR and disregard all your results. Ct=10 is not
: that bad, a lot of highly expressed protein are around there.
【在 A******y 的大作中提到】
: What's your primer linearity range? If you don't know what I am talking
: about go read up on RT-PCR and disregard all your results. Ct=10 is not
: that bad, a lot of highly expressed protein are around there.
l*s
12 楼
是的，不要低于15。
【在 n****0 的大作中提到】
: 一般不都是推荐ct在15-35么？
【在 n****0 的大作中提到】
: 一般不都是推荐ct在15-35么？
s*y
13 楼
Ct 10 太高了，internal control 应该和你的目的基因在差不多的档次，否则
的话光是实验误差就把你的数据都掩盖住了（因为是对数关系）。而且一般来说Ct 12~
25 是比较可信的，超出这个范围之外的我们都不用的。
【在 m***o 的大作中提到】
: 用actin, GAPDH, TATA Binding protein(TBP), and 18s rRNA. Actin and tbp 显示
: 类似的降低，但是18s没变化。该选用那个来normalization呢？很多文章用18s，大家
: 用的时候是不是你的target gene 用1ulRT产物，而用18s的时候要稀释至少100倍呢，
: 不然Ct就在10，会不会因为量太高而显示不出该有的差异呢？作的是WT和knockout 老
: 鼠的liver，大家有没有什么好的建议？谢谢！
: 感觉选不好normalization， 做实验就好像有个定时炸弹在旁边一样不舒服。谢谢任何
: 建议！
的话光是实验误差就把你的数据都掩盖住了（因为是对数关系）。而且一般来说Ct 12~
25 是比较可信的，超出这个范围之外的我们都不用的。
【在 m***o 的大作中提到】
: 用actin, GAPDH, TATA Binding protein(TBP), and 18s rRNA. Actin and tbp 显示
: 类似的降低，但是18s没变化。该选用那个来normalization呢？很多文章用18s，大家
: 用的时候是不是你的target gene 用1ulRT产物，而用18s的时候要稀释至少100倍呢，
: 不然Ct就在10，会不会因为量太高而显示不出该有的差异呢？作的是WT和knockout 老
: 鼠的liver，大家有没有什么好的建议？谢谢！
: 感觉选不好normalization， 做实验就好像有个定时炸弹在旁边一样不舒服。谢谢任何
: 建议！
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