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c*g
1
哎,我这跟前男友刚分手有一段时间了,但是说实话我现在还是忘不了他。时不时的还
是想知道有关他的事情,想知道他过的好不好,现在有没有女朋友了。总之就是只要是
他的事情我都想知道,不管是什么事情。我也不知道为什么会这样或许是因为我现在还
是没有放下吧。
所以我这时不时的还会给他发个消息之类的,有时候他会回我,有时候却不回我。不管
回不回我每次都是死死的盯着电脑的屏幕,因为我想第一时间看到他的回复,我记得我
有一次等了好长时间他才回的我,当时我真的感觉自己比中了彩票还激动,因为他终于
回我了。虽然你们体会不到这种感觉,但是对于我来说真的是很满足,很满足。
所以有时候我就在想如果有一天我要是知道他有女朋友了,我会是什么心情。我觉得我
肯定会哭死的,因为以后跟他过一辈子的不是我,而是别的女人想到这里我的心里就特
别的难受,感觉我的心被深深的刺痛了一下。可是我知道这些已经都是没有办法改变的
了,现在唯一的希望就是他过的好。
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j*3
2
实验室有floxed的老鼠,打算注射Adnovirus给Cre recombinase...从一家公司买了一
个Ad-Cre,是有CMV promoter的,已经感染了HEK293细胞,收了细胞后(还没提纯),
现在想先看看病毒带的Cre序列有没有表达。跑了PCR可以看到带,但是WESTERN BLOT(
把HEK细胞裂解在RIPA buffer)用抗体却找不到Cre蛋白.咋回事呢?从没和病毒打过交
道,如果问的太傻,请尽量拍砖。。多谢
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O*e
3
感染效率很重要。如果只有少部分细胞有Cre表达,WB未必能看到信号。

【在 j****3 的大作中提到】
: 实验室有floxed的老鼠,打算注射Adnovirus给Cre recombinase...从一家公司买了一
: 个Ad-Cre,是有CMV promoter的,已经感染了HEK293细胞,收了细胞后(还没提纯),
: 现在想先看看病毒带的Cre序列有没有表达。跑了PCR可以看到带,但是WESTERN BLOT(
: 把HEK细胞裂解在RIPA buffer)用抗体却找不到Cre蛋白.咋回事呢?从没和病毒打过交
: 道,如果问的太傻,请尽量拍砖。。多谢

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j*3
4
看到CPE(>50%)才收细胞的,跑WB的是两个150cm盘的细胞汇总(总共收了20盘细胞,觉
得也不能都用来跑WB),本以为量应该足够了:-(跑不出Cre蛋白总有点不放心的说。多
谢版主回复
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l*1
5
antibody good or bab already ?
concentration of AB enough or not?

【在 j****3 的大作中提到】
: 看到CPE(>50%)才收细胞的,跑WB的是两个150cm盘的细胞汇总(总共收了20盘细胞,觉
: 得也不能都用来跑WB),本以为量应该足够了:-(跑不出Cre蛋白总有点不放心的说。多
: 谢版主回复

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j*1
6
换Ad-Cre-GFP病毒。买的时候就应该想到检测的方法,极少量的Cre 就可以有功能了,
可能少到WB检测不到。
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v*e
7
搭车问一下,哪家公司的ad-cre比较好,我要用它静脉打老鼠!谢谢
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