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请教与基因敲除相关的两个名词：嵌合鼠和回交
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请教与基因敲除相关的两个名词：嵌合鼠和回交# Biology - 生物学
t*k
1 楼
一月申了Sapphire Preferred，消费三千给五万点，立批
二月又申Ink Bold Business, 消费一笔给五万点， pending
于是打RECON电话，告知那是personal的。于是又给了一个电话，是business用的。在
此分享给申business卡的。
1-800-453-9719 东部时间早九到晚九
电话打过去，问了几个关于business和个人的问题就批了。在此前已经有两张Ink
Business, 两张Freedom和一月批的Sapphire Preferred，关了Continental OnePass
Plus, 这次加上Ink Bold总共有它家6张卡。
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h*o
2 楼
查了些资料，对这两个名词有所了解，但是不知是否准确。请大家指点。
是不是因为F0代敲除鼠是嵌合体，所以需要做回交？
怎么做回交？
做完回交后的老鼠是不是就是纯背景的老鼠了，他们的后代的每个基因的表型（如毛色
，眼睛颜色）理论上是一模一样的（除被敲除的基因所在的染色体上的基因）
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c*a
3 楼
ink bold可以消费一笔给50k？
targeted吗？
我申的是花5000给50k

【在 t*******k 的大作中提到】
: 一月申了Sapphire Preferred，消费三千给五万点，立批
: 二月又申Ink Bold Business, 消费一笔给五万点， pending
: 于是打RECON电话，告知那是personal的。于是又给了一个电话，是business用的。在
: 此分享给申business卡的。
: 1-800-453-9719 东部时间早九到晚九
: 电话打过去，问了几个关于business和个人的问题就批了。在此前已经有两张Ink
: Business, 两张Freedom和一月批的Sapphire Preferred，关了Continental OnePass
: Plus, 这次加上Ink Bold总共有它家6张卡。
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D*a
4 楼
嵌合鼠的“不纯”和需要回交的老鼠的不纯不是一个概念。
在基因敲除老鼠中，一般把做过基因修饰的胚胎干细胞注射到小鼠的完整胚胎中，借助
小鼠的完整胚胎进行发育。这个过程中为了区分外源胚胎干细胞和受体小鼠细胞，一般
采用两种花色的老鼠比如agouti色的129老鼠注入到黑色B6老鼠中，这样出来的是嵌合
鼠，它的每个细胞都是纯合的，或者是129纯合，或者是B6纯合，但是老鼠全身因为含
有两种品系的老鼠细胞，所以总体上不是“纯系”。
这样的老鼠，理论上生殖系统也会有这两种品系的细胞构成，因此，跟129交配，生出
来的或者是杂合的129-B6的老鼠（不带有转基因），或者是纯合的129老鼠（带有转基
因）。
做回交的老鼠，是比如上面我拿到了纯合129的转基因老鼠，我希望研究这个基因在C3H
这个品系上的应用，那么我用纯的129老鼠和C3H老鼠交配，这样的老鼠出来的每个细胞
都是不纯的，因为每个细胞都含有一条C3H的染色体和一条129的染色体。然后这样的第
一代老鼠F1继续跟C3H老鼠交配，第二代老鼠就含有多一点C3H(大约75%)，少一点129。
循环往复跟C3H老鼠交配，129越来越少，直到达到纯系C3H的标准，一般认为需要10代
以上。
＝做完回交后的老鼠是不是就是纯背景的老鼠了，他们的后代的每个基因的表型（如毛色
，眼睛颜色）理论上是一模一样的（除被敲除的基因所在的染色体上的基因）
-----是的。
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m*s
5 楼
LZNB
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h*o
6 楼
非常感谢Dua， 学到不少知识。
现在的问题是：我的基因敲除老鼠生的小老鼠有黑色也有灰色，而且两种颜色的老鼠都
有（+/-）基因型（这是不是说明被敲除的基因和毛色基因不在同一条染色体上）。现
在不敢继续用他们做实验了，担心不是纯的，难道还要我做10代的回交？那可得1-2年
呀。
有没有其他人也遇到过这种情况，请大家帮忙解释一下。
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r*i
7 楼
gratz.. pai
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D*a
8 楼
啊。。。理论上细胞之间不会交换的吧。。被敲除的基因和毛色基因在不在同一条染色
体上，一个精子也只能最终追溯到一个细胞而来而不是两个细胞，所以精子应该是纯合
细胞。
你能不能详细说说你用的各种老鼠的background和毛色显隐性。。。是不是你ES毛色基
因本来就不是纯合的。。。

【在 h******o 的大作中提到】
: 非常感谢Dua， 学到不少知识。
: 现在的问题是：我的基因敲除老鼠生的小老鼠有黑色也有灰色，而且两种颜色的老鼠都
: 有（+/-）基因型（这是不是说明被敲除的基因和毛色基因不在同一条染色体上）。现
: 在不敢继续用他们做实验了，担心不是纯的，难道还要我做10代的回交？那可得1-2年
: 呀。
: 有没有其他人也遇到过这种情况，请大家帮忙解释一下。
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w*n
9 楼
pai
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h*o
10 楼
是129（ES)和C57BL/6老鼠。
我想无论ES毛色基因是怎么样的，如果和C57bl/6反复回交后，毛色基因应该已经被全
部替换成C57bl/6的毛色基因了，也就是说应该是黑色。可是我目前的老鼠有黑有灰。
高度怀疑没有回交。
网上查的Genotype of mice:
C57Bl/6: C/C, P/P, a/a
129/Sv C/C, P/P, Aw/Aw
black: C (or tyr+); tyrosinase locus
albino (white): c (or tyr-); loss of tyrosinase activity; no eumalanin,
little if any phaoemelanin
C/C black coat
C/c black coat
c/c white coat
Pink eye dilution: p locus; change in shape of the pigment; granule (lighter
black coat and pink eyes)
p/p pink eye light gray coat
P/p black coat and black eye
P/P black coat and black eye
Agouti (white bellied): Aw locus; controls what kind of pigment is deposited
on the hair; agouti color is derived from depositing layers of black and
yellow melanin; a single mutation in the agouti locus causes phenotype; 17
different mutations have been detected in this locus.
Aw/Aw agouti coat
Aw/a agouti coat
a/a no effect

【在 D*a 的大作中提到】
: 啊。。。理论上细胞之间不会交换的吧。。被敲除的基因和毛色基因在不在同一条染色
: 体上，一个精子也只能最终追溯到一个细胞而来而不是两个细胞，所以精子应该是纯合
: 细胞。
: 你能不能详细说说你用的各种老鼠的background和毛色显隐性。。。是不是你ES毛色基
: 因本来就不是纯合的。。。
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a*o
11 楼
同文，ink bold不是花5000给50k么

【在 c*****a 的大作中提到】
: ink bold可以消费一笔给50k？
: targeted吗？
: 我申的是花5000给50k
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D*a
12 楼
C/C是黑色的话，对agouti是隐性，Aw/Aw是agouti显性。灰的是啥？Aw应
该是黄黑的啊。也就是说你母老鼠如果用129(Aw/Aw)，所有小鼠都是agouti色，一半是
纯的，一半是129-B6

【在 h******o 的大作中提到】
: 是129（ES)和C57BL/6老鼠。
: 我想无论ES毛色基因是怎么样的，如果和C57bl/6反复回交后，毛色基因应该已经被全
: 部替换成C57bl/6的毛色基因了，也就是说应该是黑色。可是我目前的老鼠有黑有灰。
: 高度怀疑没有回交。
: 网上查的Genotype of mice:
: C57Bl/6: C/C, P/P, a/a
: 129/Sv C/C, P/P, Aw/Aw
: black: C (or tyr+); tyrosinase locus
: albino (white): c (or tyr-); loss of tyrosinase activity; no eumalanin,
: little if any phaoemelanin
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c*a
13 楼
网上看到有targeted offer，
还看到牛人发信问能不能match offer
结果消费要求从5000减少到3000

【在 a****o 的大作中提到】
: 同文，ink bold不是花5000给50k么
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y*i
14 楼
你这个情况八成是没有回交过
或者就是后来被其他品系污染过
如果实验需要纯系的话 老老实实重新回交吧
如果想确定的话，你可以送genomic DNA去做array
可以定量的看每个品系的percentage
我自己也遇到过要来的老鼠这种情况 最后不得不自己悲剧的回交了一年多

【在 h******o 的大作中提到】
: 是129（ES)和C57BL/6老鼠。
: 我想无论ES毛色基因是怎么样的，如果和C57bl/6反复回交后，毛色基因应该已经被全
: 部替换成C57bl/6的毛色基因了，也就是说应该是黑色。可是我目前的老鼠有黑有灰。
: 高度怀疑没有回交。
: 网上查的Genotype of mice:
: C57Bl/6: C/C, P/P, a/a
: 129/Sv C/C, P/P, Aw/Aw
: black: C (or tyr+); tyrosinase locus
: albino (white): c (or tyr-); loss of tyrosinase activity; no eumalanin,
: little if any phaoemelanin
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d*g
15 楼
chi
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h*o
16 楼
请问哪些实验需要纯系老鼠，哪些又可以不需要纯的？
我做的是肿瘤方面的实验。需要回交得到纯系吗？如不不用纯系老鼠会是什么后果呢？

【在 y****i 的大作中提到】
: 你这个情况八成是没有回交过
: 或者就是后来被其他品系污染过
: 如果实验需要纯系的话 老老实实重新回交吧
: 如果想确定的话，你可以送genomic DNA去做array
: 可以定量的看每个品系的percentage
: 我自己也遇到过要来的老鼠这种情况 最后不得不自己悲剧的回交了一年多
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T*u
17 楼
niu, thx

【在 t*******k 的大作中提到】
: 一月申了Sapphire Preferred，消费三千给五万点，立批
: 二月又申Ink Bold Business, 消费一笔给五万点， pending
: 于是打RECON电话，告知那是personal的。于是又给了一个电话，是business用的。在
: 此分享给申business卡的。
: 1-800-453-9719 东部时间早九到晚九
: 电话打过去，问了几个关于business和个人的问题就批了。在此前已经有两张Ink
: Business, 两张Freedom和一月批的Sapphire Preferred，关了Continental OnePass
: Plus, 这次加上Ink Bold总共有它家6张卡。
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l*1
18 楼
这几个要等本版 癌老大 等其有空了 回帖你吧
要是急的话 站内PM 人家下 如何?
Ps: 有的纯系 肿瘤方面的实验mouse 可能花费 比 航公 "辽宁号" 当初买回白兔的
20 million usd 还要多的美刀和更长的时间吧 >one decade?

【在 h******o 的大作中提到】
: 请问哪些实验需要纯系老鼠，哪些又可以不需要纯的？
: 我做的是肿瘤方面的实验。需要回交得到纯系吗？如不不用纯系老鼠会是什么后果呢？
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y*m
19 楼
Cong!
freedom 不是只能一张么？ visa & master?

【在 t*******k 的大作中提到】
: 一月申了Sapphire Preferred，消费三千给五万点，立批
: 二月又申Ink Bold Business, 消费一笔给五万点， pending
: 于是打RECON电话，告知那是personal的。于是又给了一个电话，是business用的。在
: 此分享给申business卡的。
: 1-800-453-9719 东部时间早九到晚九
: 电话打过去，问了几个关于business和个人的问题就批了。在此前已经有两张Ink
: Business, 两张Freedom和一月批的Sapphire Preferred，关了Continental OnePass
: Plus, 这次加上Ink Bold总共有它家6张卡。
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D*a
20 楼
你到底是拿的别人的老鼠还是自己做的老鼠
拿的别人的话，先开始正常做preliminary的实验，一步一步往下做，后期等到F6的时
候重复一下关键的结果，确保background没有影响，用纯的结果做figures就可以了。
F6一般会在methods里面写一下，但是发表的很多是F6。大家都是到处要老鼠，可以理
解。

【在 h******o 的大作中提到】
: 请问哪些实验需要纯系老鼠，哪些又可以不需要纯的？
: 我做的是肿瘤方面的实验。需要回交得到纯系吗？如不不用纯系老鼠会是什么后果呢？
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c*9
21 楼
thx for sharing
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h*o
22 楼
担心用回交前后的老鼠做的实验的结果会不一样，岂不是浪费时间和经费？

【在 D*a 的大作中提到】
: 你到底是拿的别人的老鼠还是自己做的老鼠
: 拿的别人的话，先开始正常做preliminary的实验，一步一步往下做，后期等到F6的时
: 候重复一下关键的结果，确保background没有影响，用纯的结果做figures就可以了。
: F6一般会在methods里面写一下，但是发表的很多是F6。大家都是到处要老鼠，可以理
: 解。
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t*k
23 楼
这个是收到信的，可能是已有Ink Business卡的缘故。

【在 c*****a 的大作中提到】
: ink bold可以消费一笔给50k？
: targeted吗？
: 我申的是花5000给50k
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l*1
24 楼
恩 最佳是捞现成的flox的老鼠跟不同的cre和疾病gene交 省了十年工夫 哈
LZ
if you want to know more about this topic,
pls refer one old post:
同主题阅读：Re: 据说做果蝇和线虫的都是相亲相爱大家庭，有人现身说法一下
[版面:生物学][首篇作者：Dua] , 2012年08月23日
that post reply:
发信人: Oncogene (何时问天), 信区: Biology
标 题: Re: 据说做果蝇和线虫的都是相亲相爱大家庭，有人现身说法一下
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Aug 24 11:37:30 2012, 美东)
其实还有一个很重要的原因，就是以前很多实验室一个老鼠就可以维持好多人好多年
的科研，所以别人来要，总是要担心自己的生计。很正常。
现在做knockout transgenic knockin啥的越来越容易，而且JAX也在努力收集散养在
各个实验室的老鼠系，IKMC正在试图做遍所有基因的KO，所以这个问题会慢慢得到解决。

=======
发信人: Dua (Dua), 信区: Biology
标 题: Re: 据说做果蝇和线虫的都是相亲相爱大家庭，有人现身说法一下
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Aug 24 15:46:37 2012, 美东)
一只flox的老鼠跟不同的cre和疾病gene交，做10年也做不完。很多基因的功能其实并
不是那么清晰都发现完了的。我说的做十年也不是说从CNS做到两三分的杂志的那种。
有时候是已经建立了合作了，相同领域的人又来要，就不是做老鼠的人决定给不给了。
我说的合作是做老鼠的人是n作甚至不进作者名单的那种合作。
link:
http://www.mitbbs.com/article_t1/Biology/31720125_0_2.html
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h*o
25 楼
我看了些用基因敲除鼠发表的文章，很多都没有写明回交了多少代呀。
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