western阴性对照也有很强的带，怎么办？# Biology - 生物学
a*h
1 楼
估计厨神们都有很多锅吧？大家都怎么organize？
感觉放closet里部方便啊。有时候做一炖饭就要用好几个锅。
看了一下cookware shelf好贵啊。
谁来指点一下。多谢。
感觉放closet里部方便啊。有时候做一炖饭就要用好几个锅。
看了一下cookware shelf好贵啊。
谁来指点一下。多谢。
m*s
2 楼
全是X Phone的错
b*8
3 楼
最近用烟草叶片做western，用的载体上只有一个flag，用的sigma的单抗ANTI-FLAG M2
-Peroxidase (HRP) antibody produced in mouse 来检测（由于这是一抗，已经联了
HRP了，所以就不用二抗了），结果阴性对照也有很强的目标带。请问是什么问题？请
有经验的战友帮忙了！谢谢了！！
-Peroxidase (HRP) antibody produced in mouse 来检测（由于这是一抗，已经联了
HRP了，所以就不用二抗了），结果阴性对照也有很强的目标带。请问是什么问题？请
有经验的战友帮忙了！谢谢了！！
s*n
4 楼
我们家买的这个
http://www.amazon.com/Enclume-MPB-06-RACK-Bookshelf-Rack/dp/B00
超级，超级，超级推荐
然后还买了一个这个放盖子
http://www.amazon.com/Lynk-Professional-430021-Organizer--9-Inc
看评价非常高，收到了，质量看起来非常好
不过还没有装。。。所以暂时不发表意见。。。
【在 a****h 的大作中提到】
: 估计厨神们都有很多锅吧？大家都怎么organize？
: 感觉放closet里部方便啊。有时候做一炖饭就要用好几个锅。
: 看了一下cookware shelf好贵啊。
: 谁来指点一下。多谢。
http://www.amazon.com/Enclume-MPB-06-RACK-Bookshelf-Rack/dp/B00
超级，超级，超级推荐
然后还买了一个这个放盖子
http://www.amazon.com/Lynk-Professional-430021-Organizer--9-Inc
看评价非常高，收到了，质量看起来非常好
不过还没有装。。。所以暂时不发表意见。。。
【在 a****h 的大作中提到】
: 估计厨神们都有很多锅吧？大家都怎么organize？
: 感觉放closet里部方便啊。有时候做一炖饭就要用好几个锅。
: 看了一下cookware shelf好贵啊。
: 谁来指点一下。多谢。
s*s
5 楼
基本上是骂狗的
【在 m********s 的大作中提到】
: 全是X Phone的错
【在 m********s 的大作中提到】
: 全是X Phone的错
c*b
6 楼
烟草的话不用任何抗体，大概32 Kda的位置总是有一个带，不过要曝一分钟（用Pierce
的Pico）才看得到。如果是核蛋白，你提核这个带就会不见。
FLAG的话烟草在110Kda左右总是有杂带。如果你的蛋白正好是在这两个区间，没办法，
换tag吧。
你可以看看下面这篇文献：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Gateway-compatible%20v
M2
【在 b*********8 的大作中提到】
: 最近用烟草叶片做western，用的载体上只有一个flag，用的sigma的单抗ANTI-FLAG M2
: -Peroxidase (HRP) antibody produced in mouse 来检测（由于这是一抗，已经联了
: HRP了，所以就不用二抗了），结果阴性对照也有很强的目标带。请问是什么问题？请
: 有经验的战友帮忙了！谢谢了！！
的Pico）才看得到。如果是核蛋白，你提核这个带就会不见。
FLAG的话烟草在110Kda左右总是有杂带。如果你的蛋白正好是在这两个区间，没办法，
换tag吧。
你可以看看下面这篇文献：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Gateway-compatible%20v
M2
【在 b*********8 的大作中提到】
: 最近用烟草叶片做western，用的载体上只有一个flag，用的sigma的单抗ANTI-FLAG M2
: -Peroxidase (HRP) antibody produced in mouse 来检测（由于这是一抗，已经联了
: HRP了，所以就不用二抗了），结果阴性对照也有很强的目标带。请问是什么问题？请
: 有经验的战友帮忙了！谢谢了！！
t*x
7 楼
我在橱柜里面放架子。
平底锅有那种一层一层的架子，锅可以立起来放，像书一样。
“立体”的锅用U型架来间隔橱柜，其实是倒U型，这样底下一个锅，架子上面还有一个
锅。
碗柜也可以用这种U型架来分割，充分利用碗柜空间。
都在沃尔玛买的，价格也不贵，低于十块
【在 a****h 的大作中提到】
: 估计厨神们都有很多锅吧？大家都怎么organize？
: 感觉放closet里部方便啊。有时候做一炖饭就要用好几个锅。
: 看了一下cookware shelf好贵啊。
: 谁来指点一下。多谢。
平底锅有那种一层一层的架子，锅可以立起来放，像书一样。
“立体”的锅用U型架来间隔橱柜，其实是倒U型，这样底下一个锅，架子上面还有一个
锅。
碗柜也可以用这种U型架来分割，充分利用碗柜空间。
都在沃尔玛买的，价格也不贵，低于十块
【在 a****h 的大作中提到】
: 估计厨神们都有很多锅吧？大家都怎么organize？
: 感觉放closet里部方便啊。有时候做一炖饭就要用好几个锅。
: 看了一下cookware shelf好贵啊。
: 谁来指点一下。多谢。
b*8
8 楼
非常感谢！我做的确实在阴性对照中有两条很强的带，一条大约110K， 另一条约50K.
我的目标蛋白大约120-130K，所以很难分开。 我用的是pGWB系列的载体，那篇文章用
的是平pEG系列载体，这可能是大小不太一样的原因吧。我的载体上只有一个Flag，所
以很难看出目标带比阴性对照更强。
如果不换载体，用bead 纯化会不会有效果那？因为我已经构建了很多载体了！非常感
谢！
Pierce
【在 c********b 的大作中提到】
: 烟草的话不用任何抗体，大概32 Kda的位置总是有一个带，不过要曝一分钟（用Pierce
: 的Pico）才看得到。如果是核蛋白，你提核这个带就会不见。
: FLAG的话烟草在110Kda左右总是有杂带。如果你的蛋白正好是在这两个区间，没办法，
: 换tag吧。
: 你可以看看下面这篇文献：
: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Gateway-compatible%20v
:
: M2
我的目标蛋白大约120-130K，所以很难分开。 我用的是pGWB系列的载体，那篇文章用
的是平pEG系列载体，这可能是大小不太一样的原因吧。我的载体上只有一个Flag，所
以很难看出目标带比阴性对照更强。
如果不换载体，用bead 纯化会不会有效果那？因为我已经构建了很多载体了！非常感
谢！
Pierce
【在 c********b 的大作中提到】
: 烟草的话不用任何抗体，大概32 Kda的位置总是有一个带，不过要曝一分钟（用Pierce
: 的Pico）才看得到。如果是核蛋白，你提核这个带就会不见。
: FLAG的话烟草在110Kda左右总是有杂带。如果你的蛋白正好是在这两个区间，没办法，
: 换tag吧。
: 你可以看看下面这篇文献：
: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Gateway-compatible%20v
:
: M2
a*h
9 楼
放锅得是不错。但是我得锅都是很大得那种。
比如大蒸锅。2个高压锅。1个慢炖锅。
挂不起来。5555555
放盖子那个不错。我回头买个。
【在 s**n 的大作中提到】
: 我们家买的这个
: http://www.amazon.com/Enclume-MPB-06-RACK-Bookshelf-Rack/dp/B00
: 超级，超级，超级推荐
: 然后还买了一个这个放盖子
: http://www.amazon.com/Lynk-Professional-430021-Organizer--9-Inc
: 看评价非常高，收到了，质量看起来非常好
: 不过还没有装。。。所以暂时不发表意见。。。
比如大蒸锅。2个高压锅。1个慢炖锅。
挂不起来。5555555
放盖子那个不错。我回头买个。
【在 s**n 的大作中提到】
: 我们家买的这个
: http://www.amazon.com/Enclume-MPB-06-RACK-Bookshelf-Rack/dp/B00
: 超级，超级，超级推荐
: 然后还买了一个这个放盖子
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: 看评价非常高，收到了，质量看起来非常好
: 不过还没有装。。。所以暂时不发表意见。。。
c*b
10 楼
我个人不觉得1x的flag是个问题，我自己在c端用pcr加了一个flag，连linker都没有,
检测也没有问题.
最关键的是表达量。加p19，多放点Acetosyringone. 用6%的胶或者gradient的胶，我
试过类似情况，还是能分开的，虽然杂带去不掉。
最好还是换gfp的载体，wb前还能先看到荧光，方便多了。你反正是用gateway系统，换
来换去的麻烦比wb trouble shooting要小多了。
.
【在 b*********8 的大作中提到】
: 非常感谢！我做的确实在阴性对照中有两条很强的带，一条大约110K， 另一条约50K.
: 我的目标蛋白大约120-130K，所以很难分开。 我用的是pGWB系列的载体，那篇文章用
: 的是平pEG系列载体，这可能是大小不太一样的原因吧。我的载体上只有一个Flag，所
: 以很难看出目标带比阴性对照更强。
: 如果不换载体，用bead 纯化会不会有效果那？因为我已经构建了很多载体了！非常感
: 谢！
:
: Pierce
检测也没有问题.
最关键的是表达量。加p19，多放点Acetosyringone. 用6%的胶或者gradient的胶，我
试过类似情况，还是能分开的，虽然杂带去不掉。
最好还是换gfp的载体，wb前还能先看到荧光，方便多了。你反正是用gateway系统，换
来换去的麻烦比wb trouble shooting要小多了。
.
【在 b*********8 的大作中提到】
: 非常感谢！我做的确实在阴性对照中有两条很强的带，一条大约110K， 另一条约50K.
: 我的目标蛋白大约120-130K，所以很难分开。 我用的是pGWB系列的载体，那篇文章用
: 的是平pEG系列载体，这可能是大小不太一样的原因吧。我的载体上只有一个Flag，所
: 以很难看出目标带比阴性对照更强。
: 如果不换载体，用bead 纯化会不会有效果那？因为我已经构建了很多载体了！非常感
: 谢！
:
: Pierce
s*n
11 楼
有把手就可以挂啊
大锅的话还可以买那种大点的架子
如果厨房大，可以买从天花板挂下来的那种呢
【在 a****h 的大作中提到】
: 放锅得是不错。但是我得锅都是很大得那种。
: 比如大蒸锅。2个高压锅。1个慢炖锅。
: 挂不起来。5555555
: 放盖子那个不错。我回头买个。
大锅的话还可以买那种大点的架子
如果厨房大，可以买从天花板挂下来的那种呢
【在 a****h 的大作中提到】
: 放锅得是不错。但是我得锅都是很大得那种。
: 比如大蒸锅。2个高压锅。1个慢炖锅。
: 挂不起来。5555555
: 放盖子那个不错。我回头买个。
b*8
12 楼
非常感谢！我再试试吧，不行就换了。我的蛋白连GFP没有功能，连HA还有功能，anti-
HA 效果怎么样？大家都用那个公司的抗体？直接买带HRP的一抗效果好那还是用一抗，
二抗？
HA 效果怎么样？大家都用那个公司的抗体？直接买带HRP的一抗效果好那还是用一抗，
二抗？
a*h
13 楼
小煎锅挂上去挺好看。
那大蒸锅挂上去感觉挺吓人。
哈哈。
多谢妹妹。
【在 s**n 的大作中提到】
: 有把手就可以挂啊
: 大锅的话还可以买那种大点的架子
: 如果厨房大，可以买从天花板挂下来的那种呢
那大蒸锅挂上去感觉挺吓人。
哈哈。
多谢妹妹。
【在 s**n 的大作中提到】
: 有把手就可以挂啊
: 大锅的话还可以买那种大点的架子
: 如果厨房大，可以买从天花板挂下来的那种呢
s*l
14 楼
anti-HA monoclonal antibody (12CA5; Roche)很好用
anti-
【在 b*********8 的大作中提到】
: 非常感谢！我再试试吧，不行就换了。我的蛋白连GFP没有功能，连HA还有功能，anti-
: HA 效果怎么样？大家都用那个公司的抗体？直接买带HRP的一抗效果好那还是用一抗，
: 二抗？
anti-
【在 b*********8 的大作中提到】
: 非常感谢！我再试试吧，不行就换了。我的蛋白连GFP没有功能，连HA还有功能，anti-
: HA 效果怎么样？大家都用那个公司的抗体？直接买带HRP的一抗效果好那还是用一抗，
: 二抗？
a*h
15 楼
多谢。能给个链接么？
【在 t*****x 的大作中提到】
: 我在橱柜里面放架子。
: 平底锅有那种一层一层的架子，锅可以立起来放，像书一样。
: “立体”的锅用U型架来间隔橱柜，其实是倒U型，这样底下一个锅，架子上面还有一个
: 锅。
: 碗柜也可以用这种U型架来分割，充分利用碗柜空间。
: 都在沃尔玛买的，价格也不贵，低于十块
【在 t*****x 的大作中提到】
: 我在橱柜里面放架子。
: 平底锅有那种一层一层的架子，锅可以立起来放，像书一样。
: “立体”的锅用U型架来间隔橱柜，其实是倒U型，这样底下一个锅，架子上面还有一个
: 锅。
: 碗柜也可以用这种U型架来分割，充分利用碗柜空间。
: 都在沃尔玛买的，价格也不贵，低于十块
b*8
16 楼
anti-HA monoclonal antibody (12CA5; Roche)是一抗吧，二抗用什么好那？
文献中很多都用Roche的3F10,这个怎么样， Anti-HA-Peroxidase, High Affinity
from rat IgG1？ 是不是就这个一抗就有HRP了，不用二抗检测了？谢谢！
文献中很多都用Roche的3F10,这个怎么样， Anti-HA-Peroxidase, High Affinity
from rat IgG1？ 是不是就这个一抗就有HRP了，不用二抗检测了？谢谢！
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