w*r
2 楼
玻璃和刀片的位置要调好，
调好了切出来就是平直的，不会卷。
下刀的速度也要干脆利索。
无它，只能自己慢慢摸索
调好了切出来就是平直的，不会卷。
下刀的速度也要干脆利索。
无它，只能自己慢慢摸索
w*n
3 楼
你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
w*n
4 楼
你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
w*l
5 楼
我用的是0度角，就是会翘起来
【在 w********r 的大作中提到】
: 玻璃和刀片的位置要调好，
: 调好了切出来就是平直的，不会卷。
: 下刀的速度也要干脆利索。
: 无它，只能自己慢慢摸索
【在 w********r 的大作中提到】
: 玻璃和刀片的位置要调好，
: 调好了切出来就是平直的，不会卷。
: 下刀的速度也要干脆利索。
: 无它，只能自己慢慢摸索
w*l
6 楼
就是载玻片粘的时候特别容易出摺，tissue和oct粘的速度不一致
还有就是tissue从oct里面脱出来，然后翘起来，特别容易出摺
【在 w*********n 的大作中提到】
: 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
: 然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
还有就是tissue从oct里面脱出来，然后翘起来，特别容易出摺
【在 w*********n 的大作中提到】
: 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
: 然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
D*a
7 楼
试试放液体里面，IHC or 染色完了再放玻璃里。这样IHC的效果还好。
具体液体不知
具体液体不知
w*l
8 楼
这种float染色，小的tissue都没问题，譬如spinal cord，brain不太好处理，太大了
容易破，上完substrate之后干的时候也容易出摺，染色倒是很深，而且sample太多，
float的工作量太大，时间也不好控制，还是粘在片子上容易，
我试过30um的下来放PBS里，然后在干片，倒是不出摺了，就是工作量太大，一次染色
一般做20多只老鼠，每个老鼠都取7－8个section，处理不过来
总之就是直接粘片子能不出摺是最好最快的
容易破，上完substrate之后干的时候也容易出摺，染色倒是很深，而且sample太多，
float的工作量太大，时间也不好控制，还是粘在片子上容易，
我试过30um的下来放PBS里，然后在干片，倒是不出摺了，就是工作量太大，一次染色
一般做20多只老鼠，每个老鼠都取7－8个section，处理不过来
总之就是直接粘片子能不出摺是最好最快的
h*y
9 楼
冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital section，从7-40 um都做过，
效果很好。既能做免疫染色，也能做in situ。
另外一个tip是不要直接用室温的玻璃片去贴切下来的片子。你可以把一个小刷子和玻璃
片预先放在切片机中，让它的温度平衡到和样本一样的温度，这样即使片子有皱褶，你
也可以用刷子把片子展平。
切好的片子保存在-80C，用的时候取出来，在室温下放30-60分钟先，完全干燥后再开始
做实验，片子贴的很牢，不会担心掉下来。
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital section，从7-40 um都做过，
效果很好。既能做免疫染色，也能做in situ。
另外一个tip是不要直接用室温的玻璃片去贴切下来的片子。你可以把一个小刷子和玻璃
片预先放在切片机中，让它的温度平衡到和样本一样的温度，这样即使片子有皱褶，你
也可以用刷子把片子展平。
切好的片子保存在-80C，用的时候取出来，在室温下放30-60分钟先，完全干燥后再开始
做实验，片子贴的很牢，不会担心掉下来。
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
s*r
10 楼
有没有用RNAse later之类的溶液灌注老鼠的，
这样的话RNA会不会保存的好一点，in situ
容易一点。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
这样的话RNA会不会保存的好一点，in situ
容易一点。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
w*l
11 楼
我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
我染色的结果也都很好，就是有褶
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
我染色的结果也都很好，就是有褶
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
h*y
12 楼
Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
w*l
13 楼
土了，你这么一说我好像记得那个瓶上也有个iso什么的
【在 h******y 的大作中提到】
: Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
【在 h******y 的大作中提到】
: Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
s*r
14 楼
这儿有个网址，希望能有参考，
http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
也有视频
www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
也有视频
www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
h*y
15 楼
忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
w*l
16 楼
下回试一下这个trick
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
w*l
17 楼
如果一张片子上要粘好几片tissue呢
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
w*l
18 楼
还有cryostat上有两个温度
一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
那个是你说的温度
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
那个是你说的温度
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
w*l
19 楼
我粘片子手法和这个视频里一样的，但还是会出褶
【在 s******r 的大作中提到】
: 这儿有个网址，希望能有参考，
: http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
: 也有视频
: www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
【在 s******r 的大作中提到】
: 这儿有个网址，希望能有参考，
: http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
: 也有视频
: www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
h*y
20 楼
贴好一个再放下一张。
【在 w****l 的大作中提到】
: 如果一张片子上要粘好几片tissue呢
【在 w****l 的大作中提到】
: 如果一张片子上要粘好几片tissue呢
h*y
21 楼
这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
【在 w****l 的大作中提到】
: 还有cryostat上有两个温度
: 一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
: 那个是你说的温度
【在 w****l 的大作中提到】
: 还有cryostat上有两个温度
: 一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
: 那个是你说的温度
w*l
22 楼
是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
w*l
23 楼
另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
h*y
24 楼
没错
【在 w****l 的大作中提到】
: 是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
【在 w****l 的大作中提到】
: 是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
h*y
25 楼
我没切过人的组织。
但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
重新结晶，对组织形态破坏很大。
【在 w****l 的大作中提到】
: 另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
: 为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
重新结晶，对组织形态破坏很大。
【在 w****l 的大作中提到】
: 另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
: 为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
w*l
26 楼
那像这种情况怎么弄，没有oct的花不太好切啊
【在 h******y 的大作中提到】
: 我没切过人的组织。
: 但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
: OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
: 重新结晶，对组织形态破坏很大。
【在 h******y 的大作中提到】
: 我没切过人的组织。
: 但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
: OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
: 重新结晶，对组织形态破坏很大。
h*y
27 楼
可以用一点OCT把你的样本站在那个Stage上。
【在 w****l 的大作中提到】
: 那像这种情况怎么弄，没有oct的花不太好切啊
【在 w****l 的大作中提到】
: 那像这种情况怎么弄，没有oct的花不太好切啊
D*a
28 楼
我们是泡了蔗糖还要泡加了gelatine的蔗糖，然后包埋是用gelatine和蔗糖包埋，再冻
。有了gelatine之后，－20就软了，－25才能切。不知道是不是更均一一些。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
。有了gelatine之后，－20就软了，－25才能切。不知道是不是更均一一些。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
l*1
29 楼
Mark.
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
w*l
30 楼
譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
厚度10um左右
厚度10um左右
w*r
31 楼
玻璃和刀片的位置要调好，
调好了切出来就是平直的，不会卷。
下刀的速度也要干脆利索。
无它，只能自己慢慢摸索
调好了切出来就是平直的，不会卷。
下刀的速度也要干脆利索。
无它，只能自己慢慢摸索
w*n
32 楼
你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
w*n
33 楼
你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
w*l
34 楼
我用的是0度角，就是会翘起来
【在 w********r 的大作中提到】
: 玻璃和刀片的位置要调好，
: 调好了切出来就是平直的，不会卷。
: 下刀的速度也要干脆利索。
: 无它，只能自己慢慢摸索
【在 w********r 的大作中提到】
: 玻璃和刀片的位置要调好，
: 调好了切出来就是平直的，不会卷。
: 下刀的速度也要干脆利索。
: 无它，只能自己慢慢摸索
w*l
35 楼
就是载玻片粘的时候特别容易出摺，tissue和oct粘的速度不一致
还有就是tissue从oct里面脱出来，然后翘起来，特别容易出摺
【在 w*********n 的大作中提到】
: 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
: 然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
还有就是tissue从oct里面脱出来，然后翘起来，特别容易出摺
【在 w*********n 的大作中提到】
: 你右手摇的速度要和你左手拿镊子拉切出来的组织片的速度要一致
: 然后用热的玻璃片去粘组织片，不会卷的，
D*a
36 楼
试试放液体里面，IHC or 染色完了再放玻璃里。这样IHC的效果还好。
具体液体不知
具体液体不知
w*l
37 楼
这种float染色，小的tissue都没问题，譬如spinal cord，brain不太好处理，太大了
容易破，上完substrate之后干的时候也容易出摺，染色倒是很深，而且sample太多，
float的工作量太大，时间也不好控制，还是粘在片子上容易，
我试过30um的下来放PBS里，然后在干片，倒是不出摺了，就是工作量太大，一次染色
一般做20多只老鼠，每个老鼠都取7－8个section，处理不过来
总之就是直接粘片子能不出摺是最好最快的
容易破，上完substrate之后干的时候也容易出摺，染色倒是很深，而且sample太多，
float的工作量太大，时间也不好控制，还是粘在片子上容易，
我试过30um的下来放PBS里，然后在干片，倒是不出摺了，就是工作量太大，一次染色
一般做20多只老鼠，每个老鼠都取7－8个section，处理不过来
总之就是直接粘片子能不出摺是最好最快的
h*y
38 楼
冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital section，从7-40 um都做过，
效果很好。既能做免疫染色，也能做in situ。
另外一个tip是不要直接用室温的玻璃片去贴切下来的片子。你可以把一个小刷子和玻璃
片预先放在切片机中，让它的温度平衡到和样本一样的温度，这样即使片子有皱褶，你
也可以用刷子把片子展平。
切好的片子保存在-80C，用的时候取出来，在室温下放30-60分钟先，完全干燥后再开始
做实验，片子贴的很牢，不会担心掉下来。
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
entane的温度要控制好，用小块干冰测试一下（要求没有气泡出来）。
这种方法冻的组织，做全脑的cross section，saggital section，从7-40 um都做过，
效果很好。既能做免疫染色，也能做in situ。
另外一个tip是不要直接用室温的玻璃片去贴切下来的片子。你可以把一个小刷子和玻璃
片预先放在切片机中，让它的温度平衡到和样本一样的温度，这样即使片子有皱褶，你
也可以用刷子把片子展平。
切好的片子保存在-80C，用的时候取出来，在室温下放30-60分钟先，完全干燥后再开始
做实验，片子贴的很牢，不会担心掉下来。
【在 w****l 的大作中提到】
: 譬如是mouse brain之类的比较大的tissue
: 厚度10um左右
s*r
39 楼
有没有用RNAse later之类的溶液灌注老鼠的，
这样的话RNA会不会保存的好一点，in situ
容易一点。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
这样的话RNA会不会保存的好一点，in situ
容易一点。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
w*l
40 楼
我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
我染色的结果也都很好，就是有褶
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
我染色的结果也都很好，就是有褶
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
h*y
41 楼
Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
w*l
42 楼
土了，你这么一说我好像记得那个瓶上也有个iso什么的
【在 h******y 的大作中提到】
: Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
【在 h******y 的大作中提到】
: Methylbutane就是isopentane啊。呵呵
s*r
43 楼
这儿有个网址，希望能有参考，
http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
也有视频
www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
也有视频
www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
h*y
44 楼
忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 w****l 的大作中提到】
: 我用methylbutane其他的和你一样，我试过冷片子放上放tissue，弄好了是没褶，
: 有时候也弄不好，而且慢啊，室温的一下就贴上去了
: 我染色的结果也都很好，就是有褶
:
: PF
: Isop
: 做好
: 子，
: Isop
w*l
45 楼
下回试一下这个trick
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
w*l
46 楼
如果一张片子上要粘好几片tissue呢
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
w*l
47 楼
还有cryostat上有两个温度
一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
那个是你说的温度
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
那个是你说的温度
【在 h******y 的大作中提到】
: 忘了说了，用小刷子把片子展平以后，把你的手指在片子后面放一小会，让片子稍稍化
: 一点，就粘上了。而且保证没有褶。
w*l
48 楼
我粘片子手法和这个视频里一样的，但还是会出褶
【在 s******r 的大作中提到】
: 这儿有个网址，希望能有参考，
: http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
: 也有视频
: www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
【在 s******r 的大作中提到】
: 这儿有个网址，希望能有参考，
: http://pathologyinnovations.com/frozen_section_technique.htm
: 也有视频
: www.youtube.com/watch?v=QEPMRAzBfEg
h*y
49 楼
贴好一个再放下一张。
【在 w****l 的大作中提到】
: 如果一张片子上要粘好几片tissue呢
【在 w****l 的大作中提到】
: 如果一张片子上要粘好几片tissue呢
h*y
50 楼
这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
【在 w****l 的大作中提到】
: 还有cryostat上有两个温度
: 一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
: 那个是你说的温度
【在 w****l 的大作中提到】
: 还有cryostat上有两个温度
: 一个是OC,一个CT，我现在一个是-20，一个-25
: 那个是你说的温度
w*l
51 楼
是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
w*l
52 楼
另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
【在 h******y 的大作中提到】
: 这你得看看你的Cryostat的manual。我指的是标本的温度。
h*y
53 楼
没错
【在 w****l 的大作中提到】
: 是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
【在 w****l 的大作中提到】
: 是不是就是粘着样品的那个小圆台子的温度
h*y
54 楼
我没切过人的组织。
但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
重新结晶，对组织形态破坏很大。
【在 w****l 的大作中提到】
: 另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
: 为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
重新结晶，对组织形态破坏很大。
【在 w****l 的大作中提到】
: 另外flash frozen的tissue,譬如人的spinal cord的切片有什么讲究
: 为了切方便，我又把它冻到oct了，在tissue没化的时候硬的冻得
w*l
55 楼
那像这种情况怎么弄，没有oct的花不太好切啊
【在 h******y 的大作中提到】
: 我没切过人的组织。
: 但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
: OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
: 重新结晶，对组织形态破坏很大。
【在 h******y 的大作中提到】
: 我没切过人的组织。
: 但是我不建议把冻好的组织再冻到OCT里。OCT的温度是室温，如果你把冻好的组织放在
: OCT中，样本外围接触OCT的一圈会发生一个解冻再复冻的过程，这个过程中样本中的水
: 重新结晶，对组织形态破坏很大。
h*y
56 楼
可以用一点OCT把你的样本站在那个Stage上。
【在 w****l 的大作中提到】
: 那像这种情况怎么弄，没有oct的花不太好切啊
【在 w****l 的大作中提到】
: 那像这种情况怎么弄，没有oct的花不太好切啊
D*a
57 楼
我们是泡了蔗糖还要泡加了gelatine的蔗糖，然后包埋是用gelatine和蔗糖包埋，再冻
。有了gelatine之后，－20就软了，－25才能切。不知道是不是更均一一些。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
。有了gelatine之后，－20就软了，－25才能切。不知道是不是更均一一些。
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
l*1
58 楼
Mark.
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
PF
Isop
做好
子，
Isop
【在 h******y 的大作中提到】
: 冰冻组织切片的时候，对环境温度有一定要求。先问你一个问题，你的是新鲜组织直接
: 冷冻，还是固定组织后再过蔗糖然后冰冻。这两种不同处理方法得到的标本，最适宜的
: 温度稍有不同。我的经验是直接冰冻的新鲜组织，切片最佳温度在-20C到-25C。如果是
: 预先固定并经过蔗糖的标本，切片温度稍高一点，-18C左后最佳。
: 我常用的方法是给老鼠心脏灌注，先用50mL PBS，再用50mL 4%PFA，再开颅取脑，4%PF
: A过夜，然后30%蔗糖过夜（等脑子全部沉到底部）。在一个100mL的烧杯里放50mL Isop
: entane，放在干冰上，等温度稳定（丢一小块干冰到isopentane里，没有气泡出来）以
: 后即可以冻组织。把组织从蔗糖里取出，擦干，放在模子里，灌满OCT，摆正位置，做好
: 记号（非常重要，因为OCT冻住以后你就看不见组织了）。用镊子拿着装着组织的模子，
: 迅速放到冷却好的Isopentane中，两分钟后取出来就行了。如果有多个样本，注意Isop
B*s
59 楼
是用的粘附载玻片吗？
相关阅读
庄小伟这样的也算美女？？袁隆平算是转基因大米之父了吧不知不觉就到博四了，有点小慌张状元的偶像，就是铁路华工纪念碑上那个扛着枕木的绿卡申请若140批了，到485的时候需要保持原来研究工作吗？学界的通风报信ted都来害人了求扫盲看见细胞里面蛋白的光点有何意义10几个氨基酸的peptide能进入活细胞吗？有人了解UC Berkeley的Richard Mathies吗Betzig, Nakamura 得奖是正能量诺贝尔奖得主在生物学家中美籍华人博后弃高薪回长沙创业：造福家乡人民 (转载)原创来自对自由和灵性的追求，工头们统统去死吧求两篇文献Position Opening- Research Scientist or Consultant浙大生科院领导走马灯一样换都是诺贝尔惹的祸化学奖抢人？Doug Melton分化出来人beta细胞了