logo
Redian新闻
>未名空间
>Biology - 生物学
>
请问双荧光reporter老鼠的问题
avatar
请问双荧光reporter老鼠的问题# Biology - 生物学
p*b
1 楼
大家好， 我想做一个双荧光reporter老鼠， 打算构建一个全身表达EGFP和mCherry的
reporter老鼠， 其中mCherry受某个miRNA调控， EGFP不受miRNA调控（作为control）
，因为miRNA结合可能导致mRNA降解， 所以我想把EGFP和mCherry分别表达在不同的
mRNA上面， 请问这样设计可行吗？ pUBC-EGFP-PolyA-pCAG-mCherry-miRNA binding
site-PolyA
谢谢了，请多指教
avatar
m*5
2 楼
Looks OK, but you might want to test this system in a cell line model first
avatar
a*l
3 楼
How big the plasmid will be? Do you need a IRES in between of Cherry and
EGFP?
avatar
w*e
4 楼
为什么不就造一个pCAG-mCherry-miRNA binding : site-PolyA的小鼠，然后再和全身
都表达gfp的小鼠再杂交呢？这样还简单点，以后你这个简单的小鼠还可以更灵活运用
。。。

【在 p******b 的大作中提到】
: 大家好， 我想做一个双荧光reporter老鼠， 打算构建一个全身表达EGFP和mCherry的
: reporter老鼠， 其中mCherry受某个miRNA调控， EGFP不受miRNA调控（作为control）
: ，因为miRNA结合可能导致mRNA降解， 所以我想把EGFP和mCherry分别表达在不同的
: mRNA上面， 请问这样设计可行吗？ pUBC-EGFP-PolyA-pCAG-mCherry-miRNA binding
: site-PolyA
: 谢谢了，请多指教
avatar
m*5
5 楼
我倒觉得楼主这种设计方法对照严谨，都整合在一个位点上，比较清楚是不是miRNA在
起作用

【在 w*e 的大作中提到】
: 为什么不就造一个pCAG-mCherry-miRNA binding : site-PolyA的小鼠，然后再和全身
: 都表达gfp的小鼠再杂交呢？这样还简单点，以后你这个简单的小鼠还可以更灵活运用
: 。。。
avatar
s*a
6 楼
IRES是“one RNA, two proteins”

【在 a****l 的大作中提到】
: How big the plasmid will be? Do you need a IRES in between of Cherry and
: EGFP?
avatar
p*b
7 楼
谢谢大家了， 这么热情的帮忙，
关于promoter， 大家认为是用同一种promoter， 还是两个不同的promoter好呢？
我目前倾向于两个不同的promoter （UBC 和CAG）分别表达GFP和mCHERRY, 但是如果用
同一种promoter的话，GFP和mCHERRY的表达水平会更接近，更利于比较，不过听说用同
一种promoter的话，质粒本身会有重组， 所以很纠结是用同一promoter还是两个
promoter
还有关于polyA的，也是相同的问题， 是不是得用两个不同的polyA会好一些呢？
真心感谢!
avatar
s*x
8 楼
Use the same promoter will be much better.
I don't think the recombination will be a big problem for you. The rate is
very low and once happened you can tell from loss of control GFP.
相关阅读
2014十大科技进展之一GDF11抗衰老受到质疑发包子为自己找工作和家里LD考试求祝福！对环境样品 primer 的 specificity 怎么查外行有个搞不懂的问题想请教，细菌病毒存在的意义是什么？2015 M&M Portland会议 求宾馆合住生物这种苦逼专业为什么这么多中国人学？包子求两篇论文OPT挂名在实验室volunteer 生娃“间谍案”的集体失语说明千人计划就是几千头猪Cornell的Shahin Rafii有人了解吗求审稿，生物elife影响因子和“间谍案”的点击数说明千老全是猪大家说应该放弃青千改行吗？Rise of (Azure) Machine Learning求助：查一个基因表达和某种疾病生存曲线的数据库菜鸟求教stranded RNA-seq美国生物和化学相关试剂运输回国[转发] Multiple Group Leader positions in Shanghai (转载)今年的American liver foundation Postdoc Fellowship请教UCSC ChIP-seq数据的分析
logo
联系我们隐私协议©2024 redian.news
Redian新闻
Redian.news刊载任何文章，不代表同意其说法或描述，仅为提供更多信息，也不构成任何建议。文章信息的合法性及真实性由其作者负责，与Redian.news及其运营公司无关。欢迎投稿，如发现稿件侵权，或作者不愿在本网发表文章，请版权拥有者通知本网处理。