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求助：到底该用什么样的detergent

求助：到底该用什么样的detergent# Biology - 生物学

w*b2012-08-03 07:08

1 楼

今年的冬天来得比较早，但却不似去年的那样冷，我于是有了向北远行的想法，去看看
曾经路过的山峦，湖塘和那里很好的芦花。
You travel a long way travel where the tall trees grow
Is here where the lone ring bell starts the grace bridal
In the clear cool air up here so high
For your case just in finding a tale
And my dreams could reach the top of the sky
If I was with my lover in the kingdom of summer gale
https://app.box.com/s/3mpexxl910a9zvvsaba1
你长途跋涉来到这里，这有高高的长木森林
正是在这里，孤独的钟声开始优美的婚礼
在清澈凉爽的空气中，在这高高的山地里
而你是在寻找一个传奇
而我的梦想是要达到那苍穹的顶极
如果我和我的情人是相遇在夏季的风里

i*y2012-08-03 07:08

2 楼

JMs, 有没有共鸣?
[转发]遇见白子画，遇见最初的自己
被白子画圈粉的人群中，赫然有很多30+的成熟内涵粉，已为人妇，已为人母，在
现实的撕扯中，冷了旖梦，淡了繁华。眉梢眼角早不复最初的娇柔与羞涩，虽未必人人
在职场杀伐决断，到底也学会了事故圆滑。眼波流转处，是通透世事的了然，是经历起
落的淡然，是困于柴米油盐又无处脱身的无奈，是甘心相夫教子的从容，而怦然心动时
的悸动和恍惚是不会再出现的了。
就是这样一群荤素段子都能信手拈来，对脑残玛丽苏剧一分钟都不能忍的熟女，却
每周守在电视前，只为看一眼那个叫白子画的人，从此我心我眼，所思所想都只能是那
一袭白衣翩然，清冷如水，眼落星辰的出尘男子。看他眉头微蹙，心中最柔弱的部分似
被轻轻瘙痒，瞬间酥麻全身，而所有曾经年少时的砰然心动，都仿佛时光倒流般被唤醒。
突然就会心疼，为那些曾经擦肩而过的人，为那时美好的自己，为年少懵懂时的执
念和不顾一切。是的，白子画是修不来的，因为他是童话中的童话，在我们几乎快忘记
自己还会爱，还会心动，还会沉迷的时候，他的出现，就是救赎。是我们被现实生活压
抑的几乎失去色彩的人生中，突然闪现的微光。
感谢霍霍塑造了这么精彩的角色，让我们坚硬的心变的柔弱，让我们又找到了可以
放任自己沉沦的具象，让我们又重新意识到，自己还是那个会哭会笑会爱的小女人。

s*y2012-08-03 07:08

3 楼

h*32012-08-03 07:08

4 楼

我的身高在女孩子里不算低，但每次碰到学院里的1米98男神都深恨自己没能多长十
公分二十公分。只有远远地看着男神在人群中如塔一般的身影黯然神伤，但只要能见到
男神，就跟过节一样开心。
每次男神作报告的时候，我都会早早的去教室占上一个离他最近的位置，然后趁着
听报告的机会狠狠地花痴一把。有几次做小组课题，我们分在了一起，我都有灵感迸发
的体验，感觉平时笨笨的我所积攒的才智都深深埋在某个地方，每当和男神在一块儿的
时候，就会得到开掘。
有一天活动课后，和男神一起去食堂，在路过小湖边时，他叫住我，跟我表白了，我已
经记不清他说了什么话，满脑子都被突如其来的幸福感充满了。我傻乎乎地仰着脑袋问
他，“你不嫌我矮么？”男神反问我，“你不嫌我高么？”我说，“不嫌”。男神说，
“我们是最萌身高差”。一阵幸福的眩晕中，他拉住了我的手。
爱情中的人其实不会太在意身高这样的外部条件，缘分到了，丘比特的箭自然会射中我
们。

m*u2012-08-03 07:08

5 楼

我最近用酵母表达一种膜蛋白，表达的量还可以，detergent 我尝试过用DDM或者DM，
大概每5g-7g yeast用50mM的DDM 50ml,但每次solubilization 4度过夜，第二天离心的
时候仍然可见很多似乎未完全溶解的膜，查了一些资料，没有看到有人提到到底应该用
多少detergent，甚至有时候再加倍也能看到不少膜沉淀。不知道哪位大虾这方面的经
验吗？一般什么样的detergent最有效，能做到完全溶解膜从而减少蛋白的损失呢？非
常感谢！呵呵

z*n2012-08-03 07:08

6 楼

五弟，很不错的意境，这是原创吗？

g*r2012-08-03 07:08

7 楼

我觉得就像通常说的，人人都有一个武侠梦，其实人人也都有一个修仙梦。修仙梦是对
美好事物的向往，应该不分男女，也不分老少

g*n2012-08-03 07:08

8 楼

这孩子看着就不聪明

k*02012-08-03 07:08

9 楼

50 mM DDM 的浓度大约2。5％左右，已经很高了。我一般不超过1。5％。
不管你用多少detergent，都会有沉淀，不一定就是未溶解的膜。比如DNA了，不容的蛋
白质了等等。只有你回收到你想要的蛋白质就好了。

【在 m**u 的大作中提到】

: 我最近用酵母表达一种膜蛋白，表达的量还可以，detergent 我尝试过用DDM或者DM，
: 大概每5g-7g yeast用50mM的DDM 50ml,但每次solubilization 4度过夜，第二天离心的
: 时候仍然可见很多似乎未完全溶解的膜，查了一些资料，没有看到有人提到到底应该用
: 多少detergent，甚至有时候再加倍也能看到不少膜沉淀。不知道哪位大虾这方面的经
: 验吗？一般什么样的detergent最有效，能做到完全溶解膜从而减少蛋白的损失呢？非
: 常感谢！呵呵

w*b2012-08-03 07:08

10 楼

s*l2012-08-03 07:08

11 楼

非常同意

【在 g**********r 的大作中提到】

: 我觉得就像通常说的，人人都有一个武侠梦，其实人人也都有一个修仙梦。修仙梦是对
: 美好事物的向往，应该不分男女，也不分老少

H*72012-08-03 07:08

12 楼

小孩是不是有点傻啊，说话却很老成，什么求求你了也能说得出来

m*u2012-08-03 07:08

13 楼

主要是担心损失太多蛋白了
那如何确定比如说10g cell到底需要多少某种detergent
这是个需要计算的过程还是仅仅经验摸索？

【在 k******0 的大作中提到】

: 50 mM DDM 的浓度大约2。5％左右，已经很高了。我一般不超过1。5％。
: 不管你用多少detergent，都会有沉淀，不一定就是未溶解的膜。比如DNA了，不容的蛋
: 白质了等等。只有你回收到你想要的蛋白质就好了。

z*n2012-08-03 07:08

14 楼

五弟，很不错的意境，这是原创吗？

A*y2012-08-03 07:08

15 楼

也转篇天涯上的：作者：阿暖的楼阁
似乎这楼里面的30+大妈是HC主力，不过作为近30+的已婚已育妇女决定也来冒个泡。前
面的一溜排感慨的这颗被工作压力和日常琐事已经压抑的几乎暗沉浮躁的少女心渐渐地
又活过来了
是的，又活过来了，它不曾消失，只是我们每天周旋在单纯的两点一线里开始麻木了
有的时候抬头看看天都是灰蒙蒙的，习惯于周而复始地麻木地这么走下去
这剧是我的复苏的少女心“砰”的一声开始剧烈跳跃了
年少时候被父母师长教导，言情小说什么的甚少沾染，不好好读书就是对不起父母
师长
而现在反倒是更加恣意地去补习年少时迟来的萌动
然后我喜欢上了《珍爱》里三胖牵着自家媳妇踏着节拍旋转的舞步，那样深情不渝
爱恋交织的眼神，银色的高跟踏着细碎的舞步，一圈圈踏在看客的心坎上，甜蜜如初
再然后我喜欢上了尊上，是尊上，而不是白子画
这样默念一句，似乎尊上比白子画这个名字更符合电视剧里的角色
众生喜欢看他情难自抑一步步走下神坛
我偏爱看他一身孑然独立于世界之巅俯瞰众生超然于外
他是那样一个存在，独立于三界之外，如长留山上万年不变的雪松，青翠如初，刚
劲似遒，万人瞻仰
大抵女孩子的心中都曾经有过一个梦想，渴望一生被人收藏好，妥善安放，细心保
存。免我惊，免我苦，免我四下流离，免我无枝可依。
但那人，我知，我一直知，他永不会来。
似乎白子画就是我们年少梦想中那个强大到让我们可以无所忌惮恣意洒脱的男子，
偏生又是那样眉目如画，恍如谪仙，秋水如墨，掀翻一池春水而不自知
我们知他从不会来，而只能在繁杂的时间忙碌，偶然间看见这样一个童话，就像是
我们憧憬的那个童话般，就不自觉地入梦了
当初年少，杏花树下，少年清眸浅笑，眉目如画，指间递一壶清茶，拂去衣间奔波
的尘埃，暖一场早已成痂的冰封，寻一处尘世间忙碌的归宿
就想一身明亮地唤他一声，嘿，少年
或者是那一句浅浅的，啊，尊上~~~
就像是年少时候的我们
如果遇见从前的我，请带我向他问好，告诉他一切安好，不必担忧

s*n2012-08-03 07:08

16 楼

决定拿我闺女实验一下

【在 s****y 的大作中提到】

k*02012-08-03 07:08

17 楼

我的实验是测定出来的。因为我不想用太高浓度的DDM，担心复合体的稳定性。如果有
更多的样品，我只好加大体积并保持一定的DDM浓度。

【在 m**u 的大作中提到】

: 主要是担心损失太多蛋白了
: 那如何确定比如说10g cell到底需要多少某种detergent
: 这是个需要计算的过程还是仅仅经验摸索？

w*b2012-08-03 07:08

18 楼

三哥，谢谢，人生尽是一场虚化的梦，终结 all are dust in the wind.
I close my eyes
Only for a moment and the moment's gone
All my dreams
Pass before my eyes a curiosity
Dust in the wind
All they are is dust in the wind
Same old song
Just a drop of water in an endless sea
All we do
Crumbles to the ground though we refuse to see
Dust in the wind
All we are is dust in the wind

【在 z******n 的大作中提到】

: 五弟，很不错的意境，这是原创吗？

g*r2012-08-03 07:08

19 楼

小孩子喜欢这戏的应该会更多，我小时候最喜欢看这类题材。以往的仙侠戏之所以没有
扫倒大妈群，是因为大多仙侠剧以搞笑为主，比较少仙气。这部戏拍出了大家心目中向
往的神仙气息，再加上男女主角都非常仙美，基本向往美好的都会喜欢看。

g*n2012-08-03 07:08

20 楼

学的是这个

【在 s*******n 的大作中提到】

: 决定拿我闺女实验一下

m*u2012-08-03 07:08

21 楼

ok, thank you so much!

【在 k******0 的大作中提到】

: 我的实验是测定出来的。因为我不想用太高浓度的DDM，担心复合体的稳定性。如果有
: 更多的样品，我只好加大体积并保持一定的DDM浓度。

b*12012-08-03 07:08

22 楼

看书的时候就喜欢白子画，感觉白子画是书里最正常的人，只可惜没有坚持到最后。
看剧的时候感觉就是把书里白子画的感情外化，其实没有改变很多。虽然我不太喜欢饶
俊，不过他在采访里说的那句挺对：“书里的白子画几乎没有什么语言。你很难想象一
个男主角站在那里没有台词。”所以电视剧更直观地把这个人物的性格，通过他的动作
、眼神、内心旁白等表达出来，而不是像读书时那样“揣摩”，是很好的改编。
下面谈书，不说剧————
花千骨，读书的时候认为是一种成长型性格，偏执而冒失。不过，其实谁中二少女时没
有闯过什么祸呢？还是可以理解的。
说到择偶，年纪越大，就越理解白子画这样的男性的可贵。他对天下，对别人负责，他
对你也不会多差。人常说，看一个人要看他的朋友，看他对别人的态度。不管是财富和
社会地位高于他的，还是低于他的，看他是如何对待的。白子画在花千骨出现之前，仙
界一直太平，正如他师父所说“有子画在，可保仙界百年平安”。在花千骨出现之后，
越发有人情味，但是又不失公正。即使是在花千骨对霓漫天动了杀念，也没有当众训斥
她，而是私下里责备，保全了花千骨的面子。
杀阡陌的初恋是硫夏，这个阴影永远都除不去，总有替身的感觉。而东方彧卿，心思太
深，难以琢磨。
当作为旁观者时，不少人都对正派充满苛责，做一百件事是对的，一件错的就抓住不放
；羡慕反派肆意轻狂。可是代入自己作为芸芸众生时，接受自己只是一个凡人的时候，
就不愿与反派为伍，怕危险。
所以仙侠只是梦而已。在梦里可以高谈阔论，苛责正派、追求反派，到了现实里，还不
是夹着尾巴做人，如履薄冰？

A*y2012-08-03 07:08

23 楼

同赞改编。
成熟了之后才知道找男人最重要是人品，其他都是浮云。少女时会迷那种对别人都不好
唯独对你好的坏男孩，但这种人其实很危险，一旦两人关系不好了一般都会对你残忍报
复。

【在 b********1 的大作中提到】

: 看书的时候就喜欢白子画，感觉白子画是书里最正常的人，只可惜没有坚持到最后。
: 看剧的时候感觉就是把书里白子画的感情外化，其实没有改变很多。虽然我不太喜欢饶
: 俊，不过他在采访里说的那句挺对：“书里的白子画几乎没有什么语言。你很难想象一
: 个男主角站在那里没有台词。”所以电视剧更直观地把这个人物的性格，通过他的动作
: 、眼神、内心旁白等表达出来，而不是像读书时那样“揣摩”，是很好的改编。
: 下面谈书，不说剧————
: 花千骨，读书的时候认为是一种成长型性格，偏执而冒失。不过，其实谁中二少女时没
: 有闯过什么祸呢？还是可以理解的。
: 说到择偶，年纪越大，就越理解白子画这样的男性的可贵。他对天下，对别人负责，他
: 对你也不会多差。人常说，看一个人要看他的朋友，看他对别人的态度。不管是财富和

a*a2012-08-03 07:08

24 楼

所以我不喜欢东方，毕竟他初衷不好，到最后也是他一步一步的推波助澜

【在 A*******y 的大作中提到】

: 同赞改编。
: 成熟了之后才知道找男人最重要是人品，其他都是浮云。少女时会迷那种对别人都不好
: 唯独对你好的坏男孩，但这种人其实很危险，一旦两人关系不好了一般都会对你残忍报
: 复。

A*u2012-08-03 07:08

25 楼

扯这么些，还不是看脸，换成黄渤演还有人花痴么。

【在 i*********y 的大作中提到】

: JMs, 有没有共鸣?
: [转发]遇见白子画，遇见最初的自己
: 被白子画圈粉的人群中，赫然有很多30+的成熟内涵粉，已为人妇，已为人母，在
: 现实的撕扯中，冷了旖梦，淡了繁华。眉梢眼角早不复最初的娇柔与羞涩，虽未必人人
: 在职场杀伐决断，到底也学会了事故圆滑。眼波流转处，是通透世事的了然，是经历起
: 落的淡然，是困于柴米油盐又无处脱身的无奈，是甘心相夫教子的从容，而怦然心动时
: 的悸动和恍惚是不会再出现的了。
: 就是这样一群荤素段子都能信手拈来，对脑残玛丽苏剧一分钟都不能忍的熟女，却
: 每周守在电视前，只为看一眼那个叫白子画的人，从此我心我眼，所思所想都只能是那
: 一袭白衣翩然，清冷如水，眼落星辰的出尘男子。看他眉头微蹙，心中最柔弱的部分似

x*u2012-08-03 07:08

26 楼

没错，不用黄渤，想想如果是世尊摩严的形象，估计早被骂ws大叔了

【在 A**u 的大作中提到】

: 扯这么些，还不是看脸，换成黄渤演还有人花痴么。

a*a2012-08-03 07:08

27 楼

可不，若是魔严，早就弃了。

【在 x****u 的大作中提到】

: 没错，不用黄渤，想想如果是世尊摩严的形象，估计早被骂ws大叔了

A*y2012-08-03 07:08

28 楼

哈哈，所以说幼稚的剧情也好，五毛的特效也好，乱剪的镜头也好，都抵不过师父的帅。

【在 a*****a 的大作中提到】

: 可不，若是魔严，早就弃了。

b*12012-08-03 07:08

29 楼

刷个话题 #心疼摩严# ^_^

【在 a*****a 的大作中提到】

: 可不，若是魔严，早就弃了。

a*a2012-08-03 07:08

30 楼

魔严对师弟是好的，是偏向师弟的，就是婆婆妈妈的，凡人，人家老白都中毒了，他还
在那里罗嗦罗嗦，整个一个唐僧，他就不能爱屋及乌吗？
喜欢师傅，帅是肯定的，但是之前我一直没觉得霍建华多么帅，至少比不是小哇，但是
这个剧中的师傅是我喜欢的类型，如楼上所说，应该是有责任感的。对于我这个年纪可
能更加愿意看到一个有担当的帅哥，东方或许也有这个特质，但是没有机会让他展现出
来。
师傅啊师傅，俺喜欢你跟小骨在一起。

【在 b********1 的大作中提到】

: 刷个话题 #心疼摩严# ^_^

A*y2012-08-03 07:08

31 楼

摩严对白子画也是真爱啊。知道他中毒后，二话没说就担起代掌门的职责来。
摩严其实挺有喜感的，看了下面这个访谈里摩严的部分后，看见他出现就老想笑。。。
http://v.youku.com/v_show/id_XMTI3Nzk3MjA5Mg==.html

【在 b********1 的大作中提到】

: 刷个话题 #心疼摩严# ^_^

M*u2012-08-03 07:08

32 楼

大妈同时遇见霍霍和小蛙，掀谁的牌子？

【在 i*********y 的大作中提到】

b*12012-08-03 07:08

33 楼

我也超级喜欢盐盐，看书的时候就喜欢他，感觉每本书里总有这么一个老古董
不过看了电视剧，感觉盐盐充分诠释了什么叫“吹胡子瞪眼”

【在 A*******y 的大作中提到】

: 摩严对白子画也是真爱啊。知道他中毒后，二话没说就担起代掌门的职责来。
: 摩严其实挺有喜感的，看了下面这个访谈里摩严的部分后，看见他出现就老想笑。。。
: http://v.youku.com/v_show/id_XMTI3Nzk3MjA5Mg==.html

o*y2012-08-03 07:08

34 楼

一个初一，一个十五，谁都不能落下

【在 M****u 的大作中提到】

: 大妈同时遇见霍霍和小蛙，掀谁的牌子？

g*r2012-08-03 07:08

35 楼

最好霍霍穿着上仙的戏服，呵呵

【在 o*******y 的大作中提到】

: 一个初一，一个十五，谁都不能落下

A*y2012-08-03 07:08

36 楼

最好还是绑在柱子上的任大妈调戏。。。

【在 g**********r 的大作中提到】

: 最好霍霍穿着上仙的戏服，呵呵

g*r2012-08-03 07:08

37 楼

网上已经有人P了剧照，有尊上被扒掉上衣的，有尊上躺草地上眼睛被发带盖上cosplay
小龙女和尹志平桥段的，吼吼

【在 A*******y 的大作中提到】

: 最好还是绑在柱子上的任大妈调戏。。。

A*y2012-08-03 07:08

38 楼

噗～大妈们好坏

cosplay

【在 g**********r 的大作中提到】

: 网上已经有人P了剧照，有尊上被扒掉上衣的，有尊上躺草地上眼睛被发带盖上cosplay
: 小龙女和尹志平桥段的，吼吼