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问个microtiter plate reader样品稀释的问题

问个microtiter plate reader样品稀释的问题# Biology - 生物学

h*r2013-04-01 07:04

1 楼

我圡，没怎么用过microtiter plate reader，都是用分光光度计来着，但是太费比色
皿。准备去别的实验室蹭microtiter plate reader，问题是OD超过1或者2是不是就要
稀释呢?问过他们实验室的人，也不清楚。请教了！
另外用nanodrop测DNA呢？上次测了个500ng/ul,应该也就不准了吧？
多谢！

s*g2013-04-01 07:04

2 楼

啥试验啊？

i*02013-04-01 07:04

3 楼

To be honest, according to my experiences, the worst reliability of a plate
reader is the absorption assays. I have tried Bradford or OD280, both give
high standard deviation. However, if you just want a guess, try using your
sample at original conc, 1:1 dilution, and 1:4 dilution in triplicate. You'd
better have BSA standards at least 5 concentrations in the same plate in
triplicate. These will give you a relatively reliable readout. OD is linear
at 0.5 to 1, roughly. good luck

i*02013-04-01 07:04

4 楼

If you just want to normalize protein concentration for immunoblot, just use
a nano drop and read OD280.

h*r2013-04-01 07:04

5 楼

我做微生物的lacz assay,手上待测和重新engineer的promoter有30多个吧，用lacZ的
酶活来看不同promoter的activity.有的还得用不同的诱导条件。
想在自己实验室反应完全后再出去测。
没想到这么挫啊！用分光光度计测还行，就是累和太费比色皿。