请问：这样的蛋白样品还能够用作LC/MS/MS 分析吗？ - 未名空间MITBBS历史存档

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请问：这样的蛋白样品还能够用作LC/MS/MS 分析吗？

请问：这样的蛋白样品还能够用作LC/MS/MS 分析吗？# Biology - 生物学

m*32012-09-21 07:09

1 楼

今天收到provost office的早餐邀请，同时收到邀请的另外两个人都是provost office
的。心里怕怕的，不知道是怎么回事。要说是跟promotion有关吧，系里面还没有讨论
呢。但是别的我就想不出来了。不知道有没有类似的经历，谢谢。

W*n2012-09-21 07:09

2 楼

蛋白样品有俩问题：
1）　蛋白样品在裂解之后就上凝胶电泳分离了，然后储存在4C 在洗脱液（30%甲醇，
10% 醋酸，60%水）。由于仪器室的质谱机器坏了修了一个月，然后那个操作的老师休
假了一个月，我就去做别的，耽搁下来了，现在已经在那里放了7个月了。继续用这个
胶来做，会不会影响实验结果？（没有任何霉菌之类产生）。
２）当时跑电泳的胶是自己配的，结果配的时候上面的浓缩胶可能是用的丙烯酰胺的浓
度有些大，结果跑出来的胶在浓缩胶里面有一些分子量大的蛋白（只看见一条比较清晰
的条带，其他的基本看不见），但是每个样品的蛋白条带还是清晰的。请问，还能不
能用这个胶来做LC/MS/MS? 我一般把每个样品的一条胶切成10片，然后每片分别处理
来做质谱。
样品比较珍贵，处理也很麻烦；所以如果不影响实验结果，我想继续用它。但是作质谱
的花费也很大，如果样品不用保证出好的结果，我还是想选择去另外准备一份。
谢谢！

s*l2012-09-21 07:09

3 楼

我曾经被校长叫去过吃早餐，没啥，就是普通的早餐，问了我有什么问题等。早餐比酒
店自助的还差。

s*s2012-09-21 07:09

4 楼

我觉得还行。反正也就1k，样品制备很难的话，try一下花费也不算太多

【在 W*********n 的大作中提到】

: 蛋白样品有俩问题：
: 1）　蛋白样品在裂解之后就上凝胶电泳分离了，然后储存在4C 在洗脱液（30%甲醇，
: 10% 醋酸，60%水）。由于仪器室的质谱机器坏了修了一个月，然后那个操作的老师休
: 假了一个月，我就去做别的，耽搁下来了，现在已经在那里放了7个月了。继续用这个
: 胶来做，会不会影响实验结果？（没有任何霉菌之类产生）。
: ２）当时跑电泳的胶是自己配的，结果配的时候上面的浓缩胶可能是用的丙烯酰胺的浓
: 度有些大，结果跑出来的胶在浓缩胶里面有一些分子量大的蛋白（只看见一条比较清晰
: 的条带，其他的基本看不见），但是每个样品的蛋白条带还是清晰的。请问，还能不
: 能用这个胶来做LC/MS/MS? 我一般把每个样品的一条胶切成10片，然后每片分别处理
: 来做质谱。

m*32012-09-21 07:09

5 楼

那你有说什么问题吗

W*n2012-09-21 07:09

6 楼

谢谢回复！
有对照组和实验组，所以花费得2K. 其实样品不是难制备，就是处理起来比较繁琐。再
者，我前面作了两个生物重复了，这是第三次，然后分析，如果这次结果不好，就是鸡
肋，扔不扔的都很头痛。所以我就想知道这个蛋白样品，如果仅仅是上面的2个问题，
是不是对实验结果不产生影响。如果有影响，就重新制备，没有影响，就继续。

【在 s******s 的大作中提到】

: 我觉得还行。反正也就1k，样品制备很难的话，try一下花费也不算太多

w*52012-09-21 07:09

7 楼

没什么了不起的。领导会时不时给下面不同层次的人沟通的机会。不要太较真，举止得
体就行。别提让别人不高兴的意见。但对学校现在的状况也应该了解一些。

office

【在 m*****3 的大作中提到】

: 今天收到provost office的早餐邀请，同时收到邀请的另外两个人都是provost office
: 的。心里怕怕的，不知道是怎么回事。要说是跟promotion有关吧，系里面还没有讨论
: 呢。但是别的我就想不出来了。不知道有没有类似的经历，谢谢。

l*12012-09-21 07:09

8 楼

Re LZ
>当时跑电泳的胶是自己配的，
and
>我还是想选择去另外准备一份
Biorad 梯度胶在有的代理商那里批量进货有打折价的
如能用下预制的这个, 2D PAGE 后做array LC/MS-MS 才较保险
省了子弹费现在问炮弹费 2K USD 要不要省的话是本末倒置的做法
Ps:
just curious
>样品比较珍贵
>现在已经在那里放了7个月了。
LZ Are your kidding us?

c*g2012-09-21 07:09

9 楼

吃个饭，怕啥，他们又不能把你当早餐给吃了。
provost也是人，也得吃喝拉撒睡打炮。只要你别太欺负他就行了。

office

【在 m*****3 的大作中提到】

s*s2012-09-21 07:09

10 楼

一般这种胶不应该老泡着，应该cellulose膜晾干，夹在笔记本里。
想用的时候，用酒精wipe擦擦干净，剪刀剪开，每一小块泡在水里
10min，涨开以后把膜挑掉，送MS

【在 l**********1 的大作中提到】

: Re LZ
: >当时跑电泳的胶是自己配的，
: and
: >我还是想选择去另外准备一份
: Biorad 梯度胶在有的代理商那里批量进货有打折价的
: 如能用下预制的这个, 2D PAGE 后做array LC/MS-MS 才较保险
: 省了子弹费现在问炮弹费 2K USD 要不要省的话是本末倒置的做法
: Ps:
: just curious
: >样品比较珍贵

W*n2012-09-21 07:09

11 楼

样品就是制备麻烦些，所以感觉珍贵。当时作质谱的老师拖了 2个月，我忙别的去了
，都有些淡忘了。现在想想确实不好。

【在 l**********1 的大作中提到】

W*n2012-09-21 07:09

12 楼

能解释一下老泡着的坏处吗？一般泡多久拿去试验没有问题？还有，短期储存，泡在
洗脱液中好还是水中好？

【在 s******s 的大作中提到】

: 一般这种胶不应该老泡着，应该cellulose膜晾干，夹在笔记本里。
: 想用的时候，用酒精wipe擦擦干净，剪刀剪开，每一小块泡在水里
: 10min，涨开以后把膜挑掉，送MS

l*12012-09-21 07:09

13 楼

Mark.

【在 s******s 的大作中提到】